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请问高GC含量的primer怎么做PCR?
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请问高GC含量的primer怎么做PCR?# Biology - 生物学
d*s
1
how is this family hotel? thanks.
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z*a
2
when others come out of the body, it does not count. It does not look like
the person.
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P*u
3
今天,我们再来学习一下佛陀的科普课,这就是《大宝积经卷第五十五。佛为阿难说处
胎会》。
在这一部经中,佛陀详细开示了,从医学的物理性角度,作为人道的一个生命体从胚胎
生成到出生的全过程。其中对细节描述的准确性,令当今凭借各种仪器才能了解人体内
部情况的医学界惊叹不已。这里节选的是佛陀对胎儿在母体中的生长发育过程的描述,
评论摘录自网上的文章。
《经》“第一七日处母胎时,名歌罗逻,身相初现犹如生酪,七日之中,内热煎煮四大
渐成。”
怀孕后的第一个七天,也就是第1周胎儿还是歌罗逻,歌罗逻就是受精卵。佛说这时候
的歌罗逻就像“生酪”,“生酪”是什么呢?酪就是用动物的乳汁做成的半凝固食品,
如奶酪、干酪等。第1周,在受精之后几小时之内,受精卵开始分裂。1周以后,这个小
圆球将自己附着在子宫壁上。受精后8天。胚芽完成“着陆”,微微嵌入子宫内膜。此
时它分裂发育为几百个细胞。受精卵像不像奶酪?佛说的对不对?
《经》“第二七日处母胎时,所感业风名为遍满。其风微细,吹母左胁及以右胁,令歌
罗逻身相渐现,状如稠酪,或似凝酥,内热煎煮便即转为安浮陀身,如是四大渐渐成就
。”
第二周“歌罗逻”变为“安浮陀”。
《经》“第三七日处母胎时,复感业风名为藏口,由此风力,令渐凝结,其安浮陀转为
闭手,状如药杵而复短小,于其胎中内热煎煮,如是四大渐渐增长。”
第三周“安浮陀”转为“闭手”,“闭手”的形状像短小的“药杵”,杵就是舂米或捶
衣的木棒,“药杵”是中医用来捣药的棒子。第23天,刚好是第三周结束后的2天,看
起来还是像“药杵”。
《经》“第五七日处母胎时,复感业风名为摄持,由此风力,能令伽那转为般罗奢佉,
诸疱开剖,两髀、两肩及其身首而便出现。如春阳月,天降时雨,树木枝条而便出生;
因业风力,诸疱现时,亦复如是。”
第五周,髀:大腿,亦指大腿骨。身首呢?就是头嘛。根据拍摄的照片来看,第五周,
头、胳膊、腿都出现了,佛又说对了!
《经》“第七七日处母胎时,复感业风名为旋转,由此风力,四相出现,所谓手、足、
掌、缦之相,其相柔软犹如聚沫。”
七七49天,第52天正好对应,照片中虽然没拍到脚,但是手已经很明显了。
《经》“三十七日处母胎时,复感业风名为铁口,由此风力,发毛爪甲皆得增长,亦复
能现白黑诸光,从业缘起而生此相。”
第30个7天,也就是六、七个月的时候。爪甲就是指甲。
《经》“三十一七日乃至三十五七日处母胎时,身相长大,渐渐增广,人相具足。”
1×7 = 217,35×7 = 245,也就是在胎中待了七八个月的时候,外貌已经是一个人了
——人相具足。注意照片中的第7个月——胎儿长出了趾甲,也就是脚趾甲。
网络评论中有提到照片,这是因为在原文中是附有照片来进行对照说明的。感兴趣的朋
友可以在网上搜索到这篇带有照片的文章。我们下回再见。
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c*g
4
FP和RP都是GC含量很高的(72%)。另外两端还有gateway的接头。需要PCR一段5K左右
的基因。Tm都是57度。试了几次都没有成功。用过touchdown梯度的annealing,也加过
DMSO。都不行。请问还有什么可以再试试的吗?谢谢
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w*r
5
你给画个图

【在 z*********a 的大作中提到】
: when others come out of the body, it does not count. It does not look like
: the person.

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s*l
6
可以在PCR反应体系中加点Betaine(final concentration好像是1M)看看

【在 c*****g 的大作中提到】
: FP和RP都是GC含量很高的(72%)。另外两端还有gateway的接头。需要PCR一段5K左右
: 的基因。Tm都是57度。试了几次都没有成功。用过touchdown梯度的annealing,也加过
: DMSO。都不行。请问还有什么可以再试试的吗?谢谢

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z*a
7
that's why we cannot borrow a cell phone.

like

【在 z*********a 的大作中提到】
: when others come out of the body, it does not count. It does not look like
: the person.

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o*i
8
换引物

【在 c*****g 的大作中提到】
: FP和RP都是GC含量很高的(72%)。另外两端还有gateway的接头。需要PCR一段5K左右
: 的基因。Tm都是57度。试了几次都没有成功。用过touchdown梯度的annealing,也加过
: DMSO。都不行。请问还有什么可以再试试的吗?谢谢

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w*r
9
难怪。。我刚发现好像DREAMER版又关了?

【在 z*********a 的大作中提到】
: that's why we cannot borrow a cell phone.
:
: like

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k*n
10
The Kit of Invitrogen Platinum Pfx DNA polymerase contains different buffer
(PCRx Enhancer solution) is for problematic and or GF-rich templates.
Just try.
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d*u
11
betaine是个办法,还可以加DMSO,还有一些公司提供GC RICH reagent。比如罗氏。
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h*r
12
试试
1)Pfx的Enhancer buffer
2)加DMSO
3)试试Phusion的GC buffer或加DMSO
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s*n
13
HF buffer
另外听说加甘油有效果,没试过,你可以查查
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N*o
14
强烈推荐Takara的PrimeSTAR。
在构建Human Antibody Library时候,在我前面的博后捣腾了几个月,终于PCR出来了
,但是有时候用他的Protocol还是会失败。我换了Takara的PrimeSTAR,效果嘎嘎的,
没有再失败一次。
Takara的PrimeSTAR的GC Rich会是最佳选择。Fisher有代理。
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c*2
15
phusion, GC buffer,Mgcl2 or DMSO
实验室做的就是基因组GC含量高的细菌,一直用phusion
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