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做SDSPAGE胶总是凝太快做不漂亮请支招!
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做SDSPAGE胶总是凝太快做不漂亮请支招!# Biology - 生物学
L*z
1
刚给老公装了箱子,周四他要回国探亲。从美国回家,总不能空手,这个是咱们总也
放不下的架子,以为国内的亲戚还在乎咱们送的礼物,中国已经进入了新时代,哈哈,
中国的人们也是看不起咱们这帮美国穷农民了,这个可以有。
先说说以前给他们带过什么回去。节日的时候outlet mall里面的coach店有70% off,
买包买鞋。The North Face 店买衣服。Costco买洋酒,老公的弟弟点名要雅诗兰黛大
棕瓶。我们自认为已经很努力了。给弟媳妇买雅诗兰黛的时候,老公就问我为什么不给
自己买。不知道么,我从来都是厉行节约的。从中国背两个箱子来到美国,怎么能攒下
这个家,谁帮过我们一分钱。雅诗兰黛,就算是到TJMAX去买半价的,我都不愿意,我
还是喜欢COSTCO卖的大瓶Aveeno,没有香味,还适合我的皮肤。因为我的抱怨,老公坚
持给我买了雅诗兰黛的日霜和夜霜,我试用了之后丢在一边,真的不适合我,感觉刺激
眼睛。
这次回去之前他问了他的父母,说是我上次给他们的软骨素吃了感觉挺好,给他们又准
备了一瓶。他妈妈以前说腰疼,要吃骨胶原,买了几次了,总说挺好使。去年我回去的
时候婆婆要了一瓶鱼油,这次也准备了一瓶。我自己的经验是老年人都缺钙,所以送
Costco的钙片一瓶。去年的黑色星期五,老公给他父亲买了一件北脸的棉衣40%off还要
两百块。
以前回国给老公的弟媳和我的嫂子都送过两个coach包,他弟媳妇还给过北脸的外衣,
雅诗兰黛的大棕瓶,从来没听说过她们喜欢还是不喜欢。他弟弟也给过coach男包,北
脸衬衫,同样不知道是否喜欢。问他们总是回答什么都不需要,包包已经不能送了,升
级到LV我不舍得,是有点不知所措哈。弟媳妇去年做了甲状腺癌手术,我上次回国恰好
赶上,另外送了她两千元人民币。这次给她带了黑蜂蜜,还是看了别人的博文去Costco
买了。查了网上说甲状腺切除后影响钙吸收,所以给她也带一瓶钙片。
老公的侄子,上高中了吧,上次老公回去的时候还要鞋,这次说不要了,我老公买的鞋
孩子不喜欢,我老公的品味严重不行。我跟老公说给钱吧,自己喜欢什么买什么吧。
Costco买东西的时候看到书,猛然想起来,他弟弟曾经说过需要英文书给孩子看,我们
找了一本童话书,才15刀,希望他能喜欢看。如果喜欢,下次还可以带。
我妈妈只要一块香皂,她是皮肤敏感,只用我给的大香皂洗头发。最早是我妈妈开始吃
软骨素,是她妹妹,我老姨送她的,60粒一瓶的。我妈妈曾经不小心切了手,伤口有点
深,伤了神经。伤口好了之后神经一直疼,吃了软骨素就不疼了。我之前就帮她买,我
嫂子也跟着一起吃,我嫂子是腰疼膝盖疼,上次我回国之前,我妈都等不急,想让我邮
寄回去,我嫂子把我给我妈妈买的两瓶220粒软骨素都吃没了。上次我带了4瓶软骨素,
给了我嫂子2瓶,我妈妈1瓶,婆婆1瓶,这一家人。据说我嫂子的腰还是疼,膝盖也没
有改善。但是,他们还是要软骨素。所以这次是每人一瓶。外加钙片一瓶。我嫂子有一
件北脸外衣。
给我哥哥买了鞋,polo牌的,还有一条牛仔裤Levis牌的。我哥哥还跟我要一瓶钙片,
不许给500粒一瓶的,要200粒的,因为要200粒的,就得多花一倍的钱,说是要送给他
的领导,多了看着不值钱。我哥哥的儿子这次什么都没有,上次我送了他一个苹果的笔
记本,两千刀。很长时间我们都不欠他礼物了。送笔记本之前给过他几双鞋,他是很喜
欢的。
剩下就是带点巧克力糖,随便吃吃吧。就这么个简单家庭,准备礼物已经很费心。我们
两个人回国还是分头行动,等于一年送他们两次礼物,实在是头疼。更何况,我嫂子还
一直说,不要乱花钱,乱买东西,我们什么都不需要。我妈妈也说,你买的东西不符合
他们的要求,不要乱买。难弄了。
老公回国忽然增加了一项重要使命。上海刚刚出台了户籍注销政策,我们一家三口的户
口还在北京。他前年回去想办个身份证,去了一次中关村派出所。我们家当年是在老公
单位的集体户口本上。现在那个公司早没有了,户口上的人也都迁走了,只剩下我们家
三口人。派出所建议我老公找个地方把户口迁走。我们一直在商量这件事。他想迁回他
父母家,他妈妈去派出所问,户籍警说北京户口那么值钱,为什么要迁回烟台。现在听
说了上海的政策,北京户口怕是就保不住了,他会争取转回烟台,主要是他想办身份证
,有了身份证什么事情都好办了,像手机号,银行卡,不然在中国很受限制,背着现金
四处走,不安全。不知道能办得怎么样。
父母在,回国的事情就是辛苦加上没完没了的麻烦,不如放下架子,他们要什么就买什
么,没什么可带的就不用麻烦了。
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u*s
2
目前工作轻松稳定,假期多,但工资低,如果match了新offer也算可以了
纠结中
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a*a
3
收到别人的中文短信了
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m*m
4
我每次做SDSPAGE胶都很紧张,尽管动作已经非常快了,7.94ML的分离胶溶液要一次性
同时做完两块胶,就是做不好,做一块我还行。分离胶的水平线总是不平整。
下面是我的配方,大家看看哦
1.9ML 49.5% AABis
2.67ml buffer (3M tris,0.3%SDS,PH8.5)
2.67ml glycerol:H20(56:44)
0.7ML H20
APS(10%) 80ul
TEMED 16ul(后来因为凝太快改成了13ul,还是来不及)
(这个分离胶水封后,我看基本5分钟多点就完全凝住了)
首先,溶液我肯定仔细混匀了,然后我用这点溶液分别加到两块胶板的刻度线上,加完
一块,加另一块,基本正好用完这点,期间动作非常快的。然后轻轻地加水,为了使其
平整,因为要加两块,总是让其中一块要等一会,加水的时候我不敢用力,因为会让胶
起伏造成不平整,也是按先前的顺序加先注胶的那块,然后再给另一块加水。但是不知
道为什么就是掌握不好,做到最后两块都不是很平整,要不就是大波浪型,要不就是虽
然直了但是是斜的,觉得还是加水的时候胶已经开始凝了。
为了做好
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c*t
5
说老实话,我觉得counter offer这种东西是给有背景的人玩的。 不过如果你身份不成
问题,也无所谓,大不了找下家。 所以关键是你到底输得起多少
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t*s
6
不能发吧?

【在 a****a 的大作中提到】
: 收到别人的中文短信了
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m*m
7
歪的胶跑出来的条带就不可信了,所以我一定要做好。
但是我不想每次一做胶就很紧张,可不可以从容地、对速度要求不那么高的情况下做完
啊?
配方要怎么改一下吗?
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u*s
8
manager sent me email 'you are an extremely important member of our team'
wants to talk about it tomorrow.

【在 c****t 的大作中提到】
: 说老实话,我觉得counter offer这种东西是给有背景的人玩的。 不过如果你身份不成
: 问题,也无所谓,大不了找下家。 所以关键是你到底输得起多少

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e*y
9
是D,我刚刚确认了在两个gv之间收发。
不能与tmobile之间收发,不过那是tmobile的问题。
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p*3
10
8ul TEMED for 8ml gel is more than enough
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c*t
11
他们都这么说。。情商情商

【在 u****s 的大作中提到】
: manager sent me email 'you are an extremely important member of our team'
: wants to talk about it tomorrow.

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g*g
12
现在还能免费发短信到中国吗?

【在 a****a 的大作中提到】
: 收到别人的中文短信了
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a*k
13
你的id真工整,让我觉得是my mm yammy的缩写

【在 m****m 的大作中提到】
: 我每次做SDSPAGE胶都很紧张,尽管动作已经非常快了,7.94ML的分离胶溶液要一次性
: 同时做完两块胶,就是做不好,做一块我还行。分离胶的水平线总是不平整。
: 下面是我的配方,大家看看哦
: 1.9ML 49.5% AABis
: 2.67ml buffer (3M tris,0.3%SDS,PH8.5)
: 2.67ml glycerol:H20(56:44)
: 0.7ML H20
: APS(10%) 80ul
: TEMED 16ul(后来因为凝太快改成了13ul,还是来不及)
: (这个分离胶水封后,我看基本5分钟多点就完全凝住了)

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h*k
14
切记,manager对谁都这么说

【在 u****s 的大作中提到】
: manager sent me email 'you are an extremely important member of our team'
: wants to talk about it tomorrow.

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c*s
15
你有空发贴,试一下就知道了,还不要钱

【在 g*g 的大作中提到】
: 现在还能免费发短信到中国吗?
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m*m
16
是吗?

【在 p*3 的大作中提到】
: 8ul TEMED for 8ml gel is more than enough
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u*s
17
呵呵,我智商一般,但情商还成

【在 c****t 的大作中提到】
: 他们都这么说。。情商情商
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l*h
18
为什么是tmobile的问题,国内发中文短信给tmobile能显示中文。GV发中英文混合短信
给tmobile,tmobile上只显示英文,连 吅吅 都省了

【在 e***y 的大作中提到】
: 是D,我刚刚确认了在两个gv之间收发。
: 不能与tmobile之间收发,不过那是tmobile的问题。

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m*m
19
^_^ 我是女生啦。这个只是我名字首字母的缩写,重复,而已。别歪楼

【在 a********k 的大作中提到】
: 你的id真工整,让我觉得是my mm yammy的缩写
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c*t
20
嘿嘿,看见 extremely 很鸡动吧

【在 u****s 的大作中提到】
: 呵呵,我智商一般,但情商还成
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t*e
21
t-mobile之间也可以发,不过可能跟手机有关。前两天,ld刚刚用国内带过来的手机发
了条中文短信,顺利收到
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q*g
22
少些temed,10ul估计就够了。
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b*e
23
这个,还是根据情况吧
我现在的manager,一年前要辞职,公司挽留,很快给了promotion。
不过他现在终于还是要走了,我们这才知道其实一年前他就提出过辞职。
所以,如果你的position真的对公司很critical,这个小公司很常见,
你自己心里应该有底儿, 所以counter offer不见得就是坏事。 大不了
以后再走人。

【在 u****s 的大作中提到】
: 目前工作轻松稳定,假期多,但工资低,如果match了新offer也算可以了
: 纠结中

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r*t
24
发国内手机怎么输号码? 01186 还是直接 86+号码?
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w*x
25
TEMED 太多了,5就可以了
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u*s
26
老板挽留了一个多小时,match工资/升级/换组做新的东西,能想到的都说了.忍了忍,还
是决定走.

【在 c****t 的大作中提到】
: 嘿嘿,看见 extremely 很鸡动吧
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r*t
27
试了一下,destination not supported.

【在 r****t 的大作中提到】
: 发国内手机怎么输号码? 01186 还是直接 86+号码?
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a*a
28
aps 80ul
temed 8ul
足够了
你这个16ul改13ul太鸵鸟了。。。

【在 m****m 的大作中提到】
: 我每次做SDSPAGE胶都很紧张,尽管动作已经非常快了,7.94ML的分离胶溶液要一次性
: 同时做完两块胶,就是做不好,做一块我还行。分离胶的水平线总是不平整。
: 下面是我的配方,大家看看哦
: 1.9ML 49.5% AABis
: 2.67ml buffer (3M tris,0.3%SDS,PH8.5)
: 2.67ml glycerol:H20(56:44)
: 0.7ML H20
: APS(10%) 80ul
: TEMED 16ul(后来因为凝太快改成了13ul,还是来不及)
: (这个分离胶水封后,我看基本5分钟多点就完全凝住了)

avatar
b*t
29
大家不要老是用辞职作为要价的手段,因为到了那一步就是lz这个样子的。
平时不满要给上面通气,让他们知道,如果不理,那辞职就可以了,也不用考虑什么
counter offer了。如果上面value你,那就会给你考考虑promotion,大家皆大欢喜。
想楼主这个样子,不知道是公司真value你呢,还是临时找不到人现在给你高帽,到时
废你。
EQ 啊 EQ。
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a*o
30
我碰到这种问题,肯定APS,TEMED各减半先
我以前都用异丙醇压平

【在 m****m 的大作中提到】
: 我每次做SDSPAGE胶都很紧张,尽管动作已经非常快了,7.94ML的分离胶溶液要一次性
: 同时做完两块胶,就是做不好,做一块我还行。分离胶的水平线总是不平整。
: 下面是我的配方,大家看看哦
: 1.9ML 49.5% AABis
: 2.67ml buffer (3M tris,0.3%SDS,PH8.5)
: 2.67ml glycerol:H20(56:44)
: 0.7ML H20
: APS(10%) 80ul
: TEMED 16ul(后来因为凝太快改成了13ul,还是来不及)
: (这个分离胶水封后,我看基本5分钟多点就完全凝住了)

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e*k
31
问题就是:会哭的孩子有奶吃。
你不哭,就没有奶。 抱怨谁都会,没有人觉得自己的工资足够多,所以抱怨是没有人
理会的。
辞职 == 哭。

【在 b*****t 的大作中提到】
: 大家不要老是用辞职作为要价的手段,因为到了那一步就是lz这个样子的。
: 平时不满要给上面通气,让他们知道,如果不理,那辞职就可以了,也不用考虑什么
: counter offer了。如果上面value你,那就会给你考考虑promotion,大家皆大欢喜。
: 想楼主这个样子,不知道是公司真value你呢,还是临时找不到人现在给你高帽,到时
: 废你。
: EQ 啊 EQ。

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y*k
32
temed用量减半
如果胶还是不平,可以改用乙醇封

【在 m****m 的大作中提到】
: 我每次做SDSPAGE胶都很紧张,尽管动作已经非常快了,7.94ML的分离胶溶液要一次性
: 同时做完两块胶,就是做不好,做一块我还行。分离胶的水平线总是不平整。
: 下面是我的配方,大家看看哦
: 1.9ML 49.5% AABis
: 2.67ml buffer (3M tris,0.3%SDS,PH8.5)
: 2.67ml glycerol:H20(56:44)
: 0.7ML H20
: APS(10%) 80ul
: TEMED 16ul(后来因为凝太快改成了13ul,还是来不及)
: (这个分离胶水封后,我看基本5分钟多点就完全凝住了)

avatar
u*s
33
平时提过,没理,所以才辞职的。他以为我不会走。

【在 b*****t 的大作中提到】
: 大家不要老是用辞职作为要价的手段,因为到了那一步就是lz这个样子的。
: 平时不满要给上面通气,让他们知道,如果不理,那辞职就可以了,也不用考虑什么
: counter offer了。如果上面value你,那就会给你考考虑promotion,大家皆大欢喜。
: 想楼主这个样子,不知道是公司真value你呢,还是临时找不到人现在给你高帽,到时
: 废你。
: EQ 啊 EQ。

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h*y
34
现在还有自己做胶的呀?
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h*s
35
第二次辞职就不会鸡动了。

【在 c****t 的大作中提到】
: 嘿嘿,看见 extremely 很鸡动吧
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p*i
36
amedio說的沒錯,肯定APS,TEMED各减半先……不過可能要等很長時間……
我用0.1%SDS封膠的,就是在兩邊各加一點就好了……

【在 m****m 的大作中提到】
: 我每次做SDSPAGE胶都很紧张,尽管动作已经非常快了,7.94ML的分离胶溶液要一次性
: 同时做完两块胶,就是做不好,做一块我还行。分离胶的水平线总是不平整。
: 下面是我的配方,大家看看哦
: 1.9ML 49.5% AABis
: 2.67ml buffer (3M tris,0.3%SDS,PH8.5)
: 2.67ml glycerol:H20(56:44)
: 0.7ML H20
: APS(10%) 80ul
: TEMED 16ul(后来因为凝太快改成了13ul,还是来不及)
: (这个分离胶水封后,我看基本5分钟多点就完全凝住了)

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w*i
37
if you really like the job, boss and colleagues, counter offer is fine..
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b*n
38
泣血飘过……

【在 h******y 的大作中提到】
: 现在还有自己做胶的呀?
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s*n
39
“如果不理,那辞职就可以了”。。。。这建议nb

【在 b*****t 的大作中提到】
: 大家不要老是用辞职作为要价的手段,因为到了那一步就是lz这个样子的。
: 平时不满要给上面通气,让他们知道,如果不理,那辞职就可以了,也不用考虑什么
: counter offer了。如果上面value你,那就会给你考考虑promotion,大家皆大欢喜。
: 想楼主这个样子,不知道是公司真value你呢,还是临时找不到人现在给你高帽,到时
: 废你。
: EQ 啊 EQ。

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m*m
40
APS也要减量吗?
可以用乙醇封?
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b*t
41
of course after you have another offer

【在 s**********n 的大作中提到】
: “如果不理,那辞职就可以了”。。。。这建议nb
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M*n
42
如果是每天跑十几块胶的,买现成的恐怕很费钱哦,除非大老板,小老板负担不起的。
如果每天一两块胶,还是买现成划算。你每小时的人工就超过一块胶了。

【在 b******n 的大作中提到】
: 泣血飘过……
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b*t
43
wrong..

: 问题就是:会哭的?孩子有奶吃。

【在 e******k 的大作中提到】
: 问题就是:会哭的孩子有奶吃。
: 你不哭,就没有奶。 抱怨谁都会,没有人觉得自己的工资足够多,所以抱怨是没有人
: 理会的。
: 辞职 == 哭。

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W*C
44

从来没听说过用乙醇封的。。。。挥发了吧。。。。用水封多简单啊

【在 m****m 的大作中提到】
: APS也要减量吗?
: 可以用乙醇封?

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b*t
45
wrong..

: 问题就是:会哭的?孩子有奶吃。

【在 e******k 的大作中提到】
: 问题就是:会哭的孩子有奶吃。
: 你不哭,就没有奶。 抱怨谁都会,没有人觉得自己的工资足够多,所以抱怨是没有人
: 理会的。
: 辞职 == 哭。

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e*e
46
上面不加水压 用 isopropanol
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O*o
47
大腕的分析还是不错滴。
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h*n
48
买胶, 一定要买.
自从我用上买的胶, western水平大大提高, 哇咔咔咔咔
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t*o
49
Right decision. A decent company doesn't make counter offer.

【在 u****s 的大作中提到】
: 平时提过,没理,所以才辞职的。他以为我不会走。
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a*a
50
没实际区别

【在 e**e 的大作中提到】
: 上面不加水压 用 isopropanol
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u*s
51
thanks.
it's a decent company actually, just a not well-qualified manager.

【在 t**o 的大作中提到】
: Right decision. A decent company doesn't make counter offer.
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a*a
52
ft。。。现在都这么二把刀吗?
先搞清楚为啥要封

【在 W****C 的大作中提到】
:
: 从来没听说过用乙醇封的。。。。挥发了吧。。。。用水封多简单啊

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l*a
53
不能接,等他找好下家,你找不到下家了怎么办
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h*n
54
EtOH封挺好的啊, 有问题吗?

【在 W****C 的大作中提到】
:
: 从来没听说过用乙醇封的。。。。挥发了吧。。。。用水封多简单啊

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l*o
55
我就是用乙醇封的, 下面胶凝了以后把乙醇倒掉,吸干,微量残留的还能挥发掉,挺
好啊。
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j*n
56
呵呵,用水能封住么?
你配的胶液里没水么?
有水的话,此水和彼水有什么差别么?
我在国内用异丙醇封胶,只加一点,略微能盖过分离胶就好。等加浓缩胶的时候,把异
丙醇倒掉,用蒸馏水冲洗一下,干了就可以加浓缩胶了。
在美国实验室,直接用100%乙醇封,就直接用洗瓶加满,也是等分离胶凝固了,倒掉乙
醇,挥发干净了再加浓缩胶。
凝得快肯定是他妈的(TEMED)加多了,我先后做过DGGE,SDS-PAGE,Urea PAGE,AP的量不是很重要,主要还是他妈的。
你试试减一下量,应该能解决。
又及:查了一下实验室protocol,我们一次配4 pieces,20ML胶液,加了8UL他妈的。
或者你可以参考一下比例。一般不到半小时就可以凝胶了……
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s*e
57
有次temed加多了,胶就凝在枪头里了

【在 m****m 的大作中提到】
: 我每次做SDSPAGE胶都很紧张,尽管动作已经非常快了,7.94ML的分离胶溶液要一次性
: 同时做完两块胶,就是做不好,做一块我还行。分离胶的水平线总是不平整。
: 下面是我的配方,大家看看哦
: 1.9ML 49.5% AABis
: 2.67ml buffer (3M tris,0.3%SDS,PH8.5)
: 2.67ml glycerol:H20(56:44)
: 0.7ML H20
: APS(10%) 80ul
: TEMED 16ul(后来因为凝太快改成了13ul,还是来不及)
: (这个分离胶水封后,我看基本5分钟多点就完全凝住了)

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c*k
58
为啥不直接买好了,10块钱一胶,拿来直接用

【在 m****m 的大作中提到】
: 我每次做SDSPAGE胶都很紧张,尽管动作已经非常快了,7.94ML的分离胶溶液要一次性
: 同时做完两块胶,就是做不好,做一块我还行。分离胶的水平线总是不平整。
: 下面是我的配方,大家看看哦
: 1.9ML 49.5% AABis
: 2.67ml buffer (3M tris,0.3%SDS,PH8.5)
: 2.67ml glycerol:H20(56:44)
: 0.7ML H20
: APS(10%) 80ul
: TEMED 16ul(后来因为凝太快改成了13ul,还是来不及)
: (这个分离胶水封后,我看基本5分钟多点就完全凝住了)

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b*n
59
LZ在做EMSA?

【在 m****m 的大作中提到】
: 我每次做SDSPAGE胶都很紧张,尽管动作已经非常快了,7.94ML的分离胶溶液要一次性
: 同时做完两块胶,就是做不好,做一块我还行。分离胶的水平线总是不平整。
: 下面是我的配方,大家看看哦
: 1.9ML 49.5% AABis
: 2.67ml buffer (3M tris,0.3%SDS,PH8.5)
: 2.67ml glycerol:H20(56:44)
: 0.7ML H20
: APS(10%) 80ul
: TEMED 16ul(后来因为凝太快改成了13ul,还是来不及)
: (这个分离胶水封后,我看基本5分钟多点就完全凝住了)

avatar
s*e
60
TEMED太多了;用异丙醇封胶。
avatar
T*t
61
我配10ml的胶只用4ul的TEMED就够了。
上面用水饱和的正丁醇封。
APS一定要新鲜配,我发现哪怕是放-20度保存的APS也没有新鲜配的好用。
avatar
T*t
62
用水/乙醇/异丙醇封胶都可能会使分离胶表面的局部胶浓度发生变化。水饱和的正丁醇
因为不能够再吸收水分,所以应该是最适合封胶用的。不过我也用水封过胶,貌似没看
出太大影响。
avatar
T*t
63
用水能封住。
我用水封了好几年的胶都没问题呢。最近rp有点低落,胶表面也偶然出现不太工整的情
况,才重新开始用水饱和正丁醇封的。
封胶就是为了隔绝空气嘛。混好的胶溶液的密度比水大很多,只要加水的时候小心一点
,不至于混得太厉害,分层还是很明显的。

量不是很重要,主要还是他妈的。

【在 j*********n 的大作中提到】
: 呵呵,用水能封住么?
: 你配的胶液里没水么?
: 有水的话,此水和彼水有什么差别么?
: 我在国内用异丙醇封胶,只加一点,略微能盖过分离胶就好。等加浓缩胶的时候,把异
: 丙醇倒掉,用蒸馏水冲洗一下,干了就可以加浓缩胶了。
: 在美国实验室,直接用100%乙醇封,就直接用洗瓶加满,也是等分离胶凝固了,倒掉乙
: 醇,挥发干净了再加浓缩胶。
: 凝得快肯定是他妈的(TEMED)加多了,我先后做过DGGE,SDS-PAGE,Urea PAGE,AP的量不是很重要,主要还是他妈的。
: 你试试减一下量,应该能解决。
: 又及:查了一下实验室protocol,我们一次配4 pieces,20ML胶液,加了8UL他妈的。

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a*e
64
APS solution can be stored at 4oC for 1 month.

【在 T**********t 的大作中提到】
: 我配10ml的胶只用4ul的TEMED就够了。
: 上面用水饱和的正丁醇封。
: APS一定要新鲜配,我发现哪怕是放-20度保存的APS也没有新鲜配的好用。

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T*t
65
我以前是分装了放-20。
有时候忘记收起来,放室温一个礼拜,偷懒拿来直接用也没关系。
但是每次rp不好胶凝得难看了一点的时候,新鲜配的APS总是好过冰箱里拿出来的。

【在 a***e 的大作中提到】
: APS solution can be stored at 4oC for 1 month.
avatar
C*e
66
前两条赞同
APS新不新鲜没关系,越新鲜凝得越快
我们以前实验室APS配好了放室温都能用一个月
就是慢一点

【在 T**********t 的大作中提到】
: 我配10ml的胶只用4ul的TEMED就够了。
: 上面用水饱和的正丁醇封。
: APS一定要新鲜配,我发现哪怕是放-20度保存的APS也没有新鲜配的好用。

avatar
k*o
67
减少APS或者TEMED的量,自己把握。用水,丁醇,乙醇,异丙醇封都行。APS无所谓,
我放三个多月了照样用得开心。做胶的时候没什么好紧张的,不好重新灌就是了,便宜
。只是注意千万不要沾有害物质了。一旦你灌习惯了,反而不喜欢用现成的胶。我用自
己的胶跑出来的效果比直接买的好不少。
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s*n
68
APS配完用了一年的飘过...
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y*2
69
把所有溶液都放4C储存,这样凝的就不会那么快了
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a*d
70
来这边后从来没配过胶,都忘了。。。
偶用的是invitrogen的预制胶,效果挺好的
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n*d
71
it is not necessary to use SDS and Glycerol in the gels.
use 1/100 of 10% APS, use 1/1000 TEMED, Use water to seal resolving gel. it
take ~7min to polymerize (yes, it is so reproducible)
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b*H
72
看来楼主对做凝胶的原理一点都不明白。那就是个链式反应。少用点TEMED什么问题都
解决了。根据个人的操作熟练程度而定。另外用正丁醇封胶是标准方法,去泡,均匀,
其他都是歪门邪道。
俺喜欢自己做,每天八块,想用什么样的随便做。
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c*n
73
查一下Bio-Rad的指南吧。他们的Hand cast 有很详细的说明。
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s*g
74
TEMED 16ul 太多了,我看4ul都足以了。
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d*s
75
10%APS: 40ul
TEMED 4ul
我用水饱和的1-Butanol 封胶的
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d*s
76
10%APS: 40ul
TEMED 4ul
我用水饱和的1-Butanol 封胶的
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n*d
77
用水是可以的,你试试就知道了

量不是很重要,主要还是他妈的。

【在 j*********n 的大作中提到】
: 呵呵,用水能封住么?
: 你配的胶液里没水么?
: 有水的话,此水和彼水有什么差别么?
: 我在国内用异丙醇封胶,只加一点,略微能盖过分离胶就好。等加浓缩胶的时候,把异
: 丙醇倒掉,用蒸馏水冲洗一下,干了就可以加浓缩胶了。
: 在美国实验室,直接用100%乙醇封,就直接用洗瓶加满,也是等分离胶凝固了,倒掉乙
: 醇,挥发干净了再加浓缩胶。
: 凝得快肯定是他妈的(TEMED)加多了,我先后做过DGGE,SDS-PAGE,Urea PAGE,AP的量不是很重要,主要还是他妈的。
: 你试试减一下量,应该能解决。
: 又及:查了一下实验室protocol,我们一次配4 pieces,20ML胶液,加了8UL他妈的。

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r*8
78
同意,我也都试过,看不出任何不同。

【在 T**********t 的大作中提到】
: 用水/乙醇/异丙醇封胶都可能会使分离胶表面的局部胶浓度发生变化。水饱和的正丁醇
: 因为不能够再吸收水分,所以应该是最适合封胶用的。不过我也用水封过胶,貌似没看
: 出太大影响。

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s*c
79
APS量不需要变,量少的话会不凝。最好现配防止降解。
建议认真看一下SDS PAGE的原理。。。。凝胶的化学反应中,APS相当于反应物,TEMED
相当于催化剂
乙醇封?没必要吧。。。加点水封就成了,或者那位介绍下乙醇有什么特别的好处么?
难道是乙醇等胶凝了就挥发了省的吸水?

【在 m****m 的大作中提到】
: APS也要减量吗?
: 可以用乙醇封?

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s*c
80
亲身体验,有次APS加少了(后来发现是配溶液水加多了,我一般就看着小离心管刻度加
点,结果刻度看错了...)等了一下午都没凝。。。。
凝胶速度主要是TEMED

【在 p******i 的大作中提到】
: amedio說的沒錯,肯定APS,TEMED各减半先……不過可能要等很長時間……
: 我用0.1%SDS封膠的,就是在兩邊各加一點就好了……

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