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抗体对Western 与IP会差很多吗
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抗体对Western 与IP会差很多吗# Biology - 生物学
G*J
1
这几天版上的祝福帖非常的多,大家也都给了最真挚的祝福。可是转天再看版面的时候
,却找不到前一天的帖子了,估计是了楼主径自删除了帖子,没有更新update.相信版
上有很多人都和我一样希望看到结果。希望发了祝福帖的朋友们都能够写出爸妈的签经
,收到祝福后不应该消失,不是吗?!同意的朋友顶一下。
另外建议版主将这个作为条例吧,凡是发祝福帖的都要发签经!
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l*d
2
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h*n
3
最近在研究一个很大的蛋白,有2500个氨基酸。我在这个蛋白的N端加了个FLag。筛了
稳定表达细胞系,用FLAG抗体检测不到蛋白的表达,但我用这个蛋白本身的抗体可以检
测到很强的信号。我以为FLAG序列没有表达,然后就做了FLAG IP,接着用蛋白本身的
抗体看看FLag能否沉下蛋白,结果发现FLAG能能沉下蛋白,比INPUT多。因为实验需要
,只能用1xFLAG,而不能用3XFLAG.FLAG抗体做IP比western灵敏吗?为什么我的western
检测不到?
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e*5
4
up
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A*e
5
嗷嗷嗷嗷呜

【在 l*******d 的大作中提到】

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s*s
6
有一个问题
IP出来的怎么会比input多呢?
你input control是10% input还是所有的啊?
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G*J
7
up
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c*t
8
赞,等

【在 l*******d 的大作中提到】

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h*n
9
1/50

【在 s*********s 的大作中提到】
: 有一个问题
: IP出来的怎么会比input多呢?
: 你input control是10% input还是所有的啊?

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G*i
10
同意
否则这个版都成了祝福版了

【在 G**J 的大作中提到】
: 这几天版上的祝福帖非常的多,大家也都给了最真挚的祝福。可是转天再看版面的时候
: ,却找不到前一天的帖子了,估计是了楼主径自删除了帖子,没有更新update.相信版
: 上有很多人都和我一样希望看到结果。希望发了祝福帖的朋友们都能够写出爸妈的签经
: ,收到祝福后不应该消失,不是吗?!同意的朋友顶一下。
: 另外建议版主将这个作为条例吧,凡是发祝福帖的都要发签经!

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m*e
11
有些事情注定要跟随我们一生,
并不时时想起, 却没有一刻忘记。
LZ不必不安,
其实一直是亲人的爱与祝福在与你作伴。
想到姐姐温暖的怀抱与含笑的眼睛,
你也应该回报她一个放松的,舒展的,熟悉的微笑;
告诉她你也爱她。
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s*s
12
所以,IP比1/50 input多是正常的
你前面的结果,对于stable cell line
用蛋白本身的抗体做western,ectopic expression的stable cell line比control
cell line高多少?
我有一个hypothesis,需要你更多的information才能判断.

western

【在 h*****n 的大作中提到】
: 最近在研究一个很大的蛋白,有2500个氨基酸。我在这个蛋白的N端加了个FLag。筛了
: 稳定表达细胞系,用FLAG抗体检测不到蛋白的表达,但我用这个蛋白本身的抗体可以检
: 测到很强的信号。我以为FLAG序列没有表达,然后就做了FLAG IP,接着用蛋白本身的
: 抗体看看FLag能否沉下蛋白,结果发现FLAG能能沉下蛋白,比INPUT多。因为实验需要
: ,只能用1xFLAG,而不能用3XFLAG.FLAG抗体做IP比western灵敏吗?为什么我的western
: 检测不到?

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w*e
13
UP!
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l*d
14
谢谢五月村。20多年过去了,我已经学会了理性地看待发生的一切,对于我姐姐是天国里俯视大地的那双眼睛,我只需要踏踏实实安安心心地工作和生活,照顾好自己和家人,我想我微笑的时候她也一定在开心微笑。谨此祝愿天下有情人,爱你的和你爱的人,都过得开心,健康和快乐。

【在 m********e 的大作中提到】
: 有些事情注定要跟随我们一生,
: 并不时时想起, 却没有一刻忘记。
: LZ不必不安,
: 其实一直是亲人的爱与祝福在与你作伴。
: 想到姐姐温暖的怀抱与含笑的眼睛,
: 你也应该回报她一个放松的,舒展的,熟悉的微笑;
: 告诉她你也爱她。

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t*y
15
增加抗体浓度。譬如原先1:1000稀释,现在1:200稀释,估计可以看到。我也碰到类
似的情况。
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G*i
16
UP again!

【在 G**J 的大作中提到】
: 这几天版上的祝福帖非常的多,大家也都给了最真挚的祝福。可是转天再看版面的时候
: ,却找不到前一天的帖子了,估计是了楼主径自删除了帖子,没有更新update.相信版
: 上有很多人都和我一样希望看到结果。希望发了祝福帖的朋友们都能够写出爸妈的签经
: ,收到祝福后不应该消失,不是吗?!同意的朋友顶一下。
: 另外建议版主将这个作为条例吧,凡是发祝福帖的都要发签经!

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s*l
17
我觉得是1*tag的问题,用3*tag应该好些,我表达一个1*HA tag的蛋白作stable line
,筛选的时候用HA的抗体根本没信号,用该蛋白的抗体可以看到比endogenous强的
shift band

western

【在 h*****n 的大作中提到】
: 最近在研究一个很大的蛋白,有2500个氨基酸。我在这个蛋白的N端加了个FLag。筛了
: 稳定表达细胞系,用FLAG抗体检测不到蛋白的表达,但我用这个蛋白本身的抗体可以检
: 测到很强的信号。我以为FLAG序列没有表达,然后就做了FLAG IP,接着用蛋白本身的
: 抗体看看FLag能否沉下蛋白,结果发现FLAG能能沉下蛋白,比INPUT多。因为实验需要
: ,只能用1xFLAG,而不能用3XFLAG.FLAG抗体做IP比western灵敏吗?为什么我的western
: 检测不到?

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h*n
18

高很多,甚至一度觉得表达太高了。

【在 s*********s 的大作中提到】
: 所以,IP比1/50 input多是正常的
: 你前面的结果,对于stable cell line
: 用蛋白本身的抗体做western,ectopic expression的stable cell line比control
: cell line高多少?
: 我有一个hypothesis,需要你更多的information才能判断.
:
: western

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