从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记(十五)# Biology - 生物学
r*o
1 楼
本文献给YL
(十五)AP1的活性测定
第二个模块的实验,DNA affinity chromatography之后我们又跑了一个更精细的
Gel filtration,用的是Amersham卖的Superose 6预装柱子。纯化步骤就只有这么多了。
剩下的就是一些活性测定。无论是sephacryl分出来的组分还是DNA affinity column分出
来的组分,我们都测试了AP-1的活性。方法呢就只有两种,一种是凝胶迁移率变动分析
(EMSA),另一种是DNA水解酶I 足迹分析 (DNase I footprinting assay),都可以用来分析
蛋白与特定DNA的结合能力。我过去没做过这两种实验,所以感觉很新奇,做的也格外卖
力,结果也还不错。
Gel Mobility-shift assay 原理很简单,把蛋白质样品和P32标记的寡聚核苷酸探针
一起孵育十几分钟, 然后拿去跑一个低浓度acrylamide胶。如果探针结合上蛋白了,速度
会变慢很多,就会停滞在胶的上段;如果没有结合上,探针就会自由的跑到胶的下段去。
然后把胶拿去做放射自显影就行了。跑胶的装置
(十五)AP1的活性测定
第二个模块的实验,DNA affinity chromatography之后我们又跑了一个更精细的
Gel filtration,用的是Amersham卖的Superose 6预装柱子。纯化步骤就只有这么多了。
剩下的就是一些活性测定。无论是sephacryl分出来的组分还是DNA affinity column分出
来的组分,我们都测试了AP-1的活性。方法呢就只有两种,一种是凝胶迁移率变动分析
(EMSA),另一种是DNA水解酶I 足迹分析 (DNase I footprinting assay),都可以用来分析
蛋白与特定DNA的结合能力。我过去没做过这两种实验,所以感觉很新奇,做的也格外卖
力,结果也还不错。
Gel Mobility-shift assay 原理很简单,把蛋白质样品和P32标记的寡聚核苷酸探针
一起孵育十几分钟, 然后拿去跑一个低浓度acrylamide胶。如果探针结合上蛋白了,速度
会变慢很多,就会停滞在胶的上段;如果没有结合上,探针就会自由的跑到胶的下段去。
然后把胶拿去做放射自显影就行了。跑胶的装置