最好的中秋节礼物

呵呵，今天一大早收到通知，送Nature子刊的文章终于接受了。

这个project很不顺。从试验设计开始老板就认为CRISPR/HDR成功率太低，不让作。等到我说服他，好
几个月都过去了。设计时把我几十年的分子生物学和tissue culture经验，能想到的可能
改进成功率的方式都加进去了，才让老板同意我放手一搏。几个月后，终于作完了第一轮，还差点就没拿到我要的
东西：那天在显微镜下找得头昏眼花，没有任何克隆，就垂头丧气地给老板打个招呼，准备放弃了。回到实验室正想扔细胞培养皿的那一瞬间，突然想到举起来对着日光灯肉眼看了一下，一个白色的克隆就在培养皿的最边沿--最后证明这个克隆是一个基因的两个copy都按我设计的突变了。。。。

这一年来，又是mycoplasma污染（实验室的host cell line本身就污染了！），又是克隆不纯，搞得很头疼。最后稿子送出去了，作science这边的reviewer对突变子有兴趣，对方法没兴趣，意见一堆，要把method这一节砍掉；作方法的reviewer对突变子本身没兴趣，对方法上所有改进作用的思路都感兴趣，也认为有道理。但对我们没有和其它方法进行试验对比很遗憾，觉得作为方法的文章发表有欠缺。。。

老板说：你也好多年没发第一作者的文章了（上次发是2008年，JBC,还好被Faculty 1000选中了），今天回家开瓶酒喝吧。

不错不错，了结了这个，就可以全心全意接一个马上要毕业学生的project了。学生这个project刚发了Nature子刊，看能不能搞个grant。近十年实验室的所有grant都有我的影子。一个RO1的renewal全靠我筛出来的compound;一个R21在第一次申请失败后我插进去补数据，第二轮成功；一个DOD的grant虽然是学生为主，但筛选的第二轮的方法就是
我花了几个月来专为他develop的；最新的RO1 renewal也是把我上面的mutant cell lines的数据加进去，并且根据我的方法再提出新的idea后，第三轮才拿下来的。学生的这个project去年写了一个proposal,可惜没拿到钱。希望我接手后，现在文章也发表了，能和过去十年一样，有奇迹发生。我还需要5-6年的饭碗，把儿子的大学学费解决呢。

我的CRISPR/HDR方法可能对大多数人没有帮助。我是利用mutant的一个特点来筛选的。我用两个guide sequences把我的基因功能搞掉（我的细胞靠这个基因才能生长）, 先筛transfected细胞，再用mutant的特性来筛选我要的克隆，成功率很高。挑选出来的克隆，70%是带mutation的。大约1/4是两个copy都按我设计的突变，1/2是有一个copy按我设计的突变，另外1/4原因不明。因NPG问我们有没有兴趣把方法发表在Scientific Data上，细节暂时不能说。

祝各位网友中秋快乐！

（二0一六年九月十五日）