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关于co-ip的!# Biology - 生物学
c*1
1
有没有人推荐在上海的签证中介服务,帮父母填些表格,模拟面试等服务。
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b*r
2
我平时飙一两首高音都嗓子哑了,那些开个唱的,再怎么注意发生方法我觉得十几首下
来也吃不消啊,他们怎么做到的?是不是得先得给声带打激素抗水肿啥的呢?
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b*u
3
在revision,review建议endogenous的coip检验是否binding,表明真实的相互作用状态,我们文章里面,overexpression可以检测到binding,但内源的试了几次,摸索了不同buffer条件没有成功,以前就看相关文献,一篇cell里面可以内源检测到该蛋白和一个底物binding,但我们没有重复出来,就连overexpression这2个蛋白,我们也没检测到binding,哎,十分frustrated啊,coip就是很tricky。
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D*g
4
方法问题,你用白嗓喉,不哑才怪
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A*y
5
Now you know how many over-expression data are probably wrong. Do you know
the binding site? How about introduces mutation at the binding interface
and see if you still can ip it down with over-experssion.
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x*n
6
需要科学发声方法啊,发声方法科学,长时间唱声带也不疲劳
流行歌手有些即使能开个唱,也有把声带弄坏的
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w*a
7
GST-pull down
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b*a
8
re

【在 x***n 的大作中提到】
: 需要科学发声方法啊,发声方法科学,长时间唱声带也不疲劳
: 流行歌手有些即使能开个唱,也有把声带弄坏的

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s*s
9
//nod, 检测有没有相互作用应该用这个呀,怎么能用co-ip
再说,就算有Interaction,co-ip也不一定work

【在 w***a 的大作中提到】
: GST-pull down
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V*x
10
同求答案~~

【在 b****r 的大作中提到】
: 我平时飙一两首高音都嗓子哑了,那些开个唱的,再怎么注意发生方法我觉得十几首下
: 来也吃不消啊,他们怎么做到的?是不是得先得给声带打激素抗水肿啥的呢?

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a*e
11
GST pull down is a more artificial assay, while co-IP more represents the
endogenous case.

【在 s******s 的大作中提到】
: //nod, 检测有没有相互作用应该用这个呀,怎么能用co-ip
: 再说,就算有Interaction,co-ip也不一定work

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b*r
12
请问有没有科学发声教程啊,我觉得这么重要的东东应该置顶呀

【在 x***n 的大作中提到】
: 需要科学发声方法啊,发声方法科学,长时间唱声带也不疲劳
: 流行歌手有些即使能开个唱,也有把声带弄坏的

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O*e
13
GST PD: direct interaction;
Co-IP: interaction, maybe indirect.

【在 a***e 的大作中提到】
: GST pull down is a more artificial assay, while co-IP more represents the
: endogenous case.

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c*g
14
时间长了同不行
请睡鼠mm来谈谈吧,传说中都是一k就n个小时的
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C*Y
15

状态,我们文章里面,
overexpression可以检测到binding,但内源的试了几次,摸索了不同buffer条件没有
成功,以前就看相关文献,一篇cell
里面可以内源检测到该蛋白和一个底物binding,但我们没有重复出来,就连
overexpression这2个蛋白,我们也没检测到
binding,哎,十分frustrated啊,coip就是很tricky。
Hopefully these tips will be helpful.
Make sue you have a very good 1st antibody. A strong antibody is capable of
pulling down weak interaction
partners.
Crosslink 1st antibody to beads and elute co-purified protein complex from beads
after washing (instead of boiling
beads) to reduce background.
Use ECL plu

【在 b****u 的大作中提到】
: 在revision,review建议endogenous的coip检验是否binding,表明真实的相互作用状态,我们文章里面,overexpression可以检测到binding,但内源的试了几次,摸索了不同buffer条件没有成功,以前就看相关文献,一篇cell里面可以内源检测到该蛋白和一个底物binding,但我们没有重复出来,就连overexpression这2个蛋白,我们也没检测到binding,哎,十分frustrated啊,coip就是很tricky。
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x*n
16
据俺所知,一般学院派的美声,传统戏剧,和传统的民间唱法都包含了长时间摸索总结
出来的科学发声的因素,否则即没法长时间唱,更无法唱到老。
具体的你可以请教一下yy0416,她是这方面的专家。先从保护嗓子开始
http://www.mitbbs.com/article/Music/31377383_3.html

【在 b****r 的大作中提到】
: 请问有没有科学发声教程啊,我觉得这么重要的东东应该置顶呀
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v*a
17
我也有类似的co-ip不work的困扰。
请问你说的:
“Crosslink 1st antibody to beads and elute co-purified protein complex from
beads after washing (instead of boiling beads) to reduce background”
怎么个crosslink法?我是加了1st Ab overnight再加beads的。
还有elute我是用的SDS sample buffer,然后就boil,100 C,10min。boiling beads
和elute是两个独立的过程呀,为啥elute可以取代boiling?是我理解错你的意思了吗?
关于ECL plus,我觉得用ECL曝光久一点,貌似也跟plus一样的效果,而且plus还会令
blot颜色深浅不均一,不知道你会有这个问题吗?如果有,怎么解决比较好?
谢谢回答。

of

【在 C***Y 的大作中提到】
:
: 状态,我们文章里面,
: overexpression可以检测到binding,但内源的试了几次,摸索了不同buffer条件没有
: 成功,以前就看相关文献,一篇cell
: 里面可以内源检测到该蛋白和一个底物binding,但我们没有重复出来,就连
: overexpression这2个蛋白,我们也没检测到
: binding,哎,十分frustrated啊,coip就是很tricky。
: Hopefully these tips will be helpful.
: Make sue you have a very good 1st antibody. A strong antibody is capable of
: pulling down weak interaction

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b*r
18
谢谢,这个本版置顶贴早就拜读了,不过还是不知道如何彻夜k歌不累呀

【在 x***n 的大作中提到】
: 据俺所知,一般学院派的美声,传统戏剧,和传统的民间唱法都包含了长时间摸索总结
: 出来的科学发声的因素,否则即没法长时间唱,更无法唱到老。
: 具体的你可以请教一下yy0416,她是这方面的专家。先从保护嗓子开始
: http://www.mitbbs.com/article/Music/31377383_3.html

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C*Y
19

from
beads
吗?
Here are the details:
Incubate 1at Ab with beads for 1 hr at RT. Wash away the unbound Ab.
Crosslink Ab to beads with Imidoester
Crosslinkers (Pierce). Incubate Nuclear extract (or whole cell lysate) with
beads-Ab.
After washes, elute the co-purified protein complex with low PH glycine
solution instead of boiling beads.

【在 v***a 的大作中提到】
: 我也有类似的co-ip不work的困扰。
: 请问你说的:
: “Crosslink 1st antibody to beads and elute co-purified protein complex from
: beads after washing (instead of boiling beads) to reduce background”
: 怎么个crosslink法?我是加了1st Ab overnight再加beads的。
: 还有elute我是用的SDS sample buffer,然后就boil,100 C,10min。boiling beads
: 和elute是两个独立的过程呀,为啥elute可以取代boiling?是我理解错你的意思了吗?
: 关于ECL plus,我觉得用ECL曝光久一点,貌似也跟plus一样的效果,而且plus还会令
: blot颜色深浅不均一,不知道你会有这个问题吗?如果有,怎么解决比较好?
: 谢谢回答。

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k*r
20
我一k歌就是4,5个小时,我老公总是被我吓坏..........

【在 b****r 的大作中提到】
: 谢谢,这个本版置顶贴早就拜读了,不过还是不知道如何彻夜k歌不累呀
avatar
v*a
21
非常感谢
还有2个问题:
1)你是用什么buffer来incubate 1st Ab 和 beads的?跟wash一样的buffer吗?我
wash是用IP lysis buffer。你会preclean nuclear extract/cell lysate吗?
2)low pH glycine solution具体是多low?6.8?这个是可以直接elute然后
centrifuge了就可以上样跑胶?

with

【在 C***Y 的大作中提到】
:
: from
: beads
: 吗?
: Here are the details:
: Incubate 1at Ab with beads for 1 hr at RT. Wash away the unbound Ab.
: Crosslink Ab to beads with Imidoester
: Crosslinkers (Pierce). Incubate Nuclear extract (or whole cell lysate) with
: beads-Ab.
: After washes, elute the co-purified protein complex with low PH glycine

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x*n
22
赫赫,有一个简单的方法,仅供参考。就是唱歌的时候养成习惯,始终留意自己嗓子状
态,觉得嗓子发紧的时候就有意识地放松嗓子。一开始选择自己唱着最舒服的歌开开嗓
子也会有帮助。

【在 b****r 的大作中提到】
: 谢谢,这个本版置顶贴早就拜读了,不过还是不知道如何彻夜k歌不累呀
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C*Y
23

PBS or washing buffer can be used for incubating Ab with beads;
I have never done preclear;
Glycine solution (pH~2.8) can be used for elution. After elution, add equal
volume of 1 M Tris, PH7.5 (for
neutralization) and equal volume of 3 X SDS loading buffer.

【在 v***a 的大作中提到】
: 非常感谢
: 还有2个问题:
: 1)你是用什么buffer来incubate 1st Ab 和 beads的?跟wash一样的buffer吗?我
: wash是用IP lysis buffer。你会preclean nuclear extract/cell lysate吗?
: 2)low pH glycine solution具体是多low?6.8?这个是可以直接elute然后
: centrifuge了就可以上样跑胶?
:
: with

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x*n
24
Lol

【在 k****r 的大作中提到】
: 我一k歌就是4,5个小时,我老公总是被我吓坏..........
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b*u
25
多谢各位的建议,crosslink我也曾经try过,就是重复不了别人的实验,人家内源也可
以pulldown,咱们overexpressing都不行,差距那叫一个大啊。
BTW,可能不同lab做COIP的时候的buffer条件不一样吧。
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b*a
26
觉得挺有道理的。感觉现在网上资料挺多的,lz可以多查查。
我的感觉就是尽量让声带被动的发声,喉部肌肉尽量放松,我的理解其实这个就是气泡
音。
如果唱的每个字都是气泡音组成的,应该就是比较科学的发声了
因为声带是被动发音,喉部也不那么容易累,累也是肚子累
其实林俊卿的咽音唱法里面有很多理论说的都很好,唱通俗的话
能借鉴一点帮助应该就会很大
我说的不一定对,只是我自己的一点体会,高手看到错误希望能来纠正一下
而且我也是纸上谈兵,还在苦练中,希望有一天能练成绝世武功第一级^_^

【在 x***n 的大作中提到】
: 赫赫,有一个简单的方法,仅供参考。就是唱歌的时候养成习惯,始终留意自己嗓子状
: 态,觉得嗓子发紧的时候就有意识地放松嗓子。一开始选择自己唱着最舒服的歌开开嗓
: 子也会有帮助。

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v*a
27
多谢多谢!

equal

【在 C***Y 的大作中提到】
:
: PBS or washing buffer can be used for incubating Ab with beads;
: I have never done preclear;
: Glycine solution (pH~2.8) can be used for elution. After elution, add equal
: volume of 1 M Tris, PH7.5 (for
: neutralization) and equal volume of 3 X SDS loading buffer.

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x*n
28
赫赫,林俊卿的咽音唱法狠不错

【在 b*******a 的大作中提到】
: 觉得挺有道理的。感觉现在网上资料挺多的,lz可以多查查。
: 我的感觉就是尽量让声带被动的发声,喉部肌肉尽量放松,我的理解其实这个就是气泡
: 音。
: 如果唱的每个字都是气泡音组成的,应该就是比较科学的发声了
: 因为声带是被动发音,喉部也不那么容易累,累也是肚子累
: 其实林俊卿的咽音唱法里面有很多理论说的都很好,唱通俗的话
: 能借鉴一点帮助应该就会很大
: 我说的不一定对,只是我自己的一点体会,高手看到错误希望能来纠正一下
: 而且我也是纸上谈兵,还在苦练中,希望有一天能练成绝世武功第一级^_^

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b*H
29
pH2.8 PLUS 1/20 V of pH9.4, or pH3.5 elution plus 1/10 V of pH8.5 could be
better. otherwise, sample going to be diluted too much.
remember doing it at RT, and no more than 15min.

equal

【在 C***Y 的大作中提到】
:
: PBS or washing buffer can be used for incubating Ab with beads;
: I have never done preclear;
: Glycine solution (pH~2.8) can be used for elution. After elution, add equal
: volume of 1 M Tris, PH7.5 (for
: neutralization) and equal volume of 3 X SDS loading buffer.

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x*y
30
据说这方法费嗓子也比较落后。 据说高音还是靠头腔和通道比较科学。 具体还是请专
业的来讲讲才好

【在 x***n 的大作中提到】
: 赫赫,林俊卿的咽音唱法狠不错
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b*H
31
THERMO 的Femto 可比普通的ECL灵敏1000倍,平常曝白片的膜换上FEMTO经常是肉眼下
熠熠发光啊,但对有些抗体不行,背景太高。
另外就是世纪太贵。

from
beads
吗?

【在 v***a 的大作中提到】
: 我也有类似的co-ip不work的困扰。
: 请问你说的:
: “Crosslink 1st antibody to beads and elute co-purified protein complex from
: beads after washing (instead of boiling beads) to reduce background”
: 怎么个crosslink法?我是加了1st Ab overnight再加beads的。
: 还有elute我是用的SDS sample buffer,然后就boil,100 C,10min。boiling beads
: 和elute是两个独立的过程呀,为啥elute可以取代boiling?是我理解错你的意思了吗?
: 关于ECL plus,我觉得用ECL曝光久一点,貌似也跟plus一样的效果,而且plus还会令
: blot颜色深浅不均一,不知道你会有这个问题吗?如果有,怎么解决比较好?
: 谢谢回答。

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b*r
32
我平时飙一两首高音都嗓子哑了,那些开个唱的,再怎么注意发生方法我觉得十几首下
来也吃不消啊,他们怎么做到的?是不是得先得给声带打激素抗水肿啥的呢?
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D*g
33
方法问题,你用白嗓喉,不哑才怪
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x*n
34
需要科学发声方法啊,发声方法科学,长时间唱声带也不疲劳
流行歌手有些即使能开个唱,也有把声带弄坏的
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b*a
35
re

【在 x***n 的大作中提到】
: 需要科学发声方法啊,发声方法科学,长时间唱声带也不疲劳
: 流行歌手有些即使能开个唱,也有把声带弄坏的

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V*x
36
同求答案~~

【在 b****r 的大作中提到】
: 我平时飙一两首高音都嗓子哑了,那些开个唱的,再怎么注意发生方法我觉得十几首下
: 来也吃不消啊,他们怎么做到的?是不是得先得给声带打激素抗水肿啥的呢?

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b*r
37
请问有没有科学发声教程啊,我觉得这么重要的东东应该置顶呀

【在 x***n 的大作中提到】
: 需要科学发声方法啊,发声方法科学,长时间唱声带也不疲劳
: 流行歌手有些即使能开个唱,也有把声带弄坏的

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c*g
38
时间长了同不行
请睡鼠mm来谈谈吧,传说中都是一k就n个小时的
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x*n
39
据俺所知,一般学院派的美声,传统戏剧,和传统的民间唱法都包含了长时间摸索总结
出来的科学发声的因素,否则即没法长时间唱,更无法唱到老。
具体的你可以请教一下yy0416,她是这方面的专家。先从保护嗓子开始
http://www.mitbbs.com/article/Music/31377383_3.html

【在 b****r 的大作中提到】
: 请问有没有科学发声教程啊,我觉得这么重要的东东应该置顶呀
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b*r
40
谢谢,这个本版置顶贴早就拜读了,不过还是不知道如何彻夜k歌不累呀

【在 x***n 的大作中提到】
: 据俺所知,一般学院派的美声,传统戏剧,和传统的民间唱法都包含了长时间摸索总结
: 出来的科学发声的因素,否则即没法长时间唱,更无法唱到老。
: 具体的你可以请教一下yy0416,她是这方面的专家。先从保护嗓子开始
: http://www.mitbbs.com/article/Music/31377383_3.html

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k*r
41
我一k歌就是4,5个小时,我老公总是被我吓坏..........

【在 b****r 的大作中提到】
: 谢谢,这个本版置顶贴早就拜读了,不过还是不知道如何彻夜k歌不累呀
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x*n
42
赫赫,有一个简单的方法,仅供参考。就是唱歌的时候养成习惯,始终留意自己嗓子状
态,觉得嗓子发紧的时候就有意识地放松嗓子。一开始选择自己唱着最舒服的歌开开嗓
子也会有帮助。

【在 b****r 的大作中提到】
: 谢谢,这个本版置顶贴早就拜读了,不过还是不知道如何彻夜k歌不累呀
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x*n
43
Lol

【在 k****r 的大作中提到】
: 我一k歌就是4,5个小时,我老公总是被我吓坏..........
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b*a
44
觉得挺有道理的。感觉现在网上资料挺多的,lz可以多查查。
我的感觉就是尽量让声带被动的发声,喉部肌肉尽量放松,我的理解其实这个就是气泡
音。
如果唱的每个字都是气泡音组成的,应该就是比较科学的发声了
因为声带是被动发音,喉部也不那么容易累,累也是肚子累
其实林俊卿的咽音唱法里面有很多理论说的都很好,唱通俗的话
能借鉴一点帮助应该就会很大
我说的不一定对,只是我自己的一点体会,高手看到错误希望能来纠正一下
而且我也是纸上谈兵,还在苦练中,希望有一天能练成绝世武功第一级^_^

【在 x***n 的大作中提到】
: 赫赫,有一个简单的方法,仅供参考。就是唱歌的时候养成习惯,始终留意自己嗓子状
: 态,觉得嗓子发紧的时候就有意识地放松嗓子。一开始选择自己唱着最舒服的歌开开嗓
: 子也会有帮助。

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x*n
45
赫赫,林俊卿的咽音唱法狠不错

【在 b*******a 的大作中提到】
: 觉得挺有道理的。感觉现在网上资料挺多的,lz可以多查查。
: 我的感觉就是尽量让声带被动的发声,喉部肌肉尽量放松,我的理解其实这个就是气泡
: 音。
: 如果唱的每个字都是气泡音组成的,应该就是比较科学的发声了
: 因为声带是被动发音,喉部也不那么容易累,累也是肚子累
: 其实林俊卿的咽音唱法里面有很多理论说的都很好,唱通俗的话
: 能借鉴一点帮助应该就会很大
: 我说的不一定对,只是我自己的一点体会,高手看到错误希望能来纠正一下
: 而且我也是纸上谈兵,还在苦练中,希望有一天能练成绝世武功第一级^_^

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x*y
46
据说这方法费嗓子也比较落后。 据说高音还是靠头腔和通道比较科学。 具体还是请专
业的来讲讲才好

【在 x***n 的大作中提到】
: 赫赫,林俊卿的咽音唱法狠不错
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l*y
47
对于这些理论俺一窍不通,可是莫非俺误打误撞上了科学的发声方法? 飚高音经常以小
时记的,也不觉得怎样,疲劳的时候倒是很低的音唱起来很费劲。

【在 x***n 的大作中提到】
: 需要科学发声方法啊,发声方法科学,长时间唱声带也不疲劳
: 流行歌手有些即使能开个唱,也有把声带弄坏的

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l*e
48
1.彪高音的时候位置不对,气息没有支持,完全靠吼,声带过分紧张。
2.没有适当的warm up,嗓子也像身体锻炼一样,需要warm up的时间,否则就容易产生
运动损伤(嗓子哑)
3.平时对嗓子是否保养?
4.唱流行开个唱的,不注意用嗓卫生的声带出问题的多得去了,就算美声训练不正确的
话也有生小结的情况,所以你看到演唱会没问题不等于真的嗓子没问题。
5.正确发声下,warm up情况下,唱1个多小时2个小时的作品是不会让嗓子失音的,这
个我有自身体会,绝对不需要打激素抗水肿。

【在 b****r 的大作中提到】
: 我平时飙一两首高音都嗓子哑了,那些开个唱的,再怎么注意发生方法我觉得十几首下
: 来也吃不消啊,他们怎么做到的?是不是得先得给声带打激素抗水肿啥的呢?

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b*a
49
怎么会费嗓子呢?他号称被动发音,最不累嗓子的啊
他也有头腔和通道啊?
京剧青衣的唱腔有很大的咽音成分,而我从没因为唱京剧坏过嗓子
所以我觉得这个方法还是科学的

【在 x******y 的大作中提到】
: 据说这方法费嗓子也比较落后。 据说高音还是靠头腔和通道比较科学。 具体还是请专
: 业的来讲讲才好

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y*i
50
咽音的那个无声练习挺好的,youtube上有,要吧舌头伸出来像吊死鬼一样然后甩脑袋
,看得我笑死了。
不过就是坚持不了练,我连打嘟噜都懒得打。

【在 b*******a 的大作中提到】
: 怎么会费嗓子呢?他号称被动发音,最不累嗓子的啊
: 他也有头腔和通道啊?
: 京剧青衣的唱腔有很大的咽音成分,而我从没因为唱京剧坏过嗓子
: 所以我觉得这个方法还是科学的

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x*n
51
赫赫,这恐怕是不同专业学派的争论
贴一个咽音派张映哲的 送瘟神,据她的学生说老太太七十多岁依然能很漂亮地唱出最后的高音
http://tieba.baidu.com/f?kz=207618641

【在 x******y 的大作中提到】
: 据说这方法费嗓子也比较落后。 据说高音还是靠头腔和通道比较科学。 具体还是请专
: 业的来讲讲才好

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x*n
52
赫赫,不知道,人跟人不一样

【在 l****y 的大作中提到】
: 对于这些理论俺一窍不通,可是莫非俺误打误撞上了科学的发声方法? 飚高音经常以小
: 时记的,也不觉得怎样,疲劳的时候倒是很低的音唱起来很费劲。

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x*n
53
青衣唱腔有啥特点?

【在 b*******a 的大作中提到】
: 怎么会费嗓子呢?他号称被动发音,最不累嗓子的啊
: 他也有头腔和通道啊?
: 京剧青衣的唱腔有很大的咽音成分,而我从没因为唱京剧坏过嗓子
: 所以我觉得这个方法还是科学的

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b*a
54
这个很难说啊
你听一下就知道了,就是那种很尖的声音
只可意会不可言传
基本上是咽音加假声

【在 x***n 的大作中提到】
: 青衣唱腔有啥特点?
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b*a
55
是啊,就是练起了太难看了点
我没太搞懂这个打嘟噜是为练什么的?
练气息的?

【在 y****i 的大作中提到】
: 咽音的那个无声练习挺好的,youtube上有,要吧舌头伸出来像吊死鬼一样然后甩脑袋
: ,看得我笑死了。
: 不过就是坚持不了练,我连打嘟噜都懒得打。

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x*n
56
好吧 :)

【在 b*******a 的大作中提到】
: 这个很难说啊
: 你听一下就知道了,就是那种很尖的声音
: 只可意会不可言传
: 基本上是咽音加假声

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l*i
57
飙高音的歌手个唱的时候会把调子降低
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b*r
58
我的妈呀这也太高了

最后的高音

【在 x***n 的大作中提到】
: 赫赫,这恐怕是不同专业学派的争论
: 贴一个咽音派张映哲的 送瘟神,据她的学生说老太太七十多岁依然能很漂亮地唱出最后的高音
: http://tieba.baidu.com/f?kz=207618641

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