怎么GENOTYPE HOMOZYGOTE tg MICE# Biology - 生物学
l*o
1 楼
丈夫最近刚成公民，我找到博后，马上要去j1 面签。结婚3年左右了，一直两地中，我
从未去过美国。
请问，我这种情况j1面签有问题吗？要注意些什么？多谢！
从未去过美国。
请问，我这种情况j1面签有问题吗？要注意些什么？多谢！
P*e
2 楼
是有情节的，本来以为是子子孙孙无穷尽地打boss，原来拿到infinity sword之后是可以通关的。。。
作为tablet上的游戏是做得很不错了，回去继续玩我的Metal Gear
作为tablet上的游戏是做得很不错了，回去继续玩我的Metal Gear
a*g
3 楼
想GENERATE HOMOZYGOTE的TG MICE， 请问怎么可以GENOTYPING啊，用QPCR可靠吗？需
要用TAQMAN还是普通QPCR就可以了？多谢！
要用TAQMAN还是普通QPCR就可以了？多谢！
r*y
4 楼
拿到了还没完。。。。
可以通关的。。。
【在 P****e 的大作中提到】
: 是有情节的，本来以为是子子孙孙无穷尽地打boss，原来拿到infinity sword之后是可以通关的。。。
: 作为tablet上的游戏是做得很不错了，回去继续玩我的Metal Gear
可以通关的。。。
【在 P****e 的大作中提到】
: 是有情节的，本来以为是子子孙孙无穷尽地打boss，原来拿到infinity sword之后是可以通关的。。。
: 作为tablet上的游戏是做得很不错了，回去继续玩我的Metal Gear
R*n
5 楼
Taqman吧，Gold standard
a*g
6 楼
多谢！普通SYBR GREEN不行吗？
【在 R****n 的大作中提到】
: Taqman吧，Gold standard
【在 R****n 的大作中提到】
: Taqman吧，Gold standard
S*s
7 楼
这个难度比较高。你知道 transgene 插入在基因组的位置么？如果知道的话设计
Primer 扩充相应位置就行了。好奇的问一句，你为什么要 homozygous tg mice？
【在 a*******g 的大作中提到】
: 想GENERATE HOMOZYGOTE的TG MICE， 请问怎么可以GENOTYPING啊，用QPCR可靠吗？需
: 要用TAQMAN还是普通QPCR就可以了？多谢！
Primer 扩充相应位置就行了。好奇的问一句，你为什么要 homozygous tg mice？
【在 a*******g 的大作中提到】
: 想GENERATE HOMOZYGOTE的TG MICE， 请问怎么可以GENOTYPING啊，用QPCR可靠吗？需
: 要用TAQMAN还是普通QPCR就可以了？多谢！
R*n
8 楼
syber green原理是用allele specific PCR吧，一个primer 3'端用来区分phenotype.
我没做过不太清楚效果。还有什么和ligation结合的，HRM的。你说的太笼统了。
Taqman是用probe,两边一个dye一个quencher，不同的sequence dye不一样，一管PCR搞
定。这个基本上是业界的标准方法
【在 a*******g 的大作中提到】
: 多谢！普通SYBR GREEN不行吗？
我没做过不太清楚效果。还有什么和ligation结合的，HRM的。你说的太笼统了。
Taqman是用probe,两边一个dye一个quencher，不同的sequence dye不一样，一管PCR搞
定。这个基本上是业界的标准方法
【在 a*******g 的大作中提到】
: 多谢！普通SYBR GREEN不行吗？
M*9
9 楼
qPCR比较麻烦，需要优化PCR效率；如果有pyrosequencer的话，建议使用
pyrosequencing，请参见：
http://genome.cshlp.org/content/19/11/2081.short?cited-by=yes&legid=genome;19/11/2081
【在 a*******g 的大作中提到】
: 想GENERATE HOMOZYGOTE的TG MICE， 请问怎么可以GENOTYPING啊，用QPCR可靠吗？需
: 要用TAQMAN还是普通QPCR就可以了？多谢！
pyrosequencing，请参见：
http://genome.cshlp.org/content/19/11/2081.short?cited-by=yes&legid=genome;19/11/2081
【在 a*******g 的大作中提到】
: 想GENERATE HOMOZYGOTE的TG MICE， 请问怎么可以GENOTYPING啊，用QPCR可靠吗？需
: 要用TAQMAN还是普通QPCR就可以了？多谢！
c*r
10 楼
sybr green也可以，但是需要分开跑。
sybr green是个non-specific的DNA double strain dye.就是说，只要是PCR产物都可
以stain。所以没法用multiplex reation做internal control。
如果用taqman，pcr效率不错的话，可以设计两对primers，一对测你的target
sequence，一对做个其他随便什么基因的sequence。分别用不同的颜色标记。这样在一
个样品里跑两个pcr。如果如果target sequence是control的50%（一般给+-20%的误差
）就是single copy。如果和control一样（也是20%误差）就是two copies。
如果你的primers设计比较好，两对的amplification efficiency非常接近，那么可以
直接用ct数来计算二者的关系。但是如果两对primers的效率相差比较多，那么只能每
次都分别给两个primer做standard curve。这样保证二者的定量可比，也是可以的。就
是麻烦点。
【在 a*******g 的大作中提到】
: 多谢！普通SYBR GREEN不行吗？
sybr green是个non-specific的DNA double strain dye.就是说，只要是PCR产物都可
以stain。所以没法用multiplex reation做internal control。
如果用taqman，pcr效率不错的话，可以设计两对primers，一对测你的target
sequence，一对做个其他随便什么基因的sequence。分别用不同的颜色标记。这样在一
个样品里跑两个pcr。如果如果target sequence是control的50%（一般给+-20%的误差
）就是single copy。如果和control一样（也是20%误差）就是two copies。
如果你的primers设计比较好，两对的amplification efficiency非常接近，那么可以
直接用ct数来计算二者的关系。但是如果两对primers的效率相差比较多，那么只能每
次都分别给两个primer做standard curve。这样保证二者的定量可比，也是可以的。就
是麻烦点。
【在 a*******g 的大作中提到】
: 多谢！普通SYBR GREEN不行吗？
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