试验了很多条件，还是拿不到结晶怎么办？ - 未名空间MITBBS历史存档

试验了很多条件，还是拿不到结晶怎么办？# Biology - 生物学

c*82010-05-04 07:05

1 楼

我记得每个季度工作缴税的话能够一年4季度得到4个积分，攒够40个积分（10年工作）
就可以有资格拿退休金了。我想问一下如果我在F1期间和J1期间没有填任何优惠免税的
报表，直接按照RESIDENT的标准缴税了，这个算不算积分呢？
我前年F1 OPT 缴税时会计师让我不要按照F1的免税要求退税，说这样拿绿卡比较快。
悲催的是我现在还没有绿卡。当时想如果能够攒点退休积分也划算的，所以也就没有办
啥F1 5年免税。我去年拿到J1，也没有办啥J1 2年免税。就是为了能多缴税，早点攒够
40分。
请问这种算不算退休积分呢？
如果不算，我的前两年的税白交了，现在找会计师还能拿回来吗？需要哪些资料呢？

r*a2010-05-04 07:05

2 楼

作为组里唯一的中国人，刚来的时候我就觉得除了招我来的二老板，其他人都挺冷淡。
但是我还是很努力地融入，主动和大家打招呼，有什么聊天聚餐和活动都积极参与，但
结果是大家表面客气，但从不主动和我说话。
我们组不是做技术的，我的硕士学历是最高的，平时让我做的只是简单的excel. 虽然
感觉工作level低，但第一份工作我也不想太挑剔。
组里有个老美同事A, 工作内容和我有重复和不同的地方，一开始就对我不友好。二老
板说他不在的时候，我的工作就请示A. 可是我第一次去找A, A就说" It's your work.
It's none of my business. " 还有一次，大老板让我做一个稍微复杂点的excel
work，大老板完全不懂技术，让我和A讨论。结果A说:"I don't think you can do it.
You can't do it!" 后来我还是做出来了，A让我解释给他听，我才发现他连最简单的
excel求和都不会！这期间我一直都没有fight back, 因为自己才刚来公司几个月，还
是OPT, H1B还不确定能不能给办，我就想先做好自己的工作，像A这样的小人还是不要
搞得太僵。其实除了A, 大老板和二老板对我的评价都很好。有一次A又打我小报告，结
果二老板却和我说, 他觉得我的工作很好，组里有些人因为unsecured, 就开始bite
each other，但是他不希望组里人之间闹什么矛盾。我明白他指的是A.
后来公司还是不能给我办H1B，我的OPT还剩半年，于是我就重新找工作。大家都知道这
件事，而且组里也开始重新面试人。最近我申请了公司内部一个职位，在另一个城市，
那边的HR给我打电话面试，结果A抢着接我的电话，还问那边打电话的人是谁！当时我
就坐在座位上，电话只响了一声。之前几乎没人给我办公室打电话，偶尔行政的人打给
我，也没有人好心地帮我接。我就郁闷了，终于把我排挤走，A应该高兴才是，结果我
重新找工作，他还要这样做，是不是欺人太甚了！

y*g2010-05-04 07:05

3 楼

最近仔细比较了下，发现不同屏差异很大

Q*32010-05-04 07:05

4 楼

我看黄磊也去参加了【个人十分喜欢黄磊所以就开始补综艺了】
不过《妈妈咪呀》里面的故事都是真的吗？一个个讲的时候我还真的有那么点小感动来
着...
不过也是有朋友说这都是心机婊有意识的给编的故事，哪里有那么多不幸，或者幸福的
类型给你做比对啊。全是套路...

l*r2010-05-04 07:05

5 楼

这个蛋白很重要，所以十分想拿到晶体结构，但是试了很多条件，都没有晶体长出来。
有什么解决办法吗？自己对这个是外行，结晶这部分工作是合作伙伴在做。

f*n2010-05-04 07:05

6 楼

nonresident以resident报税是欺骗。resident很多时候比nonresident交的税少，因为
有standard deduction，和很多其他deduction和credits是resident才有的，而且
resident才可以联合报税。
冒充resident很有可能会交少税，被发现要赔钱和罚款。

h*82010-05-04 07:05

7 楼

林子大了，什么鸟都有。
先忍忍，拿到新工作最重要。resume上该放手机号。

a*f2010-05-04 07:05

8 楼

我没精确调教过，把色温调整到舒服就行了。
其实颜色这个东西很神奇的，人眼更在意所看到颜色之间的相对关系，而非颜色的绝对
值，同一个颜色在不同的颜色旁边显现的观感完全不明显同。同一幅照片在不同显示器
（大致显示正常的显示器）上如果对比着看可能会觉得差别很大，但单独看得话你就不
觉得观感有啥不同，我想可能就是这个缘故。

a*a2010-05-04 07:05

9 楼

拜佛

【在 l******r 的大作中提到】

: 这个蛋白很重要，所以十分想拿到晶体结构，但是试了很多条件，都没有晶体长出来。
: 有什么解决办法吗？自己对这个是外行，结晶这部分工作是合作伙伴在做。

c*82010-05-04 07:05

10 楼

我一直觉得我多缴税了。因为前年学生身份我应该有很多退税，但是会计师没帮我做学
生的优惠，所以我退的很少。因为本来收入就很低。去年J1第一年，我的工资单大概被
扣了25%的钱，后来基本没啥退税。请问是否在一个州住满3年，不管啥身份，都属于
REDIDENT了呢？

i*i2010-05-04 07:05

11 楼

离A远点吧，有些人就是很黑暗的，说不定有什么种族歧视呢

N*Y2010-05-04 07:05

12 楼

不用数码的，也要调教显示器吧。除非你只暗房工作。

p*r2010-05-04 07:05

13 楼

找一公。

【在 l******r 的大作中提到】

: 这个蛋白很重要，所以十分想拿到晶体结构，但是试了很多条件，都没有晶体长出来。
: 有什么解决办法吗？自己对这个是外行，结晶这部分工作是合作伙伴在做。

f*n2010-05-04 07:05

14 楼

不是

【在 c******8 的大作中提到】

: 我一直觉得我多缴税了。因为前年学生身份我应该有很多退税，但是会计师没帮我做学
: 生的优惠，所以我退的很少。因为本来收入就很低。去年J1第一年，我的工资单大概被
: 扣了25%的钱，后来基本没啥退税。请问是否在一个州住满3年，不管啥身份，都属于
: REDIDENT了呢？

G*s2010-05-04 07:05

15 楼

他又不是你顶头上司，为啥要鸟他啊，以牙还牙，以眼还眼就是了

work.
it.

【在 r***a 的大作中提到】

: 作为组里唯一的中国人，刚来的时候我就觉得除了招我来的二老板，其他人都挺冷淡。
: 但是我还是很努力地融入，主动和大家打招呼，有什么聊天聚餐和活动都积极参与，但
: 结果是大家表面客气，但从不主动和我说话。
: 我们组不是做技术的，我的硕士学历是最高的，平时让我做的只是简单的excel. 虽然
: 感觉工作level低，但第一份工作我也不想太挑剔。
: 组里有个老美同事A, 工作内容和我有重复和不同的地方，一开始就对我不友好。二老
: 板说他不在的时候，我的工作就请示A. 可是我第一次去找A, A就说" It's your work.
: It's none of my business. " 还有一次，大老板让我做一个稍微复杂点的excel
: work，大老板完全不懂技术，让我和A讨论。结果A说:"I don't think you can do it.
: You can't do it!" 后来我还是做出来了，A让我解释给他听，我才发现他连最简单的

h*u2010-05-04 07:05

16 楼

就是同一台显示器对于同一张照片也会不一样。比如我在自己嗲脑上看很舒服了，上传
到flickr上，颜色居然差别很大。难道flickr又处理了么

【在 a*f 的大作中提到】

: 我没精确调教过，把色温调整到舒服就行了。
: 其实颜色这个东西很神奇的，人眼更在意所看到颜色之间的相对关系，而非颜色的绝对
: 值，同一个颜色在不同的颜色旁边显现的观感完全不明显同。同一幅照片在不同显示器
: （大致显示正常的显示器）上如果对比着看可能会觉得差别很大，但单独看得话你就不
: 觉得观感有啥不同，我想可能就是这个缘故。

a*k2010-05-04 07:05

17 楼

拜生物学家

【在 a***a 的大作中提到】

: 拜佛

v*m2010-05-04 07:05

18 楼

social security 和报税没有关系吧？

【在 c******8 的大作中提到】

: 我记得每个季度工作缴税的话能够一年4季度得到4个积分，攒够40个积分（10年工作）
: 就可以有资格拿退休金了。我想问一下如果我在F1期间和J1期间没有填任何优惠免税的
: 报表，直接按照RESIDENT的标准缴税了，这个算不算积分呢？
: 我前年F1 OPT 缴税时会计师让我不要按照F1的免税要求退税，说这样拿绿卡比较快。
: 悲催的是我现在还没有绿卡。当时想如果能够攒点退休积分也划算的，所以也就没有办
: 啥F1 5年免税。我去年拿到J1，也没有办啥J1 2年免税。就是为了能多缴税，早点攒够
: 40分。
: 请问这种算不算退休积分呢？
: 如果不算，我的前两年的税白交了，现在找会计师还能拿回来吗？需要哪些资料呢？

p*w2010-05-04 07:05

19 楼

你真是辛苦了啊

work.
it.

【在 r***a 的大作中提到】

: 作为组里唯一的中国人，刚来的时候我就觉得除了招我来的二老板，其他人都挺冷淡。
: 但是我还是很努力地融入，主动和大家打招呼，有什么聊天聚餐和活动都积极参与，但
: 结果是大家表面客气，但从不主动和我说话。
: 我们组不是做技术的，我的硕士学历是最高的，平时让我做的只是简单的excel. 虽然
: 感觉工作level低，但第一份工作我也不想太挑剔。
: 组里有个老美同事A, 工作内容和我有重复和不同的地方，一开始就对我不友好。二老
: 板说他不在的时候，我的工作就请示A. 可是我第一次去找A, A就说" It's your work.
: It's none of my business. " 还有一次，大老板让我做一个稍微复杂点的excel
: work，大老板完全不懂技术，让我和A讨论。结果A说:"I don't think you can do it.
: You can't do it!" 后来我还是做出来了，A让我解释给他听，我才发现他连最简单的

a*f2010-05-04 07:05

20 楼

那可能是color space 不同，网上都是sRGB，你的软件可能不是用的这个color space

【在 h*********u 的大作中提到】

:
: 就是同一台显示器对于同一张照片也会不一样。比如我在自己嗲脑上看很舒服了，上传
: 到flickr上，颜色居然差别很大。难道flickr又处理了么

e*s2010-05-04 07:05

21 楼

把蛋白切掉点再试试

【在 l******r 的大作中提到】

: 这个蛋白很重要，所以十分想拿到晶体结构，但是试了很多条件，都没有晶体长出来。
: 有什么解决办法吗？自己对这个是外行，结晶这部分工作是合作伙伴在做。

c*22010-05-04 07:05

22 楼

每个季度工作缴税的话能够一年4季度得到4个积分，攒够40个积分（10年工作）
就可以有资格拿退休金了
So did you pay FICA? what is said is only applicable if you paid FICA (
about 7%+ additional withholding in addition to your income tax)

j*d2010-05-04 07:05

23 楼

看了你的帖子，我很有感触，首先祝福你以后找工一切顺利！加油！
作为外国人尤其是中国人在这边工作确实会遇到很多这样那样的困难和障碍，包括身份
，语言文化等等
在这里我想提醒大家关于身份问题，一定要提早打算，尽力争取。这是我的亲身感受：
我去年夏天拿到现在的工作,面试中没有涉及到H1B,我当然也没有问。但是自己有私下
上网查历史记录和打电话给HR问，得知给办，于是就心里放松了。直到年底开始催HR,
由于我们单位招的外国人很少，HR经验不足，都是雇佣移民律师给办，老板们更是一无
所知。加之我们那里非常官僚，程序复杂漫长，尤其是牵涉到法律的事，更要由最大老
板决定。由于去年经济不好，正值做下一年的预算，这位大老板一拍扳决定砍掉移民律
师费。于是HR大头找我谈话说出一堆理由，其中大多都是错误的信息，因为他们根本不
懂整个程序，反正结论就是不给办。当时我也是有点懵，心里沉到了底。但是很快的我
控制住自己的情绪，打电话给移民律师，咨询了所有的程序和信息，证明了HR提供给大
老板的信息都是错误的。然后我给大老板和我自己部门的大小老板包括HR的大头写信逐
条列出了他们的错误认识，分析了移民律师费+我的工资相比辞掉我他们要雇佣新人+培
训+时间等等成本，对于他们并非划算，然后又提出我当时接受offer之前曾经打电话确
认过给办H1B以及我从12月就联系HR关于具体事宜，也一直给与肯定的答复。最后顺便
表达了一下我多么热爱这份工作，工作非常认真，大家对我的出色评价等等。总之最后
是大老板重新考虑了，决定给我办，但是据说其他很多的人都没有改变，我只是一个例
外。从今年开始，这项预算被整个削减，所有我以后的延期也没有保障，不过好在暂时
安稳了。
抱歉罗嗦了这么多，简而言之，身份问题是我们大多外国人的障碍，但是大家不要因为
这样就觉得低人一等，听天由命。凡事要尽早打算，遇事才能不慌，有理有据的去争取
，从他们的立场逐个击破，只要做到摆事实讲道理并不失职业风度，即使最后还是不行
，也不会后悔。
最后关于同事关系，请允许我再唠叨几句。虽然我们是外国人，心里再别扭，再讨厌，
表面上也还是要适应美国的文化。比如见面打招呼，跟大家保持良好的关系，聊聊家常
以拉近距离等等，不温不火即可。对于个别的人，先观察他是不是只是针对你，如果是
必要的时候巧妙的让你老板知道即可，相信同事都不是傻子，大家即使不帮你，也会对
这人有所防范。如果他对谁都这样，那就更不必浪费时间了，恨他的人多得很。即使你
由于种种原因不能很快融入他们，也没关系，我们每天上班不就是为了自己的职业理想
，经济收入吗？保持愉快的心情，不要让别人抓你的不是就可以了。别为了这些太影响
你的情绪，只要你工作出色，做人善良，你的老板和其他同事早晚会认同你的。
总之，做事如做人，我觉得不能求事事如意，但求无愧我心。与其跟小人勾心斗角，不
如与同路人共同分享你的事业。当然如果你的老板本身就是小人，那就夹起尾巴做人，
同时骑驴找马。
个人观点，仅供参考，如果你是对西方文化游刃有余，有能力骑上老板的头往上爬，请
忽略此文。

work.
it.

【在 r***a 的大作中提到】

: 作为组里唯一的中国人，刚来的时候我就觉得除了招我来的二老板，其他人都挺冷淡。
: 但是我还是很努力地融入，主动和大家打招呼，有什么聊天聚餐和活动都积极参与，但
: 结果是大家表面客气，但从不主动和我说话。
: 我们组不是做技术的，我的硕士学历是最高的，平时让我做的只是简单的excel. 虽然
: 感觉工作level低，但第一份工作我也不想太挑剔。
: 组里有个老美同事A, 工作内容和我有重复和不同的地方，一开始就对我不友好。二老
: 板说他不在的时候，我的工作就请示A. 可是我第一次去找A, A就说" It's your work.
: It's none of my business. " 还有一次，大老板让我做一个稍微复杂点的excel
: work，大老板完全不懂技术，让我和A讨论。结果A说:"I don't think you can do it.
: You can't do it!" 后来我还是做出来了，A让我解释给他听，我才发现他连最简单的

M*X2010-05-04 07:05

24 楼

i1D pro

【在 y**********g 的大作中提到】

: 最近仔细比较了下，发现不同屏差异很大

a*a2010-05-04 07:05

25 楼

那你给我说不结晶除了拜佛还有啥办法。lol

【在 a********k 的大作中提到】

: 拜生物学家

i*g2010-05-04 07:05

26 楼

楼上说的挺好的。
LZ 刚开始工作，能忍就忍下，毕竟工作经验是要慢慢积攒下来的，工作难免碰到小人
的，千万不能和他们治气，其实大家心里都明白谁是jerk，大部分人心理根本瞧不起他
们，但是面子上是不会显现出来的。下班后就尽量不要去想工作中的事。生活就是这样
的，哪有一帆风顺呢

y*g2010-05-04 07:05

27 楼

expensive

【在 M**X 的大作中提到】

:
: i1D pro

e*s2010-05-04 07:05

28 楼

把蛋白切掉点再试试

【在 l******r 的大作中提到】

: 这个蛋白很重要，所以十分想拿到晶体结构，但是试了很多条件，都没有晶体长出来。
: 有什么解决办法吗？自己对这个是外行，结晶这部分工作是合作伙伴在做。

w*c2010-05-04 07:05

29 楼

说的不错！

【在 i*g 的大作中提到】

: 楼上说的挺好的。
: LZ 刚开始工作，能忍就忍下，毕竟工作经验是要慢慢积攒下来的，工作难免碰到小人
: 的，千万不能和他们治气，其实大家心里都明白谁是jerk，大部分人心理根本瞧不起他
: 们，但是面子上是不会显现出来的。下班后就尽量不要去想工作中的事。生活就是这样
: 的，哪有一帆风顺呢

l*s2010-05-04 07:05

30 楼

你如果不打印出来,调不调无所谓.如果要打印,就得要调了.

a*a2010-05-04 07:05

31 楼

哥试过100多个constructs，都不work

【在 e****s 的大作中提到】

: 把蛋白切掉点再试试

r*a2010-05-04 07:05

32 楼

回复得太详细了，十分感动！
其实当时拿到这个offer的时候就知道H1B模棱两可，只是opt已经开始一个月了，也没
有其它offer就从了。。。
和同事尤其是小人相处，我确实还差得远，心情容易受影响。我觉得这个jerk对其他同
事也不怎么尊重，但不像对我那么针对。和客户打电话，前一秒还热情礼貌，挂了电话
就骂人家bitch,assole,只因为对方炫耀了一下自己是phd。。。真希望我走之后，组里
能招一个压得住他的人好好收拾他！

【在 j***d 的大作中提到】

: 看了你的帖子，我很有感触，首先祝福你以后找工一切顺利！加油！
: 作为外国人尤其是中国人在这边工作确实会遇到很多这样那样的困难和障碍，包括身份
: ，语言文化等等
: 在这里我想提醒大家关于身份问题，一定要提早打算，尽力争取。这是我的亲身感受：
: 我去年夏天拿到现在的工作,面试中没有涉及到H1B,我当然也没有问。但是自己有私下
: 上网查历史记录和打电话给HR问，得知给办，于是就心里放松了。直到年底开始催HR,
: 由于我们单位招的外国人很少，HR经验不足，都是雇佣移民律师给办，老板们更是一无
: 所知。加之我们那里非常官僚，程序复杂漫长，尤其是牵涉到法律的事，更要由最大老
: 板决定。由于去年经济不好，正值做下一年的预算，这位大老板一拍扳决定砍掉移民律
: 师费。于是HR大头找我谈话说出一堆理由，其中大多都是错误的信息，因为他们根本不

M*X2010-05-04 07:05

33 楼

$250-50 rebate = 200
http://www.amazon.com/Xrite-EODIS3-i1Display-Pro/dp/B0055MBQOW
$134.00
http://www.amazon.com/Xrite-CMUNDIS-ColorMunki-Display1/dp/B005

【在 y**********g 的大作中提到】

:
: expensive

T*t2010-05-04 07:05

34 楼

一直听说结晶是门art，而不是science。。。

v*n2010-05-04 07:05

35 楼

You are the best! 又言之有物又振奋人心！写得太好了！

【在 j***d 的大作中提到】

: 看了你的帖子，我很有感触，首先祝福你以后找工一切顺利！加油！
: 作为外国人尤其是中国人在这边工作确实会遇到很多这样那样的困难和障碍，包括身份
: ，语言文化等等
: 在这里我想提醒大家关于身份问题，一定要提早打算，尽力争取。这是我的亲身感受：
: 我去年夏天拿到现在的工作,面试中没有涉及到H1B,我当然也没有问。但是自己有私下
: 上网查历史记录和打电话给HR问，得知给办，于是就心里放松了。直到年底开始催HR,
: 由于我们单位招的外国人很少，HR经验不足，都是雇佣移民律师给办，老板们更是一无
: 所知。加之我们那里非常官僚，程序复杂漫长，尤其是牵涉到法律的事，更要由最大老
: 板决定。由于去年经济不好，正值做下一年的预算，这位大老板一拍扳决定砍掉移民律
: 师费。于是HR大头找我谈话说出一堆理由，其中大多都是错误的信息，因为他们根本不

y*g2010-05-04 07:05

36 楼

这两个买哪个呢？

【在 M**X 的大作中提到】

:
: $250-50 rebate = 200
: http://www.amazon.com/Xrite-EODIS3-i1Display-Pro/dp/B0055MBQOW
: $134.00
: http://www.amazon.com/Xrite-CMUNDIS-ColorMunki-Display1/dp/B005

O*e2010-05-04 07:05

37 楼

介个主意好

【在 p*******r 的大作中提到】

: 找一公。

O*e2010-05-04 07:05

38 楼

１００多个？？
累都要累死了。

【在 a***a 的大作中提到】

: 哥试过100多个constructs，都不work

a*k2010-05-04 07:05

39 楼

有些蛋白根本无法work啦，找一公，gouaux这种人也没办法

【在 a***a 的大作中提到】

: 哥试过100多个constructs，都不work

T*t2010-05-04 07:05

40 楼

不能做NMR结构么？
弱弱的问一下，x-ray解结构比NMR解结构优越之处在哪里？我总觉得结晶的蛋白结构和
生理条件下的蛋白结构应该是不一样的，倒是测NMR因为是在溶液里，可能更接近生理
条件一些吧。
当然我对于解结构基本属于门外汉，所以万一说错了不要笑话我。

【在 a********k 的大作中提到】

: 有些蛋白根本无法work啦，找一公，gouaux这种人也没办法

a*a2010-05-04 07:05

41 楼

NMR大于20kd的玩不转

【在 T**********t 的大作中提到】

: 不能做NMR结构么？
: 弱弱的问一下，x-ray解结构比NMR解结构优越之处在哪里？我总觉得结晶的蛋白结构和
: 生理条件下的蛋白结构应该是不一样的，倒是测NMR因为是在溶液里，可能更接近生理
: 条件一些吧。
: 当然我对于解结构基本属于门外汉，所以万一说错了不要笑话我。

a*a2010-05-04 07:05

42 楼

不是art，是gambling

【在 T**********t 的大作中提到】

: 一直听说结晶是门art，而不是science。。。

O*e2010-05-04 07:05

43 楼

其它领域，gambling的东西也不少啊。

【在 a***a 的大作中提到】

: 不是art，是gambling

a*a2010-05-04 07:05

44 楼

100个candidate，最后能拿到结构的一半3~5个
而且没什么特别快的筛的方法，所以谁拿到，能不能拿到，花多久拿到，都是命

【在 O******e 的大作中提到】

: 其它领域，gambling的东西也不少啊。

s*r2010-05-04 07:05

45 楼

一公的人品这么好，连手底下的小弟全都沾光了。

100个candidate，最后能拿到结构的一半3~5个
而且没什么特别快的筛的方法，所以谁拿到，能不能拿到，花多久拿到，都是命

【在 a***a 的大作中提到】

: 100个candidate，最后能拿到结构的一半3~5个
: 而且没什么特别快的筛的方法，所以谁拿到，能不能拿到，花多久拿到，都是命

s*y2010-05-04 07:05

46 楼

Support this

【在 a***a 的大作中提到】

: 拜佛

a*k2010-05-04 07:05

47 楼

人是下了苦功的，天道酬勤。

【在 s******r 的大作中提到】

: 一公的人品这么好，连手底下的小弟全都沾光了。
:
: 100个candidate，最后能拿到结构的一半3~5个
: 而且没什么特别快的筛的方法，所以谁拿到，能不能拿到，花多久拿到，都是命

p*m2010-05-04 07:05

48 楼

积极的办法，多换几个物种
消极的办法，想想没结晶能不能发个小functional的paper

【在 l******r 的大作中提到】

: 这个蛋白很重要，所以十分想拿到晶体结构，但是试了很多条件，都没有晶体长出来。
: 有什么解决办法吗？自己对这个是外行，结晶这部分工作是合作伙伴在做。

a*a2010-05-04 07:05

49 楼

换物种是王道

【在 p*****m 的大作中提到】

: 积极的办法，多换几个物种
: 消极的办法，想想没结晶能不能发个小functional的paper

a*a2010-05-04 07:05

50 楼

一公手下敢情人人都有结构？

【在 s******r 的大作中提到】

: 一公的人品这么好，连手底下的小弟全都沾光了。
:
: 100个candidate，最后能拿到结构的一半3~5个
: 而且没什么特别快的筛的方法，所以谁拿到，能不能拿到，花多久拿到，都是命

l*k2010-05-04 07:05

51 楼

说个小道消息
syg曾经夸下海口，说天底下没有不能提纯/结晶的蛋白...
不过也有一位生化大牛也说过类似的话，据说当时的围观群众们很受伤

w*82010-05-04 07:05

52 楼

如果是什么enzyme的话，有时候加点substrate也是有用的。我们这边有个人做一个管
DNA damage的酶，一开始怎么做都做不出来，后来加了点DNA就出来了。

l*u2010-05-04 07:05

53 楼

找11公去。

【在 l******r 的大作中提到】

: 这个蛋白很重要，所以十分想拿到晶体结构，但是试了很多条件，都没有晶体长出来。
: 有什么解决办法吗？自己对这个是外行，结晶这部分工作是合作伙伴在做。

w*n2010-05-04 07:05

54 楼

这个那这帮人去试试GPCR。。。。多少年了多少postdoc死在上面
好不容易才解出一个。。。。。

【在 l*******k 的大作中提到】

: 说个小道消息
: syg曾经夸下海口，说天底下没有不能提纯/结晶的蛋白...
: 不过也有一位生化大牛也说过类似的话，据说当时的围观群众们很受伤

T*t2010-05-04 07:05

55 楼

哦，是这样啊。为什么玩不转呢？技术不够发达？计算能力达不到？

【在 a***a 的大作中提到】

: NMR大于20kd的玩不转

a*k2010-05-04 07:05

56 楼

一公对了啊，GPCR还是解出来了，也不止一个。他又没说没有他解不出来的，也没说花
多少精力解出来。。。

【在 w******n 的大作中提到】

: 这个那这帮人去试试GPCR。。。。多少年了多少postdoc死在上面
: 好不容易才解出一个。。。。。

s*y2010-05-04 07:05

57 楼

The main issue is the power of the NMR machine: a low power NMR cannot resolve the difference between bonds. Therefore the raw data will not be able to back-
track assigned to different molecular force.
A bigger molecule of course also require much large scale of computation, but this is less an issue nowaday.

【在 T**********t 的大作中提到】

: 哦，是这样啊。为什么玩不转呢？技术不够发达？计算能力达不到？

O*e2010-05-04 07:05

58 楼

在这个筛的问题上，会不会有啥技术突破能加快这个过程？

【在 a***a 的大作中提到】

: 100个candidate，最后能拿到结构的一半3~5个
: 而且没什么特别快的筛的方法，所以谁拿到，能不能拿到，花多久拿到，都是命

O*e2010-05-04 07:05

59 楼

理论上来说，当然所有蛋白都是可以结晶的。

【在 l*******k 的大作中提到】

: 说个小道消息
: syg曾经夸下海口，说天底下没有不能提纯/结晶的蛋白...
: 不过也有一位生化大牛也说过类似的话，据说当时的围观群众们很受伤

a*a2010-05-04 07:05

60 楼

更nb的是去年还是前年cell的某结构，90年就有晶体了
十几年后才发了文章。lol

【在 w******n 的大作中提到】

: 这个那这帮人去试试GPCR。。。。多少年了多少postdoc死在上面
: 好不容易才解出一个。。。。。

a*a2010-05-04 07:05

61 楼

结构预测
可以快速筛掉那些有不稳定，flexible region的
HT，合成，机器人克隆，HT small scale 表达
可以快速筛掉不表达，或者表达不折叠的

【在 O******e 的大作中提到】

: 在这个筛的问题上，会不会有啥技术突破能加快这个过程？

l*k2010-05-04 07:05

62 楼

传说中的尸山血海？
发信人: anoia (high estrogen man), 信区: Biology
标题: Re: 试验了很多条件，还是拿不到结晶怎么办？
发信站: BBS 未名空间站 (Tue May 4 18:08:36 2010, 美东)
更nb的是去年还是前年cell的某结构，90年就有晶体了
十几年后才发了文章。lol

a*a2010-05-04 07:05

63 楼

en，肯定无数postdoc被该老板忽悠，你看，现在都有晶体了，你过来，很快就能做出来
保守估计至少中间死了5批人

【在 l*******k 的大作中提到】

: 传说中的尸山血海？
: 发信人: anoia (high estrogen man), 信区: Biology
: 标题: Re: 试验了很多条件，还是拿不到结晶怎么办？
: 发信站: BBS 未名空间站 (Tue May 4 18:08:36 2010, 美东)
: 更nb的是去年还是前年cell的某结构，90年就有晶体了
: 十几年后才发了文章。lol

n*d2010-05-04 07:05

64 楼

换人试试
可惜楼主不是老板

【在 l******r 的大作中提到】

: 这个蛋白很重要，所以十分想拿到晶体结构，但是试了很多条件，都没有晶体长出来。
: 有什么解决办法吗？自己对这个是外行，结晶这部分工作是合作伙伴在做。

k*u2010-05-04 07:05

65 楼

看你结晶什么蛋白了。
如果像你所说的，自己是外行，还是相信你的合作者吧，实在不行，就多找几个
合作者，如果你能大量提供纯度够的蛋白样品。
普遍来说，做结晶成功的第一步，纯化后的蛋白量要上去。。。
如果真的想要自己搞，先去amazon上买几本书看看，再看自己有没有这个决心。

【在 l******r 的大作中提到】

: 这个蛋白很重要，所以十分想拿到晶体结构，但是试了很多条件，都没有晶体长出来。
: 有什么解决办法吗？自己对这个是外行，结晶这部分工作是合作伙伴在做。

p*i2010-05-04 07:05

66 楼

唉

出来

【在 a***a 的大作中提到】

: en，肯定无数postdoc被该老板忽悠，你看，现在都有晶体了，你过来，很快就能做出来
: 保守估计至少中间死了5批人

b*r2010-05-04 07:05

67 楼

数据需要稍微更新一点了.
如果有人CARE的话.

【在 a***a 的大作中提到】

: NMR大于20kd的玩不转

g*p2010-05-04 07:05

68 楼

这个问题你可以跟合作方多讨论一下
如果他们有什么需要你可以根据你自己实验的紧张程度尽量满足
现在的题目如果不是新基因发现
容易做结晶的重要蛋白已经不多了
做不出来才正常
不要对做结构的人报期望值太高
对于这种只能证实，不能证伪的东西
你可以去试，但是不要认为试了就可能有结果
如果是拼了命想做出来
那就试试不同的construct
如果你一个月试20个，估计一年之内拿到晶体的机会还是很大的
不过你合作方得被你逼死了
因为正常情况下，这相当于一个非常勤奋的学生8年的活吧

【在 l******r 的大作中提到】

: 这个蛋白很重要，所以十分想拿到晶体结构，但是试了很多条件，都没有晶体长出来。
: 有什么解决办法吗？自己对这个是外行，结晶这部分工作是合作伙伴在做。

a*a2010-05-04 07:05

69 楼

勤奋学生3年的活儿
而且这学生还脑残，还信忽悠

【在 g*****p 的大作中提到】

: 这个问题你可以跟合作方多讨论一下
: 如果他们有什么需要你可以根据你自己实验的紧张程度尽量满足
: 现在的题目如果不是新基因发现
: 容易做结晶的重要蛋白已经不多了
: 做不出来才正常
: 不要对做结构的人报期望值太高
: 对于这种只能证实，不能证伪的东西
: 你可以去试，但是不要认为试了就可能有结果
: 如果是拼了命想做出来
: 那就试试不同的construct

g*p2010-05-04 07:05

70 楼

这话说得非常不科学
因为这个论点既不能被证实，也不能被证伪
不过这也许是以讹传讹吧
没听说一公说过这话
况且他的技术策略是以最快的速度做相对比较容易的重要蛋白发cns
而不是挑战有技术难度的题目
说这个话跟他的技术理念是背道而驰的
倒是听人传过晓东说蛋白都能被提纯之类的话，只是不是亲耳所闻，不知真假了

【在 l*******k 的大作中提到】

: 说个小道消息
: syg曾经夸下海口，说天底下没有不能提纯/结晶的蛋白...
: 不过也有一位生化大牛也说过类似的话，据说当时的围观群众们很受伤