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用硫酸铵沉淀的蛋白怎么溶解?
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用硫酸铵沉淀的蛋白怎么溶解?# Biology - 生物学
w*n
1
跟风。。。。颜色没调好
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m*e
2
金星这个人既不幽默,也没涵养,长得又恶心,尤其说话的声音,眉飞色舞的,对别人指指点点,而且还抨击的都是些比较善良的明星,这是个什么鬼啊?为什么电视台要让这样的鬼上电视呢?太恶心了。而且网上好像还有很多金星的水军,这个人凭什么当主持人啊?就因为她敢乱喷吗?她根本不具备一个主持人的基本素质啊,普通话带着东北味儿,声音很脏,主要的是这个人的心理很变态,心胸狭窄,赶紧让她滚蛋吧。
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O*n
3
向小雨是何洁演的。
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m*m
4
用饱和硫酸铵沉淀了蛋白,完全去除上清液后,PELLET用BUFFER溶解,先用PIPET轻轻
把PELLET打碎成小碎片,然后在37C超声水槽里超声,最后还是有微小的蛋白碎片怎么
都不溶解,测了OD280=2左右,也不算很浓啊,这个浓度的时候这个蛋白一般都是溶解
的,测了PH也没有问题。请问该如何让蛋白完全溶解阿?
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s*n
5
大师回国了?
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l*n
6
确实挺那什么的,男子气概
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m*n
7
我一眼看见就发现了,演技真差。。
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s*y
8
Dialyze against your buffer overnight

【在 m****m 的大作中提到】
: 用饱和硫酸铵沉淀了蛋白,完全去除上清液后,PELLET用BUFFER溶解,先用PIPET轻轻
: 把PELLET打碎成小碎片,然后在37C超声水槽里超声,最后还是有微小的蛋白碎片怎么
: 都不溶解,测了OD280=2左右,也不算很浓啊,这个浓度的时候这个蛋白一般都是溶解
: 的,测了PH也没有问题。请问该如何让蛋白完全溶解阿?

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O*n
9
我怎么就没看出来呢。。。不怎么像了!

【在 m*********n 的大作中提到】
: 我一眼看见就发现了,演技真差。。
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D*9
10
yes, you have to remove salt first, I used to dialyze my protein at 4
degree overnight
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p*6
11
画的妆不一样吧,电视里淡妆,看不大出来是何洁了

【在 O********n 的大作中提到】
: 我怎么就没看出来呢。。。不怎么像了!
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m*m
12
The reason why I didn't dialysis is that my protein is a hydrophobic
membrane protein which is desolved in an expensive detergent. If I dialysis,
the detergent will also go away and my protein will precipitate anyway.
I wonder if there's any other way to concentrate protein except using this
method and centrifuge through a membrane to get rid of the water? The later
is not so efficient, because I see some protein also pass the membrane which
causes loss.
Can we use vaccum dry under low temperatu
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a*u
13
整容整成了几把蛋

【在 O********n 的大作中提到】
: 向小雨是何洁演的。
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m*m
14
dd,,,,,,,,
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s*y
15
这几种方法你都可以试一下。没有哪一个是肯定保险的。
至于说用concentrator会损失蛋白?这个可能是因为你没有选对大小合适
的滤膜。一般来说,滤膜的孔的标定尺寸应该比你的蛋白的真正尺寸小
三倍。比方说30K 的蛋白必须用小于10K MWCO的膜,否则蛋白有可能漏过去。
另外,在dialysis 的时候,你可以在外面的溶液里也放上detergent 啊,
我不明白这个为什么会是问题。而且,一般来说,detergent 在溶液里
会形成微团,所以不会容易的透过滤膜

dialysis,
later
which

【在 m****m 的大作中提到】
: The reason why I didn't dialysis is that my protein is a hydrophobic
: membrane protein which is desolved in an expensive detergent. If I dialysis,
: the detergent will also go away and my protein will precipitate anyway.
: I wonder if there's any other way to concentrate protein except using this
: method and centrifuge through a membrane to get rid of the water? The later
: is not so efficient, because I see some protein also pass the membrane which
: causes loss.
: Can we use vaccum dry under low temperatu

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a*o
16
如果已经是纯化的蛋白,就不用硫酸铵了吧,这个主要是分离用的
可以用乙醇或TCA, 不知道会不会好溶,没经验
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a*o
17
看来你是赵本山

【在 s******y 的大作中提到】
: 这几种方法你都可以试一下。没有哪一个是肯定保险的。
: 至于说用concentrator会损失蛋白?这个可能是因为你没有选对大小合适
: 的滤膜。一般来说,滤膜的孔的标定尺寸应该比你的蛋白的真正尺寸小
: 三倍。比方说30K 的蛋白必须用小于10K MWCO的膜,否则蛋白有可能漏过去。
: 另外,在dialysis 的时候,你可以在外面的溶液里也放上detergent 啊,
: 我不明白这个为什么会是问题。而且,一般来说,detergent 在溶液里
: 会形成微团,所以不会容易的透过滤膜
:
: dialysis,
: later

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s*y
18
小师弟呵,那个三倍的说法是蛋白生化界人常用的。
因为公司们标定那个MWCO 一般是用直链高分子聚合物来测的。
换算成球型分子就必须比这个大三倍,才能保证球形分子的直径是孔径的
1。5倍左右

【在 a****o 的大作中提到】
: 看来你是赵本山
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a*a
19
漏也漏不了多少,我用30k的concentrator试着想分离10k的蛋白(可以想让他
漏过去)
结果发现也就20%能过去。。。

【在 s******y 的大作中提到】
: 小师弟呵,那个三倍的说法是蛋白生化界人常用的。
: 因为公司们标定那个MWCO 一般是用直链高分子聚合物来测的。
: 换算成球型分子就必须比这个大三倍,才能保证球形分子的直径是孔径的
: 1。5倍左右

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s*y
20
这个就是这样的,你要想漏过去的反而漏不过去。
不想要漏过去的反而会哗哗的漏掉。
而且,这种concentrator 设计的时候不是为了分离蛋白用的,
像你这种用法,会让很多蛋白会卡在孔里或者粘在膜上,不可能全部漏过去的,
能弄到20%已经不错了,但是如果你测一下上方溶液里的蛋白含量,应该会小于80%

【在 a***a 的大作中提到】
: 漏也漏不了多少,我用30k的concentrator试着想分离10k的蛋白(可以想让他
: 漏过去)
: 结果发现也就20%能过去。。。

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a*a
21
这个本底损失我当然知道

【在 s******y 的大作中提到】
: 这个就是这样的,你要想漏过去的反而漏不过去。
: 不想要漏过去的反而会哗哗的漏掉。
: 而且,这种concentrator 设计的时候不是为了分离蛋白用的,
: 像你这种用法,会让很多蛋白会卡在孔里或者粘在膜上,不可能全部漏过去的,
: 能弄到20%已经不错了,但是如果你测一下上方溶液里的蛋白含量,应该会小于80%

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m*m
22
难道就没有一个既好用又省事的浓缩蛋白的方法吗?可以真空抽吗,弄掉些水分就好阿
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a*a
23
很多做nmr的蛋白的确可以这么折腾。很爽

【在 m****m 的大作中提到】
: 难道就没有一个既好用又省事的浓缩蛋白的方法吗?可以真空抽吗,弄掉些水分就好阿
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s*y
24
当然可以,真空抽,保持比较低的温度(10度左右就好)
但是,抽完之后溶液里的盐度会很高的,得dialyze 一次。
或者,你一开始就用比较低盐的溶液的溶解蛋白,然后再抽真空。

【在 m****m 的大作中提到】
: 难道就没有一个既好用又省事的浓缩蛋白的方法吗?可以真空抽吗,弄掉些水分就好阿
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m*m
25
我想把磷脂蛋白抽干些可以放多点样品到ROTOR里,老板还不同意呢,说水分的多少可
能会影响结构功能。。。

【在 a***a 的大作中提到】
: 很多做nmr的蛋白的确可以这么折腾。很爽
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a*g
26
我印象中Pierce测定他们的concentrator的MWCO是用的BSA,lysozyme,ubiquitin和
cytochrome C。

【在 s******y 的大作中提到】
: 小师弟呵,那个三倍的说法是蛋白生化界人常用的。
: 因为公司们标定那个MWCO 一般是用直链高分子聚合物来测的。
: 换算成球型分子就必须比这个大三倍,才能保证球形分子的直径是孔径的
: 1。5倍左右

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s*y
27
不同的公司做法不一样。这个得看他们的产品说明。

【在 a******g 的大作中提到】
: 我印象中Pierce测定他们的concentrator的MWCO是用的BSA,lysozyme,ubiquitin和
: cytochrome C。

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e*s
28
你说的就是冷冻干燥啊,冷冻干燥也有保持蛋白活性和保持活性的问题。而且往往要加
入大量的保护剂,BSA之类的。
研究上还是超滤好。而且Sunnyday说的膜孔3倍分子量以下是很对的。

【在 m****m 的大作中提到】
: 难道就没有一个既好用又省事的浓缩蛋白的方法吗?可以真空抽吗,弄掉些水分就好阿
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l*n
29
37C超声? 蛋白是不是变性了?

【在 m****m 的大作中提到】
: 用饱和硫酸铵沉淀了蛋白,完全去除上清液后,PELLET用BUFFER溶解,先用PIPET轻轻
: 把PELLET打碎成小碎片,然后在37C超声水槽里超声,最后还是有微小的蛋白碎片怎么
: 都不溶解,测了OD280=2左右,也不算很浓啊,这个浓度的时候这个蛋白一般都是溶解
: 的,测了PH也没有问题。请问该如何让蛋白完全溶解阿?

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