Re: 有没有人碰到过转质粒入BL21PlysS效率很低的情况？# Biology - 生物学
r*o
1 楼
你这个问题我也碰到过。我是表达一个酶的一部分，用的是pET20b,
宿主菌柱是BL21(DE3). 表达出来的蛋白是包涵体，量很大，估计对细菌很
toxic.所以我transform BL21(DE3)的时候在板上硬是只长出了一个colony.
幸运的是可以表达蛋白。
所以你这个问题很正常，mutant之所以比wt更糟糕，也许是因为形成了包涵
体之类的东西。
我提不出什么更好的建议，只能建议你降低一下amp的浓度，说不定会有帮助。
pET系统的origin属于低拷贝，amp的浓度太高可能是菌落无法生长。
第二点比较麻烦一些。建议你先做一个阳性对照，扩增一个常见基因，证明
你的genomic DNA 没有问题。如果这个成功了，试一下touch down PCR好了。
宿主菌柱是BL21(DE3). 表达出来的蛋白是包涵体，量很大，估计对细菌很
toxic.所以我transform BL21(DE3)的时候在板上硬是只长出了一个colony.
幸运的是可以表达蛋白。
所以你这个问题很正常，mutant之所以比wt更糟糕，也许是因为形成了包涵
体之类的东西。
我提不出什么更好的建议，只能建议你降低一下amp的浓度，说不定会有帮助。
pET系统的origin属于低拷贝，amp的浓度太高可能是菌落无法生长。
第二点比较麻烦一些。建议你先做一个阳性对照，扩增一个常见基因，证明
你的genomic DNA 没有问题。如果这个成功了，试一下touch down PCR好了。