俺来介绍一把Re: what is DNA shaffling?# Biology - 生物学
r*o
1 楼
DNA Shuffling 可以归结成一种体外基因重组技术。操作原理其实很简单，比如说如
果
你有一个抗生素分解酶的基因，现在你想引入一些突变使它变得活性更高，但是你并不知
道
应该突变哪些位点以及如何突变，DNA Shuffling 就可以解决这个问题。首先，用"错误
导向
PCR”扩增出这个基因的片断，这个过程中，引入了一定比率的随机突变。然后克隆进载
体，
表达然后用抗生素筛选出有进步的克隆。第二，分离出这些克隆，用DNAse I 随机切成小
片段，
然后退火，进行self-annealing. 这样小片断又重新恢复成一个基因，这里请注意，在这
个
过程中，不同的克隆发生了重组，所以“好”的突变有可能被积累在一个重组克隆里。第
三，
重新引入载体，表达并且筛选，这样往往会拿到更好的克隆，第四重复以上步骤只到找到
最佳
突变体为止。
从以上可知，这种技术实际上是一种靠组合然后筛选逐步找到最优突变体的过程，模
拟了
生物进化的过程，所以又称为“定向进化”(directed evolution).
果
你有一个抗生素分解酶的基因，现在你想引入一些突变使它变得活性更高，但是你并不知
道
应该突变哪些位点以及如何突变，DNA Shuffling 就可以解决这个问题。首先，用"错误
导向
PCR”扩增出这个基因的片断，这个过程中，引入了一定比率的随机突变。然后克隆进载
体，
表达然后用抗生素筛选出有进步的克隆。第二，分离出这些克隆，用DNAse I 随机切成小
片段，
然后退火，进行self-annealing. 这样小片断又重新恢复成一个基因，这里请注意，在这
个
过程中，不同的克隆发生了重组，所以“好”的突变有可能被积累在一个重组克隆里。第
三，
重新引入载体，表达并且筛选，这样往往会拿到更好的克隆，第四重复以上步骤只到找到
最佳
突变体为止。
从以上可知，这种技术实际上是一种靠组合然后筛选逐步找到最优突变体的过程，模
拟了
生物进化的过程，所以又称为“定向进化”(directed evolution).