做targeting constructs，没有129 BAC clone - 未名空间MITBBS历史存档

国际科技财经博客移民网络热点娱乐民生时事公众号

Redian新闻

>未名空间

>Biology - 生物学

做targeting constructs，没有129 BAC clone

做targeting constructs，没有129 BAC clone# Biology - 生物学

S*r2010-03-25 07:03

1 楼

我目前的H1b 11月底过期,新的H1b已经批准了,从过期第二天开始.如果我9月份回国或
者去加拿大签证的话,我填写online申请信息的时候是应该填现在的I797A的Receipt No
.还是新I979A的?这种情况下,我是不是还是会有一年多次签证?谢谢了

b*p2010-03-25 07:03

2 楼

还是要交天蝎。
呵呵，你对她好，她就对你好。这不，我去年借给一个天蝎MM100，今年她还我200。。。

E*e2010-03-25 07:03

3 楼

好高兴啊。谢谢版上得精华区。

r*h2010-03-25 07:03

4 楼

请教有关专家：
在Sanger没有找到该位点的129的BAC clone，还有什么library可以推荐?比如说RPCI-
22怎么样？不过我没找到定位single clone的bioinformatics工具，比如ensembl之类。
不准备自己做hybridization to screen the clone，因为花费力气和金钱比较多；
也不希望直接打C2 ES cell line，担心效率会有所下降；
也不知道在该位点，129和C57的区别会有多大，不知道用C57的BAC做的construct打129
ES cell，会不会比较不好；
所以回到开始的问题：如果执着于129 BAC clone，除了Sanger，还有什么library选择
（如果不自己筛的话）？或者说，应该执着于129 BAC吗？
完全新手一个，简单问题比较多，贻笑大方了。谢谢！

b*p2010-03-25 07:03

5 楼

偶发10个包子。留10个以后发。
一人领一个，马甲啥的，请不要上。逮着罚你赔我10个，呵呵。

。。

【在 b*****p 的大作中提到】

: 还是要交天蝎。
: 呵呵，你对她好，她就对你好。这不，我去年借给一个天蝎MM100，今年她还我200。。。

c*p2010-03-25 07:03

6 楼

插土里的还是水里的？

g*y2010-03-25 07:03

7 楼

多年没做这个了，知识比较老化。
1.比较两个arm的sequence homology between 129 and B6.
一般的担忧是因为两个strain的序列有差别，可能影响同源重组的效率。但是如果幸运
的话也许你感兴趣的区域两者高度同源。
否则，几个OPTIONs
A。选用B6 derived ES CELL,有些service提供的。
B.让你的arm尽量长. 但是还是不能保证一定会有positive clone,要看运气，并且问题
是plasmid大到一定程度就不稳定了。比较safe的办法是用BAC recombineering做
BAC based construct.
C。 use long-range high fidelity DNA polymerase to PCR 129 genomic sequence.
这个对cloning要求有点高，并且要做sequencing确定没PCR error

【在 r**h 的大作中提到】

: 请教有关专家：
: 在Sanger没有找到该位点的129的BAC clone，还有什么library可以推荐?比如说RPCI-
: 22怎么样？不过我没找到定位single clone的bioinformatics工具，比如ensembl之类。
: 不准备自己做hybridization to screen the clone，因为花费力气和金钱比较多；
: 也不希望直接打C2 ES cell line，担心效率会有所下降；
: 也不知道在该位点，129和C57的区别会有多大，不知道用C57的BAC做的construct打129
: ES cell，会不会比较不好；
: 所以回到开始的问题：如果执着于129 BAC clone，除了Sanger，还有什么library选择
: （如果不自己筛的话）？或者说，应该执着于129 BAC吗？
: 完全新手一个，简单问题比较多，贻笑大方了。谢谢！

P*o2010-03-25 07:03

8 楼

RE~

【在 b*****p 的大作中提到】

: 偶发10个包子。留10个以后发。
: 一人领一个，马甲啥的，请不要上。逮着罚你赔我10个，呵呵。
:
: 。。

c*w2010-03-25 07:03

9 楼

偶的就木有活几根啊,还在水里,不知道什么时候能挪地里去~~~~~~~~

r*h2010-03-25 07:03

10 楼

谢谢指教。

找不到129的BAC，也许意味着129的这个位点没有测序，所以看来比较难比较两个
strain的序列。我自己也许可以PCR出来，自己测，不过感觉事倍功半。我想当然的比
较多，还请指正。
比较遗憾我们使用的service质量不算上乘，做B6 derived，有点战战兢兢。LOL...
谢谢指出这一点。我准备用recombineering，所以希望有BAC。但是如果找不到，就只
能PCR 129 arms，然后一步步酶切连接了。
sequence.
非常感谢你的答复。

【在 g***y 的大作中提到】

: 多年没做这个了，知识比较老化。
: 1.比较两个arm的sequence homology between 129 and B6.
: 一般的担忧是因为两个strain的序列有差别，可能影响同源重组的效率。但是如果幸运
: 的话也许你感兴趣的区域两者高度同源。
: 否则，几个OPTIONs
: A。选用B6 derived ES CELL,有些service提供的。
: B.让你的arm尽量长. 但是还是不能保证一定会有positive clone,要看运气，并且问题
: 是plasmid大到一定程度就不稳定了。比较safe的办法是用BAC recombineering做
: BAC based construct.
: C。 use long-range high fidelity DNA polymerase to PCR 129 genomic sequence.

a*a2010-03-25 07:03

11 楼

E*e2010-03-25 07:03

12 楼

土里。插的有点深，10cm以上。多浇水。

【在 c***p 的大作中提到】

: 插土里的还是水里的？

n*k2010-03-25 07:03

13 楼

All good suggestions...I would vote for the second one as many core facility
prefer(or only do) 129. Many have
done this including myself. I started with the C and get pretty much
everything done and then found out
through sequencing that the sequence was virtually identical to B6. But the
problem was (likely happen to
many genes), my long arm was in promoter region, containing numerous AT or
GC rich region or repeats, so it
was very hard to PCR all of them out in long pieces(BTW, for reference

【在 g***y 的大作中提到】

h*e2010-03-25 07:03

14 楼

chi~
赞天蝎mm

。。

【在 b*****p 的大作中提到】

: 还是要交天蝎。
: 呵呵，你对她好，她就对你好。这不，我去年借给一个天蝎MM100，今年她还我200。。。

s*u2010-03-25 07:03

15 楼

直接插到地里啊，埋深点，早晚多浇水。

【在 c***w 的大作中提到】

: 偶的就木有活几根啊,还在水里,不知道什么时候能挪地里去~~~~~~~~

r*h2010-03-25 07:03

16 楼

Thanks. Good to know all about your experiences and thoughts.
I guess that the sequences with apparently essential roles could be quite
conserved between 129 and B6, say, protein coding sequences, and perhaps the
promoter region you mentioned (certainly I need to carefully check with
this claim). This could be one of the reasons why you were able to go with
B6, a fortunate move. So, maybe I should take my chance to grab a B6 clone,
because the region I am eyeing for targeting is pretty close to

【在 n********k 的大作中提到】

: All good suggestions...I would vote for the second one as many core facility
: prefer(or only do) 129. Many have
: done this including myself. I started with the C and get pretty much
: everything done and then found out
: through sequencing that the sequence was virtually identical to B6. But the
: problem was (likely happen to
: many genes), my long arm was in promoter region, containing numerous AT or
: GC rich region or repeats, so it
: was very hard to PCR all of them out in long pieces(BTW, for reference

w*u2010-03-25 07:03

17 楼

c*w2010-03-25 07:03

18 楼

你说偶这边还要等些日子，偶就没敢埋土里去，准备这周末挪，本来是想上周末的~~~~
~~

【在 s**********u 的大作中提到】

: 直接插到地里啊，埋深点，早晚多浇水。

n*k2010-03-25 07:03

19 楼

First, to clarify a bit, I didn't (or meant to) claim the promoter region
very likely conserved( as it turns out,
many are but evolution has also made use of promoter changes to do tricks
as people are starting to
appreciate). Secondly, (from some of your description), are u targeting
for non-coding RNA, or splicing site
or promoter/enhancer region like that? Then that could be quite different
and I would take back much of
what I had said until you know ur targeted region is absolutely conse

【在 r**h 的大作中提到】

: Thanks. Good to know all about your experiences and thoughts.
: I guess that the sequences with apparently essential roles could be quite
: conserved between 129 and B6, say, protein coding sequences, and perhaps the
: promoter region you mentioned (certainly I need to carefully check with
: this claim). This could be one of the reasons why you were able to go with
: B6, a fortunate move. So, maybe I should take my chance to grab a B6 clone,
: because the region I am eyeing for targeting is pretty close to

b*p2010-03-25 07:03

20 楼

为啥不赞我们射手？你是哪一族的？嘻嘻

【在 h***e 的大作中提到】

: chi~
: 赞天蝎mm
:
: 。。

c*p2010-03-25 07:03

21 楼

全阴的地方可以么？我有一块阴地琢磨种点啥

h*e2010-03-25 07:03

22 楼

我是你上任之后无条件赞助包子族的哦～

【在 b*****p 的大作中提到】

: 为啥不赞我们射手？你是哪一族的？嘻嘻

s*u2010-03-25 07:03

23 楼

直接埋到地里比种在室内杯子里的要好，我在室内的死了很多，昨天埋到地里的今天查
看活得好好的，我们这里昨天80度，今天70多度，还下小雨。你看看你那里的温度吧，
白天60多度晚上52度以上就可以了，我这里晚上都是52度以上，它还活着，就说明这个
温度你可以在室外种空心菜了。

~~

【在 c***w 的大作中提到】

: 你说偶这边还要等些日子，偶就没敢埋土里去，准备这周末挪，本来是想上周末的~~~~
: ~~

p*f2010-03-25 07:03

24 楼

re~

。。

【在 b*****p 的大作中提到】

: 还是要交天蝎。
: 呵呵，你对她好，她就对你好。这不，我去年借给一个天蝎MM100，今年她还我200。。。

d*52010-03-25 07:03

25 楼

我昨天插的杆，今天发现叶子都被拖到土里了，好多都被吃了，我翻了翻土，只发现粉
红色的大蚯蚓。还有可能是什么虫吗？

q*r2010-03-25 07:03

26 楼

re
主帖可以改名“借钱要借天蝎女”，哈哈。

【在 b*****p 的大作中提到】

: 偶发10个包子。留10个以后发。
: 一人领一个，马甲啥的，请不要上。逮着罚你赔我10个，呵呵。
:
: 。。

c*w2010-03-25 07:03

27 楼

周四最低四十，偶还是等等了，感觉能挂的都已经挂了~

直接埋到地里比种在室内杯子里的要好，我在室内的死了很多，昨天埋到地里的今天查
看活得好好的，我们这里昨天80度，今天70多度，还下小雨。你看看你那里的温度吧，
白天60多度晚上52........
★ Sent from iPhone App: iReader Mitbbs Lite 7.56

【在 s**********u 的大作中提到】

: 直接埋到地里比种在室内杯子里的要好，我在室内的死了很多，昨天埋到地里的今天查
: 看活得好好的，我们这里昨天80度，今天70多度，还下小雨。你看看你那里的温度吧，
: 白天60多度晚上52度以上就可以了，我这里晚上都是52度以上，它还活着，就说明这个
: 温度你可以在室外种空心菜了。
:
: ~~

r*12010-03-25 07:03

28 楼

。。
年利率100%？你太不厚道了。。。

【在 b*****p 的大作中提到】

: 还是要交天蝎。
: 呵呵，你对她好，她就对你好。这不，我去年借给一个天蝎MM100，今年她还我200。。。

s*u2010-03-25 07:03

29 楼

那你还是等等吧，不急，空心菜不需要很长时间的，你今年肯定能吃上自己种的空心菜
。我这里这个周末最低温度是52度，我估计我的空心菜会OK。

【在 c***w 的大作中提到】

: 周四最低四十，偶还是等等了，感觉能挂的都已经挂了~
:
: 直接埋到地里比种在室内杯子里的要好，我在室内的死了很多，昨天埋到地里的今天查
: 看活得好好的，我们这里昨天80度，今天70多度，还下小雨。你看看你那里的温度吧，
: 白天60多度晚上52........
: ★ Sent from iPhone App: iReader Mitbbs Lite 7.56

b*p2010-03-25 07:03

30 楼

呵呵，我那是瞎闹。慢慢你就知道了。。。
谢谢慷慨的射手版版美眉。

【在 h***e 的大作中提到】

: 我是你上任之后无条件赞助包子族的哦～

B*e2010-03-25 07:03

31 楼

请见站内信。谢谢！

【在 s**********u 的大作中提到】

: 那你还是等等吧，不急，空心菜不需要很长时间的，你今年肯定能吃上自己种的空心菜
: 。我这里这个周末最低温度是52度，我估计我的空心菜会OK。

c*42010-03-25 07:03

32 楼

向我借吧，你会有想象不到的收获。

s*u2010-03-25 07:03

33 楼

没看到啊，你忘记发了？

【在 B*********e 的大作中提到】

: 请见站内信。谢谢！

h*e2010-03-25 07:03

34 楼

哈哈。。。发现我和mm好像哦。。。
果然是一族的。。
相似的“瞎闹”，雷同的“矫情”，连闹完之后立马认错。。。。。
都一模一样。。
咳咳。。

【在 b*****p 的大作中提到】

: 呵呵，我那是瞎闹。慢慢你就知道了。。。
: 谢谢慷慨的射手版版美眉。

b*p2010-03-25 07:03

35 楼

偶没有要利率啊。。。有人跟我要包子，发现偶钱袋空空，偶想起了她，顺便班上提说
了下，人很快就给了我200.
这个朋友马甲多多，还老玩自杀，偶想退回去，也不知道退谁。。。于是分给大家，独
乐乐不如众乐乐。。。

【在 r*********1 的大作中提到】

:
: 。。
: 年利率100%？你太不厚道了。。。

b*p2010-03-25 07:03

36 楼

我是借给别人。偶从不借钱的。。。怎么说偶也是射手。。。我们向来是散钱的主。。。

【在 c*****4 的大作中提到】

: 向我借吧，你会有想象不到的收获。

b*p2010-03-25 07:03

37 楼

呵呵，是哦。
不过，朋友在我心目中更重要。也不知道她又化作啥马甲了。。。

【在 q******r 的大作中提到】

: re
: 主帖可以改名“借钱要借天蝎女”，哈哈。

m*p2010-03-25 07:03

38 楼

re

【在 b*****p 的大作中提到】

: 呵呵，是哦。
: 不过，朋友在我心目中更重要。也不知道她又化作啥马甲了。。。

r*12010-03-25 07:03

39 楼

呵呵，那就赶紧的发吧！
我就那么一说，射射mm也甭解释了。。
ft，怎么叫你射射mm这么别扭呢。。得，发完包子就忽略我吧~~

【在 b*****p 的大作中提到】

: 偶没有要利率啊。。。有人跟我要包子，发现偶钱袋空空，偶想起了她，顺便班上提说
: 了下，人很快就给了我200.
: 这个朋友马甲多多，还老玩自杀，偶想退回去，也不知道退谁。。。于是分给大家，独
: 乐乐不如众乐乐。。。

r*12010-03-25 07:03

40 楼

包子收到，谢谢舞美！

b*p2010-03-25 07:03

41 楼

叫我舞美就好

【在 r*********1 的大作中提到】

: 包子收到，谢谢舞美！

q*r2010-03-25 07:03

42 楼

原来如此，谢舞美大方：）

【在 b*****p 的大作中提到】

m*p2010-03-25 07:03

43 楼

XIEXIE

【在 q******r 的大作中提到】

: 原来如此，谢舞美大方：）

b*p2010-03-25 07:03

44 楼

这个是谁的。。。马甲？

【在 m**p 的大作中提到】

: XIEXIE

b*n2010-03-25 07:03

45 楼

thanks for baozi

【在 b*****p 的大作中提到】

: 叫我舞美就好

w*12010-03-25 07:03

46 楼

w*12010-03-25 07:03

47 楼

P*m2010-03-25 07:03

48 楼

呵呵，偶没做啥错事啊。就想逗天蝎，看天蝎急。。。，嘻嘻。

【在 h***e 的大作中提到】

: 哈哈。。。发现我和mm好像哦。。。
: 果然是一族的。。
: 相似的“瞎闹”，雷同的“矫情”，连闹完之后立马认错。。。。。
: 都一模一样。。
: 咳咳。。