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3T3 transfection效率太低
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3T3 transfection效率太低# Biology - 生物学
b*1
1 楼
平时做西点比较多。
不知道应该选电炉还是气炉。如果要换电的oven+gas的range又成本太高，牵扯到要重
装修厨房。
我想选择的是双门的电炉，或是天然气炉子，或者是双门的天然气炉
像这种
http://www.rangecookerreviews.com/ge/ge-pb975smss-double-oven-range-cooker-review/
有人说天然气的烤箱温度不准，而且经常变化
但是天然气的炉子有省能源一些，真的是很难选啊，大家给点建议吧
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s*o
2 楼
BOA的烂CC不想再用了，如果等着被关，是不是会对信用记录有影响？相比于主动关呢？
谢谢
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s*x
3 楼
由成龙、范冰冰（范爷）、约翰尼-诺克斯维尔联袂主演的动作喜剧《绝地逃亡》昨日在上海宣布影片将于12月24日公映。不知是否成龙太久没有见范爷，不知道她的新恋情之余，还不知道李晨是谁，闹出了小笑话。当主持人介绍李晨是范冰冰的男友时，成龙懵懂不知状：“李晨是谁？是演《武林外传》的吗？”引起大家哄笑，过了一分钟，成龙终于想起来了，“我想起来了，演《武林外传》的是姚晨！搞错了。”让范冰冰也大笑不已。
范爷在这部电影中有打戏，现场她被问到有没有向李晨报备或请教，主持人刘仪伟就解围：“拍的时候还没那事呢！”成龙火上浇油问：“什么事。”刘仪伟只能乖乖普及李晨：“跟你普及一下，有一个叫李晨的演员，你认识吗？他是冰冰的男朋友。”成龙一副懵然不知的样子：“冰冰有男朋友了？绝对不可能，她没跟我说啊，李晨是演《武林外传》的吗？”引起大家哄笑，在刘仪伟打圆场时，成龙继续想，突然恍然大悟说：“演《武林外传》的是姚晨！我终于想起来了，李晨是男的。”
后来成龙被问到什么样的男生才配得起范爷，成龙又笑说：“我不骗你，我觉得范冰冰应该找类似我这种人，同年龄的不行，年龄要比她大30来岁的才行。
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p*g
4 楼
☆─────────────────────────────────────☆
Slytherin (小余|小则|小成|小自|小来|小熟) 于 (Wed Apr 4 02:01:52 2012, 美东) 提到:
写诗的人是可耻的
谨以此文献给版二宝贝。文中素材，来自今晚灌水。
（一）
伊躺在我的胸口。柔顺的夜风，细软的海滩，呢喃的波浪，皎洁的明月。"小余，你知道
我最喜欢什么么？"她轻轻地问道。"不知道，"我老老实实地回答。她轻轻叹了口气："
和你说过好多遍了，我喜欢诗。"我的头脑里有什么东西闪过。是的，她好像是提过好多
次。"这不能怨我啊，"我无力地抱怨着："你每次都让我猜你最喜欢什么诗。这么多的诗
，你让我怎么猜？"
伊笑了。嘤咛一声，将脸庞深深埋在我的胸口。我抚摸着她的秀发，低低说道："是不是
此情此景，又让你想起了你喜欢的那首诗。""你猜嘛，"她撒着娇。"海上生明月，天涯
共此时？"我有些心不在焉地说道。"不对，这个你以前就猜过了，"她有些生气地坐起来
，定定地看着我。
月光洒在她修长白皙的脖颈上，折射在她灵动地双眸里，很美。"黑夜给了我黑色的眼睛
，我却用她来寻找光明，"我痴痴地看着伊："你就是我的光明。"
伊笑了，眼神中有一丝激动，一丝爱意，还有一丝失望。
（二）
祖父的藏书里，颇有几本是论诗词写作的。不知道为什么，祖父允许我看所有的书，就
是不准我看关于诗词的书。像所有的小孩子一样，越是大人不准的，就越是好奇。我于
是无数次的溜进书房，偷看那些关于诗词的"禁书。"终于有一次，被祖父抓了个现行。
我紧张异常，可是期待中的暴风雨并没有到来。他只是轻叹了口气，说道："你都看出了
什么心得？""心得到是没有，"我心虚地说着；"只是这'诗有别才，非关书也'一句不是
太明白。"祖父点了点头，没有说什么。"可是杜甫不是也说过'读书破万卷，下笔如有神
么？'"我大胆起来。祖父拿起他的烟袋，在我额头上轻轻敲了一下："人家行了万里路，
你呢？"
我知道祖父也是行了万里路的人。我也知道，祖父也喜欢写诗。不过大部分的诗稿，都
在历次政治运动中丢失了。唯一保存下来的，是一句没写完的诗。"孤舟昨夜听春雨。"
发黄的纸上写着民国三十二年。下面还有一句，"孤舟昨夜眠春雨，"后面是1951年。紧
接着，"孤舟昨夜伤春雨，"1968年。最后一句是"孤舟昨夜听春雨。"1998年。那一年，
是祖母去世的日子。
一句诗，推敲了几十年。从一个"听"字，到"眠，"到"伤"，又回到了"听。"凝重的历史
循环么？我不知道。
（三）
子曰："小子何莫学夫诗？诗可以兴，可以观，可以群，可以怨。迩之事父，远之事君，
多识于鸟兽草木之名。"白话翻译：孔子说："同学们怎么不学诗呢？诗可以激发情志，
可以观察社会，可以交往朋友，可以抱怨吐嘈。近可以侍奉父母，远可以侍奉君王，还
可以知道不少鸟兽草木的名称。"我哈哈笑了，孔老夫子还是很欢乐的。
伊的头像亮了。"生日快乐，"我赶紧发了个WINK。"我要礼物，"伊WINK BACK。"说吧，
"我大方地说道。"算了，"她沉默了一会儿；"谢谢你还记得。这么多年了。"我无言，也
只能发个笑脸。"对了，你今年猜出来那首诗了么？""没有，"我终于鼓足了勇气："你为
什么这么执着于诗？诗有什么用？"
她沉默了一会儿。"如果说诗没有用，可能是你没用过吧，"她最后的短信："晚安。"
（四）
"很多人问我为什么写诗？真的是因为我寂寞。诗是在一无所有的旷野里，想办法找来一
些材料盖起来的一个挡风避雨的房子。我想用我的诗，把我的错过改变一下，把那些好
的日子留下一点。 我说过我要成熟的。 "
看到六十多岁的席慕蓉激动地老泪纵横，我也突然觉得自己成熟了很多。那是因为，我
终于学会了写诗。而且好像还写的不错，而且好像大家还都叫我菜籽。可是写诗，就像
是菜籽榨油，是痛苦的煎熬，是痛苦的付出，是痛苦的失去。
每写一首诗，就好像把自己灵魂的一部分，封存在那些词句里，或束之高阁，或随风散
去。从此不再想起，从此不再回忆。
"你知道么，你一直对我很MEAN，"伊淡淡地说到。"有么？"我苦苦地搜索着记忆，真的
是想不起来了："有什么例子么？""是在我心里吧，"她依旧淡淡地说道，伤感却穿越了
屏幕："对了，听说你现在写诗写的很好？""还可以吧，"我有些心虚地说："今年不要我
猜你的那首诗了？""算了，反正你也猜不到，"她笑了笑："也没什么用，还是看看你的
大作吧。"
（五）
我固执的以为，我其实是知道她的那个问题的答案的。她最喜欢的诗，应该是我为她写
的。难道不是么？难道爱情不是古往今来对诗人最好的启发么？难道情人的诗不是最好
的诗么？难道，难道。。。为什么我一边写着诗，一边有这么多的问题？难道我是十万
个为什么么？很多年以后，我才知道，我不是诗人，我的名字叫小明。
小明固执的以为，诗是生活的精华，是生活的升华。我用我的灵魂在为你写诗，又怎么
会不是你最喜欢的诗？可是我万万没有想到，我最得意的诗，是在你离我而去的时候写
的。难道不是么--《街角的咖啡店》
我点了你爱喝的咖啡/把过去细细品位/可是我麻木的味蕾/已经无法捕捉你的姣美/我点
了生活的狼狈/你说你觉得很累/对着爱情转过脊背/你竟决定不做我的宝贝/我点了心灵
的疲惫/甘愿放你去远飞/是不是我不停的给/你就会回来轻轻将我陪/我点了灵魂的昏黑
，看不到雪国白梅/流尽我今生的眼泪/还要我预付来世的伤悲/我点了你爱喝的咖啡/我
的宝贝，我不愿意做你的纸杯，总是被你扔没/再次闻到这咖啡的香味/我的宝贝，就让
我做你永久的水杯，冬天里温暖着你的手背。
（六）
Oh Yeah!我是诗人了！我在网上悠闲地逛着，如同大师接受鲜花般地吃着包子。是的，
让包子来的更猛烈些吧！
"Then Katie screamed out from nowhere, "Does anyone know why G-string is cal
led G string?" OMG, immediately we all took out our iPhones and started to s
earch the wiki to look up G-string. Normal people would reply back to her, "
Heck! Why did you just ask that?" We are nerds, who like to solve problems a
nd get to the bottom of IT! It turns out that G stands for GROIN! We laughed
so hard!!!"
我莞尔。头一次看到伊写这样的帖子。是的，她和她的朋友在面对这样一个问题时，竟
然本能地去查网络。她们，的确是nerds。
"沙发"我赶紧回复。"你根本没好好看啊，"她生气了："罚你写首诗！"
小菜一碟嘛。我心想。"孤舟昨夜听春雨。。"奇怪地很，这一句竟然率先蹦到了我的脑
海里。我突然间有些明白了，原来，我一直是爱情的Nerd
（七）
祖父一直没告诉我为什么一个字，他推敲了几十年。他只告诉我，那首诗本来是写给祖
母的。再我再三追问下，他只加了一句，春雨是用来听的。
王国维后来在《人间词话》里说，诗"有有我之境，有无我之境。"听，便是无我。眠和
伤，便是有我。是的，人可以眠春雨，可以伤春雨，可是只有听，才能真正地懂春雨。
我的高傲，我的自负，让我变成爱情的NERD。我如此痴迷为你写诗，却忽略了你的感受
。面对伊的问题，我本应该老老实实地说："Heck! Why did you just ask that? 我不
知道，告诉我吧。"
是的，告诉我吧。你喜欢的诗一定是最好的。你喜欢的诗一定也是我最喜欢的。我还会
告诉我们的孩子，我们的孩子的孩子，这首诗，是全世界最好的。
可是我却执着于写自己的诗。写诗的人是可耻的。
可惜，现在我想继续做这样可耻的人也是不能的了。因为我将用我的一生，去推敲那个
永远也决定不下来的字。刘体仁说，"词起结最难，而结尤难于起，盖不欲转入别调也。
"意思就是说，写诗写词开头很难，但是结尾更难，因为开头的韵律，调子定了，越往后
写就越不能改韵律和调子了。
你，就是我那个永远也推敲不完的字。你，就是那个我想改也改不了的韵。
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ppxwwtaking ( 苒苒) 于 (Wed Apr 4 02:12:24 2012, 美东) 提到:
不是给我的，略过～
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Slytherin (小余|小则|小成|小自|小来|小熟) 于 (Wed Apr 4 02:17:11 2012, 美东) 提到:
你没回答我的问题嘛

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huhuzhuwang (Keepbuying) 于 (Wed Apr 4 09:29:51 2012, 美东) 提到:
nnd……小余在这里一天，我就只当看客吧
把个版二写得跟仙女似的，你说哪个女ID不稀罕他？！
知道
："
好多
的诗
不是
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LAV (辣舞红裙) 于 (Wed Apr 4 09:30:58 2012, 美东) 提到:
佩服，写得很好。
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ppxwwtaking ( 苒苒) 于 (Wed Apr 4 10:10:21 2012, 美东) 提到:
回答了，还两遍呢
☆─────────────────────────────────────☆
baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 10:46:40 2012, 美东) 提到:
昨天晚上睡了7个小时，本来很好奇，想半夜醒来看看你都发的啥。
今天早上下床之前读完了，我没给笑喷死。
你真是太有才了，乱七八糟聊天的你都能忽悠成这样。这跟你以往在文情的风格很不一
样。
虽然你占我便宜，我忍了。
写的不错～
知道
："
好多
的诗
不是
☆─────────────────────────────────────☆
baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 10:50:04 2012, 美东) 提到:
你给她包子
☆─────────────────────────────────────☆
baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 10:50:50 2012, 美东) 提到:
你要不要尝试一下把我写成公主？
patpat
他巨能忽悠。
☆─────────────────────────────────────☆
baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 10:51:08 2012, 美东) 提到:
patpat
你不知到这个的来源啊。
☆─────────────────────────────────────☆
ppxwwtaking ( 苒苒) 于 (Wed Apr 4 11:21:13 2012, 美东) 提到:
他估计爱上你了
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Mwrong (I am wrong) 于 (Wed Apr 4 11:22:48 2012, 美东) 提到:
板凳，坐等喜糖
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baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 11:28:03 2012, 美东) 提到:
你怎么知道？
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baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 11:31:22 2012, 美东) 提到:
???????
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Mwrong (I am wrong) 于 (Wed Apr 4 11:32:40 2012, 美东) 提到:
高兴事要发欢喜糖，大家都吃喜气洋洋
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baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 11:34:54 2012, 美东) 提到:
傻高兴事情？
怎么就觉得你一个人偷乐，你应该发。
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Mwrong (I am wrong) 于 (Wed Apr 4 11:35:36 2012, 美东) 提到:
我正在吃
发不过去
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huhuzhuwang (Keepbuying) 于 (Wed Apr 4 11:54:54 2012, 美东) 提到:
我那点文笔，就不献丑了
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huhuzhuwang (Keepbuying) 于 (Wed Apr 4 11:55:32 2012, 美东) 提到:
汗……跟你说的悄悄话，你怎么像个大喇叭这么广播？
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baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 11:59:05 2012, 美东) 提到:
爱的不够深。。。
lol
patpat
☆─────────────────────────────────────☆
baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 11:59:39 2012, 美东) 提到:
lol
批mj出来。
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huhuzhuwang (Keepbuying) 于 (Wed Apr 4 12:05:40 2012, 美东) 提到:
宝贝儿，夜半无人私语时
呵呵……
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baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 12:12:00 2012, 美东) 提到:
恩恩恩
可是我打呼噜来着，听不见！
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skycaptain08 (太尉) 于 (Wed Apr 4 12:14:40 2012, 美东) 提到:
最近祖父出来很多次啊, 是不是清明天人感应?
知道
："
好多
的诗
不是
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baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 12:15:27 2012, 美东) 提到:
太尉！orbi-trap的result出来了！
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Slytherin (小余|小则|小成|小自|小来|小熟) 于 (Wed Apr 4 12:16:20 2012, 美东) 提到:
lol,兄台果酱了。我那是交作业
☆─────────────────────────────────────☆
skycaptain08 (太尉) 于 (Wed Apr 4 12:16:21 2012, 美东) 提到:
how things go? got protein u wanted?
☆─────────────────────────────────────☆
Slytherin (小余|小则|小成|小自|小来|小熟) 于 (Wed Apr 4 12:16:47 2012, 美东) 提到:
谢谢红妹
☆─────────────────────────────────────☆
Slytherin (小余|小则|小成|小自|小来|小熟) 于 (Wed Apr 4 12:18:35 2012, 美东) 提到:
晕，真是包子啊
☆─────────────────────────────────────☆
Slytherin (小余|小则|小成|小自|小来|小熟) 于 (Wed Apr 4 12:19:04 2012, 美东) 提到:
what,这就叫占了便宜了，我太亏了
☆─────────────────────────────────────☆
huhuzhuwang (Keepbuying) 于 (Wed Apr 4 12:19:33 2012, 美东) 提到:
这样回答可行？
爱就要像小余，大声说出来
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baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 12:19:42 2012, 美东) 提到:
lol
☆─────────────────────────────────────☆
baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 12:20:02 2012, 美东) 提到:
yesssss!!!!
lol
i am so damn good!
oh yeah!
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Slytherin (小余|小则|小成|小自|小来|小熟) 于 (Wed Apr 4 12:20:15 2012, 美东) 提到:
co-deng
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skycaptain08 (太尉) 于 (Wed Apr 4 12:20:40 2012, 美东) 提到:
guess a HSP?
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baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 12:21:51 2012, 美东) 提到:
意淫啊，哥哥！
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Slytherin (小余|小则|小成|小自|小来|小熟) 于 (Wed Apr 4 12:21:57 2012, 美东) 提到:
太尉兄所言极是啊。最近老坐清明梦啊
☆─────────────────────────────────────☆
baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 12:22:26 2012, 美东) 提到:
他有说爱吗？
爱啊爱啊爱啊爱啊，爱的我累死了
你说句我听听
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baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 12:22:40 2012, 美东) 提到:
deng!
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baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 12:23:03 2012, 美东) 提到:
哈哈，no this one is sexier than hsp!!! but hsp is there.
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skycaptain08 (太尉) 于 (Wed Apr 4 12:23:23 2012, 美东) 提到:
patpat. aging开始 . 额天天晚上跟去世的人喝茶聊天, 见怪不怪了.
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huhuzhuwang (Keepbuying) 于 (Wed Apr 4 12:23:27 2012, 美东) 提到:
不用抄作业的人真是幸福啊
lol
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skycaptain08 (太尉) 于 (Wed Apr 4 12:24:16 2012, 美东) 提到:
true. HSP is too generic. cong anyway. a good paper to professor SWAK!
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Slytherin (小余|小则|小成|小自|小来|小熟) 于 (Wed Apr 4 12:24:50 2012, 美东) 提到:
lol,赞，是条汉子！
☆─────────────────────────────────────☆
baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 12:25:05 2012, 美东) 提到:
你给我炒个，我等！
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baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 12:25:16 2012, 美东) 提到:
你的写英文的
☆─────────────────────────────────────☆
Slytherin (小余|小则|小成|小自|小来|小熟) 于 (Wed Apr 4 12:25:46 2012, 美东) 提到:
你写这么直白感性的文字，我都觉得不好意思了
☆─────────────────────────────────────☆
baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 12:26:09 2012, 美东) 提到:
lol
not yet.....
☆─────────────────────────────────────☆
Slytherin (小余|小则|小成|小自|小来|小熟) 于 (Wed Apr 4 12:26:13 2012, 美东) 提到:
什么茶？
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skycaptain08 (太尉) 于 (Wed Apr 4 12:27:02 2012, 美东) 提到:
跎跎茶, 然后用河水煮.
☆─────────────────────────────────────☆
baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 12:27:06 2012, 美东) 提到:
没事儿，你换mj接着来
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baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 12:27:24 2012, 美东) 提到:
他泡妹妹茶
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skycaptain08 (太尉) 于 (Wed Apr 4 12:28:06 2012, 美东) 提到:
....
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Slytherin (小余|小则|小成|小自|小来|小熟) 于 (Wed Apr 4 12:28:26 2012, 美东) 提到:
啊，套一个东西还不够？
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huhuzhuwang (Keepbuying) 于 (Wed Apr 4 12:29:17 2012, 美东) 提到:
哈哈……有你这么夸奖自己的？
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baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 12:29:27 2012, 美东) 提到:
说你心里去了。。。。嘻嘻
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baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 12:29:47 2012, 美东) 提到:
你mj也多吧，puff
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huhuzhuwang (Keepbuying) 于 (Wed Apr 4 12:29:55 2012, 美东) 提到:
倒，中文的都写不好，还要英文的
你这是要杀人吗？
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Slytherin (小余|小则|小成|小自|小来|小熟) 于 (Wed Apr 4 12:29:56 2012, 美东) 提到:
啊，这不是你对版2喊的么？
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Slytherin (小余|小则|小成|小自|小来|小熟) 于 (Wed Apr 4 12:30:29 2012, 美东) 提到:
4个而已 slytherin, ravenclaw, gryffindor, hufflepuff
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baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 12:31:03 2012, 美东) 提到:
//wink
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huhuzhuwang (Keepbuying) 于 (Wed Apr 4 12:31:33 2012, 美东) 提到:
呵呵……老兄你没跟上
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baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 12:31:36 2012, 美东) 提到:
@@
这么直白。佩服！
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skycaptain08 (太尉) 于 (Wed Apr 4 12:32:05 2012, 美东) 提到:
aihahahaha?
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baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 12:32:18 2012, 美东) 提到:
肚子饿了，吃饭去了。
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baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 12:32:38 2012, 美东) 提到:
对啊，他有好多。。。。
我吃饭去了，饿！
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abbadozju (味精) 于 (Wed Apr 4 12:33:04 2012, 美东) 提到:
太赞了，真的是七绝啊！
第一段到第七段这种跨越太有才了。
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skycaptain08 (太尉) 于 (Wed Apr 4 12:33:49 2012, 美东) 提到:
你多读两遍.
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skycaptain08 (太尉) 于 (Wed Apr 4 12:33:56 2012, 美东) 提到:
好.
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Slytherin (小余|小则|小成|小自|小来|小熟) 于 (Wed Apr 4 13:02:43 2012, 美东) 提到:
味精mm果酱了
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abbadozju (味精) 于 (Wed Apr 4 13:07:46 2012, 美东) 提到:
哈哈哈，你估计是不混乐版滴。
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Slytherin (小余|小则|小成|小自|小来|小熟) 于 (Wed Apr 4 13:08:25 2012, 美东) 提到:
偶尔去看看
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abbadozju (味精) 于 (Wed Apr 4 13:09:37 2012, 美东) 提到:
这有个链接，估计不是mm唱得。
http://www.mitbbs.com/article_t/Music/31443037.html
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huhuzhuwang (Keepbuying) 于 (Wed Apr 4 13:11:06 2012, 美东) 提到:
有打广告之嫌，lol
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Slytherin (小余|小则|小成|小自|小来|小熟) 于 (Wed Apr 4 13:11:08 2012, 美东) 提到:
哦，抱歉抱歉，原来是味精兄
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baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 13:11:09 2012, 美东) 提到:
他是哥哥 pat
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abbadozju (味精) 于 (Wed Apr 4 13:11:49 2012, 美东) 提到:
嘿嘿，我在乐版不需要打广告。
在这里需要。
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Slytherin (小余|小则|小成|小自|小来|小熟) 于 (Wed Apr 4 13:11:53 2012, 美东) 提到:
唉，用telnet看不到投降啊
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abbadozju (味精) 于 (Wed Apr 4 13:12:48 2012, 美东) 提到:
还这么原始啊？
哈哈哈。
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baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 13:12:56 2012, 美东) 提到:
他不是，他是文情版四。
你用谱子，他用笔杆子
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abbadozju (味精) 于 (Wed Apr 4 13:13:28 2012, 美东) 提到:
那是个啥版？
介绍一下？
☆─────────────────────────────────────☆
huhuzhuwang (Keepbuying) 于 (Wed Apr 4 13:13:34 2012, 美东) 提到:
知道你是乐版名角，开个玩笑
☆─────────────────────────────────────☆
abbadozju (味精) 于 (Wed Apr 4 13:14:22 2012, 美东) 提到:
呵呵，这又是说笑了。
我只是乐版起哄帮滴，
负责起哄灌水。
☆─────────────────────────────────────☆
huhuzhuwang (Keepbuying) 于 (Wed Apr 4 13:14:28 2012, 美东) 提到:
这就是写的不如说的，说的不如唱的啦
☆─────────────────────────────────────☆
abbadozju (味精) 于 (Wed Apr 4 13:15:08 2012, 美东) 提到:
呵呵，
明明是：
说的比唱的好听，
写的比唱的煽情。
☆─────────────────────────────────────☆
baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 13:15:11 2012, 美东) 提到:
没听过你唱这个，抽烟的嗓子也唱的这么柔情。
☆─────────────────────────────────────☆
baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 13:15:26 2012, 美东) 提到:
你嫉妒吧，你唱我给你广告
☆─────────────────────────────────────☆
baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 13:16:26 2012, 美东) 提到:
是，我前天也猜错一人，把头发猜成女人了。他气的要死
☆─────────────────────────────────────☆
abbadozju (味精) 于 (Wed Apr 4 13:17:03 2012, 美东) 提到:
哈哈哈，那就再来个烟嗓子滴。
http://www.mitbbs.com/article0/Music/31399347_0.html
☆─────────────────────────────────────☆
baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 13:17:08 2012, 美东) 提到:
是，很原始。
呵呵
☆─────────────────────────────────────☆
baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 13:17:23 2012, 美东) 提到:
lovenlust
你去看去
☆─────────────────────────────────────☆
baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 13:17:41 2012, 美东) 提到:
你也是潜水名角
☆─────────────────────────────────────☆
abbadozju (味精) 于 (Wed Apr 4 13:18:09 2012, 美东) 提到:
这个我知道，
之前有个写歌词的是在那里混的。
☆─────────────────────────────────────☆
huhuzhuwang (Keepbuying) 于 (Wed Apr 4 13:19:11 2012, 美东) 提到:
我是彻底乐版门外汉
指导一把？
☆─────────────────────────────────────☆
baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 13:19:34 2012, 美东) 提到:
你呢？
唱的不如灌的
☆─────────────────────────────────────☆
baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 13:19:52 2012, 美东) 提到:
味精哥，你也是哥笔杆子。
☆─────────────────────────────────────☆
huhuzhuwang (Keepbuying) 于 (Wed Apr 4 13:20:52 2012, 美东) 提到:
呵呵……我已经在唱了，你录下来了？
☆─────────────────────────────────────☆
huhuzhuwang (Keepbuying) 于 (Wed Apr 4 13:21:39 2012, 美东) 提到:
我的？我的是唱的不如鼓掌的
☆─────────────────────────────────────☆
baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 13:21:57 2012, 美东) 提到:
赞！！！
这个唱的有味道。。。很多味精
☆─────────────────────────────────────☆
baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 13:22:38 2012, 美东) 提到:
是，我知道，还有人唱了呢。是你吗？我忘记了。。。。曲子谱的很好。好像是你。
☆─────────────────────────────────────☆
baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 13:23:04 2012, 美东) 提到:
yay!你要唱了，i can sense it!
☆─────────────────────────────────────☆
baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 13:23:28 2012, 美东) 提到:
好啊。。。。//wink
你唱我听。。。激动
☆─────────────────────────────────────☆
baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 13:23:53 2012, 美东) 提到:
我鼓掌！！！pia pia pia pia
☆─────────────────────────────────────☆
huhuzhuwang (Keepbuying) 于 (Wed Apr 4 13:45:56 2012, 美东) 提到:
唉……买不起设备，就自个儿哼哼吧
☆─────────────────────────────────────☆
abbadozju (味精) 于 (Wed Apr 4 14:47:06 2012, 美东) 提到:
哦，那个是我。
文亲们写滴歌词和楼主写的第一段如出一辙。
反正就是各种缠绵之类了。
http://www.mitbbs.com/article0/Music/31453983_0.html
☆─────────────────────────────────────☆
CABOY (黑白世界) 于 (Wed Apr 4 14:56:33 2012, 美东) 提到:
放屁！
☆─────────────────────────────────────☆
baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 15:27:06 2012, 美东) 提到:
我记得的，我记性很好。
谱的也很好！当然这个更喜欢，因为是宝贝儿嘛。:)
你唱的也很好！！！
☆─────────────────────────────────────☆
baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 15:28:32 2012, 美东) 提到:
好凶
☆─────────────────────────────────────☆
huhuzhuwang (Keepbuying) 于 (Wed Apr 4 15:48:15 2012, 美东) 提到:
错啦，是
好臭
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baobdd (宝贝儿) 于 (Wed Apr 4 15:55:48 2012, 美东) 提到:
lol
☆─────────────────────────────────────☆
Kua (苦阿) 于 (Wed Apr 4 15:58:25 2012, 美东) 提到:
真的写得太赞了。很久没读过这么好的文章。
有空看来要去翻翻小余文情的yy文了。
☆─────────────────────────────────────☆
Kua (苦阿) 于 (Wed Apr 4 15:59:37 2012, 美东) 提到:
看了他的，自己再写就像小学生了。
☆─────────────────────────────────────☆
Kua (苦阿) 于 (Wed Apr 4 16:00:45 2012, 美东) 提到:
什么来源？
☆─────────────────────────────────────☆
aiyawei (爱亚尉) 于 (Wed Apr 4 16:01:31 2012, 美东) 提到:
嗯，以后改行编故事
知道
："
好多
的诗
不是
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Kua (苦阿) 于 (Wed Apr 4 16:02:52 2012, 美东) 提到:
你讲讲。
☆─────────────────────────────────────☆
huhuzhuwang (Keepbuying) 于 (Wed Apr 4 16:03:28 2012, 美东) 提到:
明白了？明白了
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ppxwwtaking ( 苒苒) 于 (Wed Apr 4 16:21:39 2012, 美东) 提到:
唉....不说还好，说了更不敢写了
☆─────────────────────────────────────☆
Slytherin (小余|小则|小成|小自|小来|小熟) 于 (Wed Apr 4 17:09:28 2012, 美东) 提到:
wk,不带你这么谦虚的啊
☆─────────────────────────────────────☆
fore (你六毛，我六毛，咱俩一块二) 于 (Thu Apr 5 18:36:34 2012, 美东) 提到:
2012年，您就改成
孤舟昨夜行春雨
撩
知道
："
好多
的诗
不是
☆─────────────────────────────────────☆
megguan (RP-AD-S36-W5-V2-SFM) 于 (Thu Apr 5 19:17:28 2012, 美东) 提到:
小余你又上了首页。
倒数第二段写的好。
知道
："
好多
的诗
不是
☆─────────────────────────────────────☆
Slytherin (小余|小则|小成|小自|小来|小熟) 于 (Fri Apr 6 11:42:26 2012, 美东) 提到:
上船了?
☆─────────────────────────────────────☆
Slytherin (小余|小则|小成|小自|小来|小熟) 于 (Fri Apr 6 11:42:41 2012, 美东) 提到:
head down
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d*h
5 楼
野花牌脑残胶囊，还没做完，我要让布什或者 TED HADDARD 来做广告，还差一个另外
一个图呢
这个也没做完
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C*h
6 楼
用lipofectamine 2000转染3T3细胞，但是transfection效率太低（不到1％），
不知道是怎么回事？
0.8 ug plasmid DNA + 2 ul lipofectamine
转染1x10^5细胞。
不知道大家是怎么检测shRNA的knockdown的效果？
我是把带有shRNA的plasmid，转染到3T3细胞，然后用western blot检测蛋白质，
看目标蛋白是不是减少了。
可是现在转染效率不到1％，就算shRNA把那1％的细胞内的目标蛋白全部knockdown，
总个western blot还剩下99％的蛋白质。
有什么办法提高3T3细胞的转染率？有人转染过这个细胞系吗？请帮忙指教一下。谢谢。
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l*j
7 楼
电的也可以
不管什么烤箱，买个温度计控制好温度就可以了
国内新出了一款长帝电烤箱，电脑控制，数字温度控制，功能很傻瓜很强大，据说非常好

【在 b*******1 的大作中提到】
: 平时做西点比较多。
: 不知道应该选电炉还是气炉。如果要换电的oven+gas的range又成本太高，牵扯到要重
: 装修厨房。
: 我想选择的是双门的电炉，或是天然气炉子，或者是双门的天然气炉
: 像这种
: http://www.rangecookerreviews.com/ge/ge-pb975smss-double-oven-range-cooker-review/
: 有人说天然气的烤箱温度不准，而且经常变化
: 但是天然气的炉子有省能源一些，真的是很难选啊，大家给点建议吧
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a*e
8 楼
boa will report as "closed at customer's request"
they have closed 2 of my credit cards like that
just wait if you don't want to use it

呢？

【在 s***o 的大作中提到】
: BOA的烂CC不想再用了，如果等着被关，是不是会对信用记录有影响？相比于主动关呢？
: 谢谢
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d*h
9 楼


【在 d********h 的大作中提到】
: 野花牌脑残胶囊，还没做完，我要让布什或者 TED HADDARD 来做广告，还差一个另外
: 一个图呢
: 这个也没做完
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s*y
10 楼
我用的是embryonic fibroblast, 和3T3差不多。
一般都能做到20%。 再高就没有办法了。
基本上，你要确认两件事：
1。你提的DNA足够纯。如果不放心的话，可以用ethanol/NaAc 沉淀法
纯化一次
2。细胞的状态。 必须在60~80% confluence 之间。
如果都不行的话，还有一个不是办法的办法，
那就是把细胞trpsinized, wash, resuspend, 然后在细胞贴壁之前
把转染混合物加进去。因为细胞在spread and adhere 的时候会吸进很多
vesicle.相当于就是强行把DNA弄进去了。不过这个方法会弄死很多细胞。

谢。

【在 C*****h 的大作中提到】
: 用lipofectamine 2000转染3T3细胞，但是transfection效率太低（不到1％），
: 不知道是怎么回事？
: 0.8 ug plasmid DNA + 2 ul lipofectamine
: 转染1x10^5细胞。
: 不知道大家是怎么检测shRNA的knockdown的效果？
: 我是把带有shRNA的plasmid，转染到3T3细胞，然后用western blot检测蛋白质，
: 看目标蛋白是不是减少了。
: 可是现在转染效率不到1％，就算shRNA把那1％的细胞内的目标蛋白全部knockdown，
: 总个western blot还剩下99％的蛋白质。
: 有什么办法提高3T3细胞的转染率？有人转染过这个细胞系吗？请帮忙指教一下。谢谢。
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b*1
11 楼
我原来在国内就用的长帝，有一次不小心把擀面杖扔里面，预热烤箱，结果烧起来了，
老妈一急一盆水破上去，居然没事。。。强大啊
烤箱温度计有。主要就是做inspection的人说gas的烤箱温度不准，我朋友新买的房子
用的gas烤箱，说飘明火。我有点担心，怕会不会温度上下浮动，或是火总是很猛，受
热不均

常好

【在 l*****j 的大作中提到】
: 电的也可以
: 不管什么烤箱，买个温度计控制好温度就可以了
: 国内新出了一款长帝电烤箱，电脑控制，数字温度控制，功能很傻瓜很强大，据说非常好
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d*h
12 楼
新产品，试用期

【在 d********h 的大作中提到】
: 野花牌脑残胶囊，还没做完，我要让布什或者 TED HADDARD 来做广告，还差一个另外
: 一个图呢
: 这个也没做完
avatar
l*i
13 楼
用fugene转（英文名字忘了拼写了）。lipo毒性太大，

谢。

【在 C*****h 的大作中提到】
: 用lipofectamine 2000转染3T3细胞，但是transfection效率太低（不到1％），
: 不知道是怎么回事？
: 0.8 ug plasmid DNA + 2 ul lipofectamine
: 转染1x10^5细胞。
: 不知道大家是怎么检测shRNA的knockdown的效果？
: 我是把带有shRNA的plasmid，转染到3T3细胞，然后用western blot检测蛋白质，
: 看目标蛋白是不是减少了。
: 可是现在转染效率不到1％，就算shRNA把那1％的细胞内的目标蛋白全部knockdown，
: 总个western blot还剩下99％的蛋白质。
: 有什么办法提高3T3细胞的转染率？有人转染过这个细胞系吗？请帮忙指教一下。谢谢。
avatar
c*e
14 楼
天然气的烤箱可能有燃烧不完全，尤其是刚刚开始的时候，每次我用都要把排风扇打开
。天然气的range火力很差，比国内的差远了，除非买professional的。
我两种都用过，我更愿意用电的。
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d*h
15 楼


【在 d********h 的大作中提到】
: 野花牌脑残胶囊，还没做完，我要让布什或者 TED HADDARD 来做广告，还差一个另外
: 一个图呢
: 这个也没做完
avatar
T*r
16 楼
shRNA vector有puromycin selection? 用药晒一下...
不然就用lentiviral shRNA vector, 直接做成virus 转染....
avatar
l*j
17 楼
mm不用担心，不会上下浮动的
我一直用gas的烤箱，感觉比电烤箱更稳定
不过烤箱大，需要的预热时间长

【在 b*******1 的大作中提到】
: 我原来在国内就用的长帝，有一次不小心把擀面杖扔里面，预热烤箱，结果烧起来了，
: 老妈一急一盆水破上去，居然没事。。。强大啊
: 烤箱温度计有。主要就是做inspection的人说gas的烤箱温度不准，我朋友新买的房子
: 用的gas烤箱，说飘明火。我有点担心，怕会不会温度上下浮动，或是火总是很猛，受
: 热不均
:
: 常好
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J*3
18 楼
CUP了，尼玛在基版被封14天，苹果派报复我，贴了个LINK就一个警告，伤不起啊
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w*e
19 楼
sunnyday zhenshi shiyan baodian ...

【在 s******y 的大作中提到】
: 我用的是embryonic fibroblast, 和3T3差不多。
: 一般都能做到20%。 再高就没有办法了。
: 基本上，你要确认两件事：
: 1。你提的DNA足够纯。如果不放心的话，可以用ethanol/NaAc 沉淀法
: 纯化一次
: 2。细胞的状态。 必须在60~80% confluence 之间。
: 如果都不行的话，还有一个不是办法的办法，
: 那就是把细胞trpsinized, wash, resuspend, 然后在细胞贴壁之前
: 把转染混合物加进去。因为细胞在spread and adhere 的时候会吸进很多
: vesicle.相当于就是强行把DNA弄进去了。不过这个方法会弄死很多细胞。
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t*n
20 楼
还是电的好一些
没有烧出来的污染物

平时做西点比较多。
不知道应该选电炉还是气炉。如果要换电的oven+gas的range又成本太高，牵扯到要重
装修厨房。
我想选择的是双门的电炉，或是天然气炉子，或者是双门的天然气炉
像这种
http://www.rangecookerreviews.com/ge/ge-pb975smss-double-oven-range-cooker-review/
有人说天然气的烤箱温度不准，而且经常变化
但是天然气的炉子有省能源一些，真的是很难选啊，大家给点建议吧

【在 b*******1 的大作中提到】
: 平时做西点比较多。
: 不知道应该选电炉还是气炉。如果要换电的oven+gas的range又成本太高，牵扯到要重
: 装修厨房。
: 我想选择的是双门的电炉，或是天然气炉子，或者是双门的天然气炉
: 像这种
: http://www.rangecookerreviews.com/ge/ge-pb975smss-double-oven-range-cooker-review/
: 有人说天然气的烤箱温度不准，而且经常变化
: 但是天然气的炉子有省能源一些，真的是很难选啊，大家给点建议吧
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a*n
22 楼
shRNA还是做成virus比较有效，siRNA有专门的转染试剂效率很高

谢。

【在 C*****h 的大作中提到】
: 用lipofectamine 2000转染3T3细胞，但是transfection效率太低（不到1％），
: 不知道是怎么回事？
: 0.8 ug plasmid DNA + 2 ul lipofectamine
: 转染1x10^5细胞。
: 不知道大家是怎么检测shRNA的knockdown的效果？
: 我是把带有shRNA的plasmid，转染到3T3细胞，然后用western blot检测蛋白质，
: 看目标蛋白是不是减少了。
: 可是现在转染效率不到1％，就算shRNA把那1％的细胞内的目标蛋白全部knockdown，
: 总个western blot还剩下99％的蛋白质。
: 有什么办法提高3T3细胞的转染率？有人转染过这个细胞系吗？请帮忙指教一下。谢谢。
avatar
b*1
23 楼
我很想分开买的，但是那个价格，实在是高。真是我们的第一个房子。88年的，感觉投
那么多钱在上面很难抉择

【在 c*******e 的大作中提到】
: 天然气的烤箱可能有燃烧不完全，尤其是刚刚开始的时候，每次我用都要把排风扇打开
: 。天然气的range火力很差，比国内的差远了，除非买professional的。
: 我两种都用过，我更愿意用电的。
avatar
a*d
25 楼
I use lentivirus to make sure high efficiency of transfection.
avatar
J*3
26 楼


【在 d********h 的大作中提到】

avatar
s*y
27 楼
没有办法，千老作的太久了，什么试验都作过，什么技术都知道一点，
我现在都想我是不是该出一本试验手册拿去卖了。哈哈哈

【在 w******e 的大作中提到】
: sunnyday zhenshi shiyan baodian ...
avatar
s*r
28 楼
你应该开一个公司做试验。

没有办法，千老作的太久了，什么试验都作过，什么技术都知道一点，
我现在都想我是不是该出一本试验手册拿去卖了。哈哈哈

【在 s******y 的大作中提到】
: 没有办法，千老作的太久了，什么试验都作过，什么技术都知道一点，
: 我现在都想我是不是该出一本试验手册拿去卖了。哈哈哈
avatar
n*d
29 楼
欣赏你

【在 T****r 的大作中提到】
: shRNA vector有puromycin selection? 用药晒一下...
: 不然就用lentiviral shRNA vector, 直接做成virus 转染....
avatar
w*a
30 楼
试过electroporation么？
俺电转过siRNA到differentiated adipocytes，转完以后细胞挂了一些，但剩下的
knockdown effect可以到80%以上。

谢。

【在 C*****h 的大作中提到】
: 用lipofectamine 2000转染3T3细胞，但是transfection效率太低（不到1％），
: 不知道是怎么回事？
: 0.8 ug plasmid DNA + 2 ul lipofectamine
: 转染1x10^5细胞。
: 不知道大家是怎么检测shRNA的knockdown的效果？
: 我是把带有shRNA的plasmid，转染到3T3细胞，然后用western blot检测蛋白质，
: 看目标蛋白是不是减少了。
: 可是现在转染效率不到1％，就算shRNA把那1％的细胞内的目标蛋白全部knockdown，
: 总个western blot还剩下99％的蛋白质。
: 有什么办法提高3T3细胞的转染率？有人转染过这个细胞系吗？请帮忙指教一下。谢谢。
avatar
d*d
31 楼
In my hands and using TransIT-LT1 from Mirus, the tranfection efficiency of
3T3 cells can be as high as 65% for our GFP expressing reporter plasmid. The
transfection efficiency of 3T3 cells can be as high as 90% using Neon
electroporation system, although only ~20% cells survived the procedure. The
transfection efficiency is derived from flow cytometry data. It could be
lower if you just look at the cells under microscope.
avatar
p*i
32 楼
对，病毒最狠，
不过你貌似需要LICENSE和LEVEL II的HOOD？

【在 T****r 的大作中提到】
: shRNA vector有puromycin selection? 用药晒一下...
: 不然就用lentiviral shRNA vector, 直接做成virus 转染....
avatar
i*R
33 楼
我用过电转siRNA，效率可达90% 以上。
操作很简单，就是需要找到有设备的实验室。

谢。

【在 C*****h 的大作中提到】
: 用lipofectamine 2000转染3T3细胞，但是transfection效率太低（不到1％），
: 不知道是怎么回事？
: 0.8 ug plasmid DNA + 2 ul lipofectamine
: 转染1x10^5细胞。
: 不知道大家是怎么检测shRNA的knockdown的效果？
: 我是把带有shRNA的plasmid，转染到3T3细胞，然后用western blot检测蛋白质，
: 看目标蛋白是不是减少了。
: 可是现在转染效率不到1％，就算shRNA把那1％的细胞内的目标蛋白全部knockdown，
: 总个western blot还剩下99％的蛋白质。
: 有什么办法提高3T3细胞的转染率？有人转染过这个细胞系吗？请帮忙指教一下。谢谢。
avatar
T*r
34 楼
我呆过实验室，只要做细胞的，一般使用的hood都可以操作...

【在 p******i 的大作中提到】
: 对，病毒最狠，
: 不过你貌似需要LICENSE和LEVEL II的HOOD？
avatar
w*a
35 楼
提高lipo和质粒的ratio，多加点lipo，毒性可能大了些，但是效率会高点。
另外，试试电转，如果还不行就virus吧。
avatar
C*h
36 楼
请看附件上的照片（200x），不知道有多少细胞被转染了？
有没有20％？~100％ confluency
0.8 ug Plasmid DNA + 4 ul Lipofectamine 2000
转染10^5细胞。

谢。

【在 C*****h 的大作中提到】
: 用lipofectamine 2000转染3T3细胞，但是transfection效率太低（不到1％），
: 不知道是怎么回事？
: 0.8 ug plasmid DNA + 2 ul lipofectamine
: 转染1x10^5细胞。
: 不知道大家是怎么检测shRNA的knockdown的效果？
: 我是把带有shRNA的plasmid，转染到3T3细胞，然后用western blot检测蛋白质，
: 看目标蛋白是不是减少了。
: 可是现在转染效率不到1％，就算shRNA把那1％的细胞内的目标蛋白全部knockdown，
: 总个western blot还剩下99％的蛋白质。
: 有什么办法提高3T3细胞的转染率？有人转染过这个细胞系吗？请帮忙指教一下。谢谢。
avatar
s*y
37 楼
3T3用化学转染法作到这个程度已经差不多了。
提高的余地不多了。
如果你还想更高的话，只能用电转或者病毒了

【在 C*****h 的大作中提到】
: 请看附件上的照片（200x），不知道有多少细胞被转染了？
: 有没有20％？~100％ confluency
: 0.8 ug Plasmid DNA + 4 ul Lipofectamine 2000
: 转染10^5细胞。
:
: 谢。
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