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有关qRT-PCR一问，请大家帮忙

有关qRT-PCR一问，请大家帮忙# Biology - 生物学

o*a2010-02-02 08:02

1 楼

郁闷，这周开始发了几十封信，就一个隔天回复不合适，其他连个响都没有。偶很有自
知之明，也没申请牛校牛组，都是方向很接近的一些普通组。难道看我瘦弱，可偶虽瘦
但不弱，干活也是杠杠的，不吹牛。很match的基本快投完了，看来接下来只能投那些
方向沾边的了，哭～
纳米相关的现在就这么难找？

p*u2010-02-02 08:02

2 楼

昨天已经预约四月29号的签证，之前填写160表都用的“伯”（bo），结果刚发现护照
上拼音竟然是（bai），后来知道这是个多音字，但是不知道，我的160表是否需要重填
？还有预约的签证还有效？需要重新预约吗？材料都寄回国了，现在蒙了，请大虾们快
快指点一下。

r*g2010-02-02 08:02

3 楼

如果做的东西需要大量美国这边的信息，比如google的开发文档，国内的developer如
何access？

W*I2010-02-02 08:02

4 楼

我的IRA都是non-tax deductible IRA。转的时候WITHHOLDING ELECTION应该选的是I
elect not to have Federal income tax withheld.吧？Effective Date应该是哪一天
？找不到对这个填充的说明。多谢。

h*42010-02-02 08:02

5 楼

母亲B2身份，给了半年。但是想要给她延期带小孩，延个3－6个月。听说B2有可以延期
的，不知道可不可行。请教有经验的人给予指教。
谢谢

h*n2010-02-02 08:02

6 楼

他这一组实力太强，太平均，炮灰太少了，很多队pk的结果都很接近，不好选择。不过
唯一可惜的就是王乃恩啊。很有想法，很细腻的一个歌手，被淘汰了很可惜。
李代沫的运气很好了，居然能过第二轮。论实力，他是刘欢组靠后的几个，估计他就两
首歌唱得不错，换了歌就差很多。他pk掉的郑虹都比他强，不过刘欢为了不让郑虹太早
翘尾巴，有意识的在给郑虹磨练。
刘悦很倒霉的一个歌手，实力很好，我就不喜欢听她唱歌，就想我讨厌关喆一样，不需
要理由 :D

t*x2010-02-02 08:02

7 楼

半年前用相同的primer,cDNA synthesis kit做的，当时cDNA只用到了0.1ug/reaction.
半年之后其他东西几乎是相同的，只不过RNA是新提的（但用的相同的kit),还有SYBR
Green Master Mix是新买的，但发现，cDNA已经用到了很高的浓度(2ug/reaction)，但
Ct值还是比以前的Ct值晚出现好几个cycle,请问会是什么原因呢？
RNA quality已经跑胶检测过了，是完整的。
会是Master Mix的问题么？是新买的啊，一直保存在-20C.
多谢大家指教！

c*u2010-02-02 08:02

8 楼

纳米类的回国先混个好位置再说

p*g2010-02-02 08:02

9 楼

重填一份就行了，没问题。别担心

ET2010-02-02 08:02

10 楼

buy vpn service.

【在 r*****g 的大作中提到】

: 如果做的东西需要大量美国这边的信息，比如google的开发文档，国内的developer如
: 何access？

t*n2010-02-02 08:02

11 楼

可以申请延期，但批不批准就不知道了，下次再申请来美国还给不给签证也就难说了。

【在 h*****4 的大作中提到】

: 母亲B2身份，给了半年。但是想要给她延期带小孩，延个3－6个月。听说B2有可以延期
: 的，不知道可不可行。请教有经验的人给予指教。
: 谢谢

c*d2010-02-02 08:02

12 楼

从一开始我就看出来了，有实力点的挑哈林或者杨坤就对了，这两组弱点。

U*S2010-02-02 08:02

13 楼

housekeeping gene 的Ct相差达吗？

y*g2010-02-02 08:02

14 楼

纳米的不是很多钱吗？不是很多火吗？我还以为我们传统化工的职位少呢

p*g2010-02-02 08:02

15 楼

签证预约有效

d*32010-02-02 08:02

16 楼

国内搞开发的不会翻墙的话，很难让人信服啊

t*s2010-02-02 08:02

17 楼

file i539。
看探亲与陪读版置顶的常见问题可以参考：
http://www.mitbbs.com/article_t/Reunion/31319663.html

e*d2010-02-02 08:02

18 楼

刘悦 pk 袁娅维输了，感觉不太公平啊。
刘欢这组自选唱英文歌或者中英文混搭歌的，感觉都有讨巧的成分。

【在 h*********n 的大作中提到】

: 他这一组实力太强，太平均，炮灰太少了，很多队pk的结果都很接近，不好选择。不过
: 唯一可惜的就是王乃恩啊。很有想法，很细腻的一个歌手，被淘汰了很可惜。
: 李代沫的运气很好了，居然能过第二轮。论实力，他是刘欢组靠后的几个，估计他就两
: 首歌唱得不错，换了歌就差很多。他pk掉的郑虹都比他强，不过刘欢为了不让郑虹太早
: 翘尾巴，有意识的在给郑虹磨练。
: 刘悦很倒霉的一个歌手，实力很好，我就不喜欢听她唱歌，就想我讨厌关喆一样，不需
: 要理由 :D

t*x2010-02-02 08:02

19 楼

对的，18SrRNA的 Ct也相差很大。。。今天又重新做了一遍，还是这样的结果
碰到过相似情况么？？
谢谢哦～～

【在 U********S 的大作中提到】

: housekeeping gene 的Ct相差达吗？

s*e2010-02-02 08:02

20 楼

纳米方向不是人傻钱多吗？

【在 o******a 的大作中提到】

: 郁闷，这周开始发了几十封信，就一个隔天回复不合适，其他连个响都没有。偶很有自
: 知之明，也没申请牛校牛组，都是方向很接近的一些普通组。难道看我瘦弱，可偶虽瘦
: 但不弱，干活也是杠杠的，不吹牛。很match的基本快投完了，看来接下来只能投那些
: 方向沾边的了，哭～
: 纳米相关的现在就这么难找？

p*g2010-02-02 08:02

21 楼

重填一份就行了，没问题。别担心

r*g2010-02-02 08:02

22 楼

有什么推荐的？需不需要三天两头的换server？

【在 ET 的大作中提到】

: buy vpn service.

H*e2010-02-02 08:02

23 楼

郑虹和王乃恩看得我太伤心了。哎呀。

U*S2010-02-02 08:02

24 楼

RNA定量准的话换个RT kit先。

【在 t*x 的大作中提到】

: 对的，18SrRNA的 Ct也相差很大。。。今天又重新做了一遍，还是这样的结果
: 碰到过相似情况么？？
: 谢谢哦～～

s*e2010-02-02 08:02

25 楼

显然是传统物理的方向职位少。

【在 y***g 的大作中提到】

: 纳米的不是很多钱吗？不是很多火吗？我还以为我们传统化工的职位少呢

p*u2010-02-02 08:02

26 楼

唉呀，谢谢救星阿，叩头了：）我刚才真是找不着北了，谢谢！

g*y2010-02-02 08:02

27 楼

国内的叫加速器，不能直接说vpn或者翻墙什么的，会被删掉。
已经给你推荐了，注意查收。

【在 r*****g 的大作中提到】

: 如果做的东西需要大量美国这边的信息，比如google的开发文档，国内的developer如
: 何access？

c*d2010-02-02 08:02

28 楼

为何为王乃恩伤心？

【在 H********e 的大作中提到】

: 郑虹和王乃恩看得我太伤心了。哎呀。

s*y2010-02-02 08:02

29 楼

well, if the relative ct (your target gene over the house keeping gene)
remain the same, then there is nothing to worry about.
If you really really want to make sure, there are things you need
to check:
1. did they change the fluorescent lamp/detector in the realPCR machine?
2. Did you use the same DNA dye in the PCR reaction? (if the dye is loaded
in the premix kit, then it is not consistent between batches and cannot be
used to do direct comparison)

reaction.

【在 t*x 的大作中提到】

: 半年前用相同的primer,cDNA synthesis kit做的，当时cDNA只用到了0.1ug/reaction.
: 半年之后其他东西几乎是相同的，只不过RNA是新提的（但用的相同的kit),还有SYBR
: Green Master Mix是新买的，但发现，cDNA已经用到了很高的浓度(2ug/reaction)，但
: Ct值还是比以前的Ct值晚出现好几个cycle,请问会是什么原因呢？
: RNA quality已经跑胶检测过了，是完整的。
: 会是Master Mix的问题么？是新买的啊，一直保存在-20C.
: 多谢大家指教！

c*f2010-02-02 08:02

30 楼

国内outsource公司都是有自己专用国外vpn服务的，商业vpn服务都不可靠，而且是政
府封堵目标，专用vpn服务从来不受政府封堵影响的。
我就是业余做这个的，国内有5-6个客户，你要可以咨询下。。。

n*w2010-02-02 08:02

31 楼

又听了一遍慢慢，太好听了，假音完美，真是可惜可惜!!!

【在 c**********d 的大作中提到】

: 为何为王乃恩伤心？

t*x2010-02-02 08:02

32 楼

Thanks a lot!!! Really appreciate!
You are totally right....The relative Ct seems remain same and the dye
actually is added together with the premix. The reason why I worry this so
much is that the Ct value of my target gene is so late (>35) even though I'
ve already increase the concentration of cDNA so much.

Y*l2010-02-02 08:02

33 楼

你用翻墙是看看网页还是什么。看网页你百度一下红杏出墙。
全局翻墙的话我在用openvpn 加易联这两个软件组合

【在 r*****g 的大作中提到】

: 如果做的东西需要大量美国这边的信息，比如google的开发文档，国内的developer如
: 何access？

c*n2010-02-02 08:02

34 楼

王乃恩前面两句有点问题，是个硬伤，属于意外，刘欢根据现场表现的取舍还是公平
的。这种比赛现场其实是很紧张的，李代末同学完全大失水准和紧张没有自信还是很
有关的。

t*x2010-02-02 08:02

35 楼

Thanks. I changed but results remain similar.
Is it okay that I load 2-4ug cDNA/reaction? I am afraid it is too much and
is so abnormal.

c*f2010-02-02 08:02

36 楼

真正商务vpn要求跟个人vpn要求差别大了。。。
其实所有面向普通大众的收费商业vpn服务都有两大问题，1.不可靠，是国家封堵对象
2.都需要装终端软件，这玩意风险极大，基本是装个监视你电脑的后门，不管owner是
nsa，中国政府，还是商业公司，法轮功。。。
astrill，易联，strongvpn等等都这样，例子多不胜数。。。
商务vpn还有速度要求，高档的还有failover，reverse vpn等等要求。。。

【在 Y*****l 的大作中提到】

: 你用翻墙是看看网页还是什么。看网页你百度一下红杏出墙。
: 全局翻墙的话我在用openvpn 加易联这两个软件组合

c*d2010-02-02 08:02

37 楼

后面输了？其实我更喜欢李代沫。

【在 n*****w 的大作中提到】

: 又听了一遍慢慢，太好听了，假音完美，真是可惜可惜!!!

b*x2010-02-02 08:02

38 楼

I think it is not necessary to load 2-4ug cDNA. It is too much even if you
get a relatively normal Ct value.
Checking the machine settings for all parameters is helpful.

H*e2010-02-02 08:02

39 楼

我比较偏心他，对歌的处理细腻，感情有层次。另外我觉得他眼神干净，就是个活
在自己世界里的小孩。

【在 c**********d 的大作中提到】

: 为何为王乃恩伤心？

t*x2010-02-02 08:02

40 楼

Thanks for your response.
Yeah, I also concern about that. But if I load less cDNA, there is no
amplification curve before 40 cycles at all.
The machine settings did not change at all, but I'll double check. Thanks!

【在 b****x 的大作中提到】

: I think it is not necessary to load 2-4ug cDNA. It is too much even if you
: get a relatively normal Ct value.
: Checking the machine settings for all parameters is helpful.

c*n2010-02-02 08:02

41 楼

是你太干净了，他一直戴着黑瞳。
其实王是我最不喜欢的一个歌手，因为太虚伪。

【在 H********e 的大作中提到】

: 我比较偏心他，对歌的处理细腻，感情有层次。另外我觉得他眼神干净，就是个活
: 在自己世界里的小孩。

H*e2010-02-02 08:02

42 楼

他如果性格开朗的话，以他的条件应该红得快些，还能少挨些骂:) 他现在这样都没公
司敢签他，上不了任何唱歌以外的节目。

【在 c********n 的大作中提到】

: 是你太干净了，他一直戴着黑瞳。
: 其实王是我最不喜欢的一个歌手，因为太虚伪。

r*y2010-02-02 08:02

43 楼

俺觉着王乃恩是同同哈哈

【在 c********n 的大作中提到】

: 是你太干净了，他一直戴着黑瞳。
: 其实王是我最不喜欢的一个歌手，因为太虚伪。

M*a2010-02-02 08:02

44 楼

王乃恩太太太可惜了。本来很不喜欢他这一型的娘娘腔，但那首慢慢太出彩了，绝对应
该留下的！

j*52010-02-02 08:02

45 楼

李代沫其实技巧还可以，可以选中音段的情歌玩技巧，他的声音还是挺好听的
但是他自选歌曲选的萧敬腾的那首歌一直在高音区，他弱点暴露的很明显
说他唱的急，其实萧敬腾原唱就是这样的，只不过萧的高音区很稳定

【在 c********n 的大作中提到】

: 王乃恩前面两句有点问题，是个硬伤，属于意外，刘欢根据现场表现的取舍还是公平
: 的。这种比赛现场其实是很紧张的，李代末同学完全大失水准和紧张没有自信还是很
: 有关的。

l*r2010-02-02 08:02

46 楼

我咋觉得都唱得不算好呢？
老觉得有点变调

【在 h*********n 的大作中提到】

S*s2010-02-02 08:02

47 楼

那个什么昊好像的确是唱过劲了

【在 l*******r 的大作中提到】

: 我咋觉得都唱得不算好呢？
: 老觉得有点变调