请问各位cloning高手# Biology - 生物学u*a2011-06-13 07:061 楼老妈的本子坏掉了, 明晚之前必须给买一台新的. 除了bestbuy microcenter还有什么地方有卖的...不想在bestbuy买. 上次也是急用笔记本, 在bestbuy买了台, 事后一查在他家网站上的价格比local店便宜100多.
j*l2011-06-13 07:062 楼如果只想replace一段20bp,比如说将T7改成SP6,但旁边又没有什么restriction site,什么方法最好? 可以用point mutation的方法么?
f*m2011-06-13 07:063 楼amazon overnight shipping. no tax【在 u******a 的大作中提到】: 老妈的本子坏掉了, 明晚之前必须给买一台新的. 除了bestbuy microcenter还有什么: 地方有卖的...: 不想在bestbuy买. 上次也是急用笔记本, 在bestbuy买了台, 事后一查在他家网站上的: 价格比local店便宜100多.
j*x2011-06-13 07:064 楼如果质粒不特别大的话,感觉比较简单的策略就是NEB的突变策略。在想删除的位点两侧设计“背靠背”引物(必须5'端磷酸化修饰),把你需要替换的序列设计在引物上。扩增整个质粒,PCR产物就是线性化的目的质粒序列,然后self-ligation即可。,【在 j***l 的大作中提到】: 如果只想replace一段20bp,比如说将T7改成SP6,但旁边又没有什么restriction site,: 什么方法最好? 可以用point mutation的方法么?
l*e2011-06-13 07:065 楼如果900加税可以的话,这个还不错。http://www.microcenter.com/single_product_results.phtml?product
n*e2011-06-13 07:066 楼这个不难,用overlapping PCR,先做两段PCR产物含有SP6的,再融合一块,酶切后进入同样切过的质粒。需要订4个引物,两端两个,中间含有SP6的两个。两端酶切位点选择片段不长不短,几百个bp合适PCR的就好。,【在 j***l 的大作中提到】: 如果只想replace一段20bp,比如说将T7改成SP6,但旁边又没有什么restriction site,: 什么方法最好? 可以用point mutation的方法么?
a*t2011-06-13 07:067 楼MC【在 u******a 的大作中提到】: 老妈的本子坏掉了, 明晚之前必须给买一台新的. 除了bestbuy microcenter还有什么: 地方有卖的...: 不想在bestbuy买. 上次也是急用笔记本, 在bestbuy买了台, 事后一查在他家网站上的: 价格比local店便宜100多.
o*r2011-06-13 07:068 楼quikchange multi sites,【在 j***l 的大作中提到】: 如果只想replace一段20bp,比如说将T7改成SP6,但旁边又没有什么restriction site,: 什么方法最好? 可以用point mutation的方法么?
u*a2011-06-13 07:069 楼是很好, 可惜我妈不用mac...【在 l*******e 的大作中提到】: 如果900加税可以的话,这个还不错。: http://www.microcenter.com/single_product_results.phtml?product
C*m2011-06-13 07:0610 楼en, good one. 用 InFusion,引物就不用磷酸化了,两个引物就可以了。【在 j****x 的大作中提到】: 如果质粒不特别大的话,感觉比较简单的策略就是NEB的突变策略。: 在想删除的位点两侧设计“背靠背”引物(必须5'端磷酸化修饰),把你需要替换的序: 列设计在引物上。扩增整个质粒,PCR产物就是线性化的目的质粒序列,然后self-: ligation即可。: : ,
u*a2011-06-13 07:0611 楼更新一下. 发现microcenter明显便宜, 逛店的时候无聊google了一下microcenter,前段时间竟然有不到1k的13寸128g ssd mba么? 太神奇了.不过女人买电脑主要还是看外型. 最后还是在bestbuy买的.【在 u******a 的大作中提到】: 老妈的本子坏掉了, 明晚之前必须给买一台新的. 除了bestbuy microcenter还有什么: 地方有卖的...: 不想在bestbuy买. 上次也是急用笔记本, 在bestbuy买了台, 事后一查在他家网站上的: 价格比local店便宜100多.