Re: 请同行帮助解决分子克隆问题# Biology - 生物学
r*o
1 楼
对的。我一般是这样，不加insert,长一大堆菌落，加了insert菌落少了
很多，三分之一。但是随便挑几个做miniprep 和restriction digestion,都
有insert 出来。
两个引物的酶切位点旁边要有足够多的保护碱基，我至少用六个bp.这样
对PCR产物的酶切才能充分。另外，引物合成是从3'到5',到了5'端容易出现错误，
如果保护碱基够长，即使合成在5'端出现错误，也只是改变一下保护碱基序列
而已，酶切位点的序列还是正确的。
很多，三分之一。但是随便挑几个做miniprep 和restriction digestion,都
有insert 出来。
两个引物的酶切位点旁边要有足够多的保护碱基，我至少用六个bp.这样
对PCR产物的酶切才能充分。另外，引物合成是从3'到5',到了5'端容易出现错误，
如果保护碱基够长，即使合成在5'端出现错误，也只是改变一下保护碱基序列
而已，酶切位点的序列还是正确的。