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做IP的时候 pull down下来的蛋白总是量不一样
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做IP的时候 pull down下来的蛋白总是量不一样# Biology - 生物学
S*d
1 楼
【 以下文字转载自 SanFrancisco 讨论区 】
发信人: Swimkid (小鱼儿), 信区: SanFrancisco
标 题: 学校分班是强迫吗？家长能不能要求调整?
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Sep 6 21:06:22 2012, 美东)
有这个权利吗?
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b*n
2 楼
找不到 Engineering Journal 的 Average Ranking 呀
谢谢
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r*k
3 楼
做IP的时候 经常一下做4-5个不同的sample，用一个抗体去pull down。但是最后pull
down下来的total蛋白总是量不一致，很难看。 大家都会在pre-clean了以后先去
quantification一下蛋白量 再加抗体做IP吗？ 还是run 两次western，用第一次的去
调平？？谢谢
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w*e
4 楼
你若有好的理由，可以去和学校要求，有时候可以的。我见到过一个孩子才从国内过来
，换到了一个有可以说话的朋友的班上。
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e*s
5 楼
IP后，总蛋白应该非常低吧。测得准吗？

pull

【在 r******k 的大作中提到】
: 做IP的时候 经常一下做4-5个不同的sample，用一个抗体去pull down。但是最后pull
: down下来的total蛋白总是量不一致，很难看。 大家都会在pre-clean了以后先去
: quantification一下蛋白量 再加抗体做IP吗？ 还是run 两次western，用第一次的去
: 调平？？谢谢
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m*1
6 楼
我们同学有和老师处不来换了的.
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y*u
7 楼
理论上IP后洗过后总蛋白量的区别都是系统误差级别的。
如果真的差别很大要考虑是不是某一步protocol有问题。

pull

【在 r******k 的大作中提到】
: 做IP的时候 经常一下做4-5个不同的sample，用一个抗体去pull down。但是最后pull
: down下来的total蛋白总是量不一致，很难看。 大家都会在pre-clean了以后先去
: quantification一下蛋白量 再加抗体做IP吗？ 还是run 两次western，用第一次的去
: 调平？？谢谢
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r*k
8 楼
主要是我用虽然都是一种cell line 但是每个cell line都有不同的mutation。 可能是
我grow细胞的时候就没grow好。 四种细胞细胞数不一样导致总蛋白量不同~ =（

【在 y*********u 的大作中提到】
: 理论上IP后洗过后总蛋白量的区别都是系统误差级别的。
: 如果真的差别很大要考虑是不是某一步protocol有问题。
:
: pull
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r*k
9 楼
主要是我用虽然都是一种cell line 但是每个cell line都有不同的mutation。 可能是
我grow细胞的时候就没grow好。 四种细胞细胞数不一样导致总蛋白量不同~ =（

【在 y*********u 的大作中提到】
: 理论上IP后洗过后总蛋白量的区别都是系统误差级别的。
: 如果真的差别很大要考虑是不是某一步protocol有问题。
:
: pull
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r*k
10 楼
主要是我用虽然都是一种cell line 但是每个cell line都有不同的mutation。 可能是
我grow细胞的时候就没grow好。 四种细胞细胞数不一样导致总蛋白量不同~ =（

【在 y*********u 的大作中提到】
: 理论上IP后洗过后总蛋白量的区别都是系统误差级别的。
: 如果真的差别很大要考虑是不是某一步protocol有问题。
:
: pull
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m*a
11 楼
我也总是遇到楼主的问题，一些做IP的人跟我说，用第一次WB的结果去调上样量。
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r*k
12 楼
好的！ 学习了！ 我总是在关键的地方的total protein 弱掉！！！崩溃！

【在 m***a 的大作中提到】
: 我也总是遇到楼主的问题，一些做IP的人跟我说，用第一次WB的结果去调上样量。
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t*m
13 楼
难道不是数了细胞，然后用同样量的细胞往下做么？

【在 r******k 的大作中提到】
: 主要是我用虽然都是一种cell line 但是每个cell line都有不同的mutation。 可能是
: 我grow细胞的时候就没grow好。 四种细胞细胞数不一样导致总蛋白量不同~ =（
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r*k
14 楼
因为我要检测这个蛋白的pan-tyr情况， 而且这个蛋白的磷酸化很容易受到外界的影响
（比如tyrpsinize细胞以后很快就会消失）。 所以我都是直接刮下来，不影响
signaling。

【在 t**m 的大作中提到】
: 难道不是数了细胞，然后用同样量的细胞往下做么？
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