i*y
2 楼
当初从别的实验室弄来一个带GFP的lentiviral vector.刚开始的时候还想着这个载体
不错,到时可以通过看GFP来估量感染效率。
结果今天把cDNA终于克完之后,突然意识到一个问题。载体里的GFP序列也会链接到我
的LncRNA的序列后面,等于最后出来的transcript是:
5'LncRNA---GFP 3'
考!!!!
所以想请问各位大侠,有没有表达LncRNA的经验。
我现在有个想法,就是:
1. 首先确认GFP前面有没有IRES
2. 如果有,我可否在我的LncRNA后面加一段polyA,所以最后的序列就是:
5' LncRNA---polyA----IRES----GFP 3'
可行否?
不错,到时可以通过看GFP来估量感染效率。
结果今天把cDNA终于克完之后,突然意识到一个问题。载体里的GFP序列也会链接到我
的LncRNA的序列后面,等于最后出来的transcript是:
5'LncRNA---GFP 3'
考!!!!
所以想请问各位大侠,有没有表达LncRNA的经验。
我现在有个想法,就是:
1. 首先确认GFP前面有没有IRES
2. 如果有,我可否在我的LncRNA后面加一段polyA,所以最后的序列就是:
5' LncRNA---polyA----IRES----GFP 3'
可行否?
i*y
4 楼
Actually, 我想到了一个更好的方法
https://www.systembio.com/lentiviral-technology/expression-vectors/cdna/
vector-maps-bidirectional
去买bidirectional 或者dual-promoter lentiviral vector? 哪位大侠有用过这两种
vector的经验嘛?
https://www.systembio.com/lentiviral-technology/expression-vectors/cdna/
vector-maps-bidirectional
去买bidirectional 或者dual-promoter lentiviral vector? 哪位大侠有用过这两种
vector的经验嘛?
W*1
6 楼
你个傻逼 lncRNA不编码coding gene, 也就是说不会被翻译 串联GFP有毛线用
a*o
7 楼
我是20号寄出的,大概什么时候能收到RECEIPT啊?
W*1
8 楼
我可以打折卖给你一套lentivirus系统来表达lncRNA
y*0
9 楼
问问你的律师,看看律师收到了几封。
w*n
10 楼
老实交代你是怎么混进来的?
【在 i********y 的大作中提到】
: 当初从别的实验室弄来一个带GFP的lentiviral vector.刚开始的时候还想着这个载体
: 不错,到时可以通过看GFP来估量感染效率。
: 结果今天把cDNA终于克完之后,突然意识到一个问题。载体里的GFP序列也会链接到我
: 的LncRNA的序列后面,等于最后出来的transcript是:
: 5'LncRNA---GFP 3'
: 考!!!!
: 所以想请问各位大侠,有没有表达LncRNA的经验。
: 我现在有个想法,就是:
: 1. 首先确认GFP前面有没有IRES
: 2. 如果有,我可否在我的LncRNA后面加一段polyA,所以最后的序列就是:
【在 i********y 的大作中提到】
: 当初从别的实验室弄来一个带GFP的lentiviral vector.刚开始的时候还想着这个载体
: 不错,到时可以通过看GFP来估量感染效率。
: 结果今天把cDNA终于克完之后,突然意识到一个问题。载体里的GFP序列也会链接到我
: 的LncRNA的序列后面,等于最后出来的transcript是:
: 5'LncRNA---GFP 3'
: 考!!!!
: 所以想请问各位大侠,有没有表达LncRNA的经验。
: 我现在有个想法,就是:
: 1. 首先确认GFP前面有没有IRES
: 2. 如果有,我可否在我的LncRNA后面加一段polyA,所以最后的序列就是:
w*n
14 楼
老实交代你是怎么混进来的?
【在 i********y 的大作中提到】
: 当初从别的实验室弄来一个带GFP的lentiviral vector.刚开始的时候还想着这个载体
: 不错,到时可以通过看GFP来估量感染效率。
: 结果今天把cDNA终于克完之后,突然意识到一个问题。载体里的GFP序列也会链接到我
: 的LncRNA的序列后面,等于最后出来的transcript是:
: 5'LncRNA---GFP 3'
: 考!!!!
: 所以想请问各位大侠,有没有表达LncRNA的经验。
: 我现在有个想法,就是:
: 1. 首先确认GFP前面有没有IRES
: 2. 如果有,我可否在我的LncRNA后面加一段polyA,所以最后的序列就是:
【在 i********y 的大作中提到】
: 当初从别的实验室弄来一个带GFP的lentiviral vector.刚开始的时候还想着这个载体
: 不错,到时可以通过看GFP来估量感染效率。
: 结果今天把cDNA终于克完之后,突然意识到一个问题。载体里的GFP序列也会链接到我
: 的LncRNA的序列后面,等于最后出来的transcript是:
: 5'LncRNA---GFP 3'
: 考!!!!
: 所以想请问各位大侠,有没有表达LncRNA的经验。
: 我现在有个想法,就是:
: 1. 首先确认GFP前面有没有IRES
: 2. 如果有,我可否在我的LncRNA后面加一段polyA,所以最后的序列就是:
D*n
16 楼
人家没准是想检测一下这个LncRNA是否表达未知peptide,你们这么激动干啥?
x*e
20 楼
不了解lncRNA, 不过我会担心lncRNA跟mRNA的结合蛋白不同,带到的地方也不同。所以
最后你的核糖体不一定有机会接触到lncRNA。另外,lncRNA后面挂那么大一坨,肯定会
影响它的功能吧。
【在 i********y 的大作中提到】
: 当初从别的实验室弄来一个带GFP的lentiviral vector.刚开始的时候还想着这个载体
: 不错,到时可以通过看GFP来估量感染效率。
: 结果今天把cDNA终于克完之后,突然意识到一个问题。载体里的GFP序列也会链接到我
: 的LncRNA的序列后面,等于最后出来的transcript是:
: 5'LncRNA---GFP 3'
: 考!!!!
: 所以想请问各位大侠,有没有表达LncRNA的经验。
: 我现在有个想法,就是:
: 1. 首先确认GFP前面有没有IRES
: 2. 如果有,我可否在我的LncRNA后面加一段polyA,所以最后的序列就是:
最后你的核糖体不一定有机会接触到lncRNA。另外,lncRNA后面挂那么大一坨,肯定会
影响它的功能吧。
【在 i********y 的大作中提到】
: 当初从别的实验室弄来一个带GFP的lentiviral vector.刚开始的时候还想着这个载体
: 不错,到时可以通过看GFP来估量感染效率。
: 结果今天把cDNA终于克完之后,突然意识到一个问题。载体里的GFP序列也会链接到我
: 的LncRNA的序列后面,等于最后出来的transcript是:
: 5'LncRNA---GFP 3'
: 考!!!!
: 所以想请问各位大侠,有没有表达LncRNA的经验。
: 我现在有个想法,就是:
: 1. 首先确认GFP前面有没有IRES
: 2. 如果有,我可否在我的LncRNA后面加一段polyA,所以最后的序列就是:
i*y
22 楼
我是楼主。当时被告知是和链接里的plasmid类似的东西(CD550A-1)
https://www.systembio.com/lentiviral-technology/expression-vectors/cdna/
vector-maps
结果后来发现是个N-term GFP tag...Anyways, 反正cDNA也还没克完,也不算浪费时间
。
https://www.systembio.com/lentiviral-technology/expression-vectors/cdna/
vector-maps
结果后来发现是个N-term GFP tag...Anyways, 反正cDNA也还没克完,也不算浪费时间
。
i*y
24 楼
对,所以我准备买这个载体(CD550A-1)
https://www.systembio.com/lentiviral-technology/expression-vectors/cdna/
vector-maps
【在 x********e 的大作中提到】
: 不了解lncRNA, 不过我会担心lncRNA跟mRNA的结合蛋白不同,带到的地方也不同。所以
: 最后你的核糖体不一定有机会接触到lncRNA。另外,lncRNA后面挂那么大一坨,肯定会
: 影响它的功能吧。
https://www.systembio.com/lentiviral-technology/expression-vectors/cdna/
vector-maps
【在 x********e 的大作中提到】
: 不了解lncRNA, 不过我会担心lncRNA跟mRNA的结合蛋白不同,带到的地方也不同。所以
: 最后你的核糖体不一定有机会接触到lncRNA。另外,lncRNA后面挂那么大一坨,肯定会
: 影响它的功能吧。
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