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【虎年吉祥】请教牛人们克隆问题!
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【虎年吉祥】请教牛人们克隆问题!# Biology - 生物学
m*j
1
美国的博士后在发达国家里算是pay的最少的了吧,最近看广告,发现澳洲,欧洲的很多博
后价码比美国高,加拿大pay的比美国稍微高一些,考虑到美国的税非常高,而且奥巴马继
续做总统的话这research又得冷四年, 以后faculty基本上大部分人都指望不了,这说明
美国博后是越来越没做头了吧.
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H*7
2
日本人(?)咬着别扭的国语装B。兄弟俩还有这么大口音不同?就不会找个配音的?
其他对战国生活的
常识性错识也不少,说是清朝还差不多。
一惯的说教性电影,家啊,国啊,和平啊,给不给国家丢脸啊。再硬塞个女的进来。
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d*a
3
学过历史之后,发现,圆明园不但是清廷的痛;而且是很多后来的中国人的余痛。
有那么多人痛恨清廷,有那么多人痛恨清廷的统治者。清朝时期,西方列强对中国
的入侵,最严重的受害者,应该就是清廷,因为,江山社稷都是他们的。基于对清廷及
其统治者的痛恨,按说,那些排满的人士、那些反封建的人士,他们直面西方列强对清
廷的破坏时,应该高兴才是。但事实是,他们并没有高兴。不但他们高兴不起来,就连
他们之后,进入新体制、进入新时代对清廷仇视的大多数人,在面对那一段被侵略的历
史时,都还时时有隐痛郁积在胸中,久久无法释怀。
为什么会这么复杂,这么矛盾呢?
其实,这一切,正好说明了以下道理:
从小历史来看,无论大家对清朝怀了怎样的态度,对清朝的形形色色的人物怀了怎
样的情感,都无法否认清朝就是中国历史的一部分,也无法割裂清朝在中国历史中的衔
接作用。
从大历史来看,无论是怎样的统治,在历史的长河中,它都只是或长或短的一节,
贬斥,减少不了它存在的年限;粉饰,也增加不了它生命的厚度。
从情感的角度来说,在历史的长河中,政权都是在不断更迭的。我们爱自己的国家
,爱的不是任何特定的统治。我们爱自己的国家,爱的是这块土地上绵延不绝的文化,
爱的是这个民族生生不息的精神。
这里,来说一说清朝时期,关于圆明园的事情。
本文出自清人陈康祺的笔记《郎潜纪闻初笔》中的《沈侍御谏罢重修圆明园》一节。
圆明园的旧址,原本是明朝皇亲国戚徐伟(生平不详)的别墅。
到了清圣祖康熙朝,这里的名字还是畅春园。
清世宗雍正没有继位登基之前,康熙帝下令,在畅春园中开辟土地、建筑室屋,作
为雍正读书的处所。一切办妥之后,康熙帝亲自赐名,命此园为“圆明”。
这就是圆明园的简要由来。
从雍正帝之后,就不再有畅春园这一称呼了。
圆明园距离平则门二十华里。
平则门,也就是后来的阜成门。
阜成门位于京师西城区中部,元代时,这里是大都城平则门的所在地;到了明、清
两代,这里是京师内城的九门之一。由于这里是明、清两代自门头沟运煤进城的重要通
道,所以,这个门还有“煤门”的称呼。二十世纪五十年代以后,阜成门及内城的城墙
不断被拆除,最终因建设施工,阜成门等老城就荡然无存了。
清朝的皇帝,避暑或者外出巡幸,每一年之中,都会圆明园之中停驻,所有时间累
加起来有好几个月。这在清朝是很常见的事。
清文宗咸丰庚申(咸丰十年,公元1860年,农历庚申),西方的英、法两国,组成
侵华联军,大举入侵,从天津大沽口进攻,逼至北京。咸丰帝仓皇出逃,京师的亭台苑
囿,被联军荼毒破坏,大好的皇家园林,在兵火之中,化作了灰烬。
咸丰帝仓皇出逃的第二年,他在热河驾崩。
清朝二百一十八年的基业,京师不能驻守;万人之上的皇帝,出逃到热河之后,死
在了外面。不知道,这是一种悲哀,还是一个讽刺?
想一想,咸丰帝要是知道几代祖先的基业、几代经营的皇家园林已经被西方军队破
坏、焚烧,他的心,应该会深深地伤痛吧!
清穆宗同治即位时年仅六岁,国家大政基本上都是由两宫(孝贞慈安皇太后、孝钦
慈禧皇太后)操持。这一时期,也曾有满洲的御史上疏,建议修复被西方军队破坏的圆
明园。但是,两宫并没有采纳这位御史的奏折,而且,在接到这位御史的上疏之后,清
廷还下旨,严厉地对这一建议进行了斥责。
到了同治十一年(公元1872年),同治帝时年十七岁。本年农历九月十五,同治帝
大婚。
大婚,意味着成人。
成人,意味着就可以亲政。
这一年,广东有一个人,名叫李光照。这个人,很有头脑,他对荣华富贵有自己的
想法和计划。瞅中机会之后,李光照向内务府呈请,说是自己可以无偿提供花草树木,
作为个人捐献,用作重修淀园(圆明园)之用。
话说,同治帝很是孝顺,对重修圆明园的想法非常感动。
也有人说,同治帝心中,其实有他自己的小算盘,重修圆明园,就是要摆脱两宫的
束缚,想把两宫皇太后移走。
同治帝同意重修圆明园的对外说辞是:
他自己常常想着,两宫皇太后听政理国,非常辛苦。但是,京师虽大,现在却没有
什么可以让两位皇太后悠游、娱乐、休闲、歇息的地方。所以,他就答应了李光照向内
务府提出的呈请,许可重修圆明园。
这样的说辞,看起来当然很孝顺。
没有毛病!
李光照的实际情况怎么样呢?其实,他就是一个穷人家里的子弟。虽然家贫,但是
,李光照很懂得钻营,所以,他有主政者宠信的身边人作为护身符。然后,李光照借着
自己所依傍的后台人物,游历了川、楚、江、浙等主要的木材产区。游历之中,李光照
拉大旗做幌子,说自己是受了某某部门的差遣、说自己与某某人关系亲密,还说自己要
为重修圆明园筹集花草树木。然后,他到处勒索,骗财骗物,中饱私囊,大大地赚了好
多银子。
李光照的行为,最后还是被朝廷察觉。他的奸谋诡计被识破之后,最终被按照律令
进行了惩处。这样一来,也使得民间少了一些借虎皮进行为非作歹骚扰。
当时,提议重修复兴圆明园的事情之后,朝廷内外,都有些错愕。
虽然惊愕,但是,敢于直言进谏,触犯天听的人,还是寥寥无几。
都察院开始也没有声音。
很快,都察院的御史沈桐甫(淮)率先上书力争,以为重修圆明园一事不可行。
同治帝对沈桐甫的上书力争异常愤怒,并立刻安排召见他。
召见中,同治帝对沈桐甫讲了大孝养志的内涵。
关于大孝养志,顺便简单看看古人是怎么说的:
汉代桓宽《盐铁论·孝养》:
“故上孝养志,其次养色,其次养体。”
宋代苏轼《赐正议大夫同知枢密院安焘乞外郡不许批答》之一:
“夫荣亲莫大於功名,养志不专於甘旨。”
清代陈梦雷《抒哀赋》:
“体养志以娱亲兮,驾言返於故闾。”
同治帝讲完大孝养志的一席话之后,沈桐甫一时还难以应对。
写文章、写奏折是一回事,应变、应答是另外一回事。
沈桐甫平常就不善言辞,等同治帝讲完大道理之后,他半天都说不出话来。
缓了缓神,面对皇帝盛怒之下的场面,沈桐甫十分胆怯、小心谨慎地回答到:
“重修圆明园一事,在孝道上来说,是无可非议的。但是,这个时候重修,时机不
对;重修过程中,可能还会靡费甚多;如果真是这样,肯定会对皇上的圣德有所挂累。”
沈桐甫退朝之后,就来拜访过笔记作者陈康祺。
陈康祺就沈桐甫上书力争重修圆明园一事,说了自己的看法:
“皇上是圣明的!年丈最好再补写一份奏折。奏折的语气尽量平缓一些,把重修圆
明园的利害讲清楚。这样,或许可以改变皇上的心意。”
“您可以这样着笔:天子是要用整个天下来供养的,但凡可以博得皇太后欢心的事
,都是大孝。这样的事情,怎么可能需要去顾惜钱财呢?但是,圆明园被毁坏,并不是
因为天灾,而是兵祸。现今的天下,时事非常艰难,国家的仇敌还没有离开皇上的土地
,这个时候,这种状况,即便是国库充盈,也不应该突然就动议重修圆明园之事。更何
况,国家财力并不宽裕。”
“重修圆明园,皇上的起心动念,原本就是为了两宫皇太后能够颐养天年。但是,
臣下担心的是,圆明园重新修成之后,两宫皇太后入住其中,睹物思人,想起先帝出狩
热河,京师被外国军队荼毒,皇家园林付之一炬,先帝驾崩在外,反倒会心中伤痛,愀
然不乐!”
“既然皇上有重修圆明园的念头,皇上有孝亲的情怀,那么,皇上更应该自强不息
,时时刻刻以继承先祖、先皇的遗志、以治理好国政为信念。这样,才可以仰慰文宗皇
帝(咸丰)的在天之灵、才可以宽慰两宫皇太后的厚望之心。这样的话,对于孝道的发
扬广大,才是最有意义的。”
“如果按照这个思路来写奏折,皇上一定会有所感悟!”
沈桐甫对于笔记作者陈康祺的建议,他认为非常有道理,也非常得体;他还打算,
第二天就起草修订上书的折子,第三天就正式上书。
随后,就有侍御游百川袖存奏折,在朝会的时候,当廷谏诤。
朝堂之上游百川直言争辩,一口气讲了数百字,声音响亮、语气轩昂,其气势似乎
都可以把大殿上的瓦片震落。
当时,咸丰帝并没有马上就收回成命。
对于游百川的憨厚刚直,敢于直接冒犯龙颜,咸丰帝也没有当廷谴责。
结果,重修圆明园一事,最终还是作罢。
笔记作者陈康祺感叹道:
这般明君贤臣的事情,真可谓是大清的盛景啊!
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q*d
4
Plasmid pYD1-CipA1(3)-EGII was obtained by cotransforming G10A1-HR1, G10A1-
HR2,G10A1-HR3, G10A1-HR4, HisG-EGII, and DrdI/NheI-digested pYD1-
CipA1(3) into EBY100. All plasmids were purified from S. cerevisiae and
thentransformed into DH5a, recovered, and confirmed by DNA sequencing.
以上是我在一篇文章里找到的句子,有两个问题不明白,特来请教:
1.这是不是一种多片段克隆的方法,他是把vector和n个要插入的片段纯化之后不用连
接酶直接转化大肠,这种方法成功率如何?多少个片段都可以吗?
2.他的质粒纯化怎么用酵母呢,有什么优点吗?
谢谢大家,因为我有一堆克隆要做,急需要多片段克隆的方法,一个载体有14个片段要
插入!
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a*n
5
美国的税应该说是比较低的,而且物价在发达国家里头基本上是最低的,所以postdoc
工资和其他国家比不算低。
据说澳洲工资 = 美国工资*1.8

【在 m**j 的大作中提到】
: 美国的博士后在发达国家里算是pay的最少的了吧,最近看广告,发现澳洲,欧洲的很多博
: 后价码比美国高,加拿大pay的比美国稍微高一些,考虑到美国的税非常高,而且奥巴马继
: 续做总统的话这research又得冷四年, 以后faculty基本上大部分人都指望不了,这说明
: 美国博后是越来越没做头了吧.

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b*d
6
是个棒子,长得挺像小沈阳的~~~
不塞个女的,还要另外帮大哥叫ji

【在 H******7 的大作中提到】
: 日本人(?)咬着别扭的国语装B。兄弟俩还有这么大口音不同?就不会找个配音的?
: 其他对战国生活的
: 常识性错识也不少,说是清朝还差不多。
: 一惯的说教性电影,家啊,国啊,和平啊,给不给国家丢脸啊。再硬塞个女的进来。

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h*r
7
酵母自己有这样的重组系统,只要片段之间有足够的overlap就可以了。这个叫cloning
by homologous recombination in Saccharomyces cerevisiae
可以看看这个paper,DNA assembler, an in vivo genetic method for rapid
construction of biochemical pathways
P.S
You need a specific strain and plasmid. Go to
http://www.fgsc.net/gpkit.html
and order FGSC 9721 and pRS426.
(FGSC菌株最便宜)
You can follow the knockout protocol to create a long piece of DNA in yeast
through homologous recombination.
http://www.dartmouth.edu/~neurosporagenome/knockout_cassettes.
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m*j
8
我发现我博后工资25%要交税,房租占了工资的1/3,剩下来那点钱根本干不了啥事,加拿
大的税是不是只有10%?

postdoc

【在 a****n 的大作中提到】
: 美国的税应该说是比较低的,而且物价在发达国家里头基本上是最低的,所以postdoc
: 工资和其他国家比不算低。
: 据说澳洲工资 = 美国工资*1.8

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q*8
9
hahaha
中间许三多和成龙被抓那段笑死我了

【在 b****d 的大作中提到】
: 是个棒子,长得挺像小沈阳的~~~
: 不塞个女的,还要另外帮大哥叫ji

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q*d
10
太感谢了,这个方法是实在太方便了
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a*n
11
加拿大的税10%???
同学,你在加拿大能拿到50%税前工资就不错了,当然加拿大是全民医保。

【在 m**j 的大作中提到】
: 我发现我博后工资25%要交税,房租占了工资的1/3,剩下来那点钱根本干不了啥事,加拿
: 大的税是不是只有10%?
:
: postdoc

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m*d
12
那个女的不怎么样吧
还不如酋长老婆

【在 b****d 的大作中提到】
: 是个棒子,长得挺像小沈阳的~~~
: 不塞个女的,还要另外帮大哥叫ji

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b*n
13
50%夸张了,2/3问题不大吧

【在 a****n 的大作中提到】
: 加拿大的税10%???
: 同学,你在加拿大能拿到50%税前工资就不错了,当然加拿大是全民医保。

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s*y
14
那帮野蛮人,包括酋长的老婆,都是成龙的徒弟,新七小福

【在 m*****d 的大作中提到】
: 那个女的不怎么样吧
: 还不如酋长老婆

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e*r
15
德国, 法国是拿到手2000欧左右,英国2000英磅。 懊洲多点, 但是生活费
会高很多。 只有瑞士钱真的比美国多

【在 m**j 的大作中提到】
: 美国的博士后在发达国家里算是pay的最少的了吧,最近看广告,发现澳洲,欧洲的很多博
: 后价码比美国高,加拿大pay的比美国稍微高一些,考虑到美国的税非常高,而且奥巴马继
: 续做总统的话这research又得冷四年, 以后faculty基本上大部分人都指望不了,这说明
: 美国博后是越来越没做头了吧.

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H*r
16
看最后演员表
那帮人除了女的以外基本全找的蒙古族演员啊

【在 s*y 的大作中提到】
: 那帮野蛮人,包括酋长的老婆,都是成龙的徒弟,新七小福
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m*j
17
没想到一年4万多竟然是全球最高,看来做博后真是白菜价.

【在 e*****r 的大作中提到】
: 德国, 法国是拿到手2000欧左右,英国2000英磅。 懊洲多点, 但是生活费
: 会高很多。 只有瑞士钱真的比美国多

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J*i
18
酋长老婆最后被弩箭射中的部位实在是太没人性了...

【在 m*****d 的大作中提到】
: 那个女的不怎么样吧
: 还不如酋长老婆

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e*r
19
我认识的去瑞士做POSTDOC, 一般是折合6-7万美元

【在 m**j 的大作中提到】
: 没想到一年4万多竟然是全球最高,看来做博后真是白菜价.
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b*i
20
成龙就是一烂片之王

【在 J*******i 的大作中提到】
: 酋长老婆最后被弩箭射中的部位实在是太没人性了...
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c*r
21
扯,澳洲8-9万澳元很正常
瑞士一定比美国高

【在 m**j 的大作中提到】
: 没想到一年4万多竟然是全球最高,看来做博后真是白菜价.
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e*h
22
同意.
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s*e
23
美国的税非常高?您没查过西欧特别是北欧的税制吧……

【在 m**j 的大作中提到】
: 美国的博士后在发达国家里算是pay的最少的了吧,最近看广告,发现澳洲,欧洲的很多博
: 后价码比美国高,加拿大pay的比美国稍微高一些,考虑到美国的税非常高,而且奥巴马继
: 续做总统的话这research又得冷四年, 以后faculty基本上大部分人都指望不了,这说明
: 美国博后是越来越没做头了吧.

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v3
24
基本上又一部国产烂片。

【在 H******7 的大作中提到】
: 日本人(?)咬着别扭的国语装B。兄弟俩还有这么大口音不同?就不会找个配音的?
: 其他对战国生活的
: 常识性错识也不少,说是清朝还差不多。
: 一惯的说教性电影,家啊,国啊,和平啊,给不给国家丢脸啊。再硬塞个女的进来。

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m*j
25
我周围很多博后都考虑回国了,虽然他们在美国拿着全球最高的pay,真是奇怪

【在 s***e 的大作中提到】
: 美国的税非常高?您没查过西欧特别是北欧的税制吧……
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s*e
26
你哪只眼睛看见说美国的POSTDOC全球最高了?

【在 m**j 的大作中提到】
: 我周围很多博后都考虑回国了,虽然他们在美国拿着全球最高的pay,真是奇怪
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