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western战斗的个人心得兼谢各位指点
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western战斗的个人心得兼谢各位指点# Biology - 生物学
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与western作战了个多月,得到本版很多热心大虾的帮助,最后经过结合多方经验,也挖
了文献出来,终于攻克乐我那个低丰度蛋白PVDF检测堡垒。fever是bench work比较弱的
,这么个小case瞎搞了一个月才搞定,但还是敝帚自珍的总结一下,牛虾们不要笑话,和
偶一样的菜菜们可以吸取俺的教训以后少走弯路。
1. 实验碰到问题,查文献很重要,我最后的关键步骤全部按照查到的方法改进,果然奏
效。动不动跑到这里来撒娇,真是偏劳各位善良的筒子了……
2. 大虾们对PVDF的总结很正确,结合力强,所以也容易提高背景,有效控制背景,主要
是尽量控制一抗的浓度,宁可用最少的一抗4度过夜,不要使用太低的稀释比。(我用的
和大部分文献建议的一样,是1:1000。)二抗在适当的浓度下,温育不要太长,室温1小
时应该足以应付general的需要。
3. 电转膜时间不要over,否则条带可能会有损失(这是偶老板说的,是否为了防止偶在
等转膜期间失踪,则不得而知:)。
4. blocking BSA没有必要用,奶粉就好,像某位大虾说的,又便宜又好用,何乐不为。
5.
tween20可以从头用到尾,但如果用
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