g*1
2 楼
在新实验室第一次做RT-PCR,用的是实验室传下来的protocol。
oligoT作RT以后再用cDNA扩增,使用200bp左右产物的primer sets扩增,3组全部扩出
产物;但是
同一个基因,1kb左右产物的primer set就扩不出来。因为有正负对照,知道PCR体系和
引物没问题。
但是试了很多次,包括使用其他基因的引物,都是括不出大片段。
这是什么情况?
oligoT作RT以后再用cDNA扩增,使用200bp左右产物的primer sets扩增,3组全部扩出
产物;但是
同一个基因,1kb左右产物的primer set就扩不出来。因为有正负对照,知道PCR体系和
引物没问题。
但是试了很多次,包括使用其他基因的引物,都是括不出大片段。
这是什么情况?
j*y
3 楼
难道不是每次都是一年吗? 为什么会第一年给两年半..
g*1
8 楼
更新:跑了个琼脂糖电泳,28S 和18S条带很清楚,有少量Smear。但是5S最亮,18S 看
起来比28S亮一点。这是不是跟降解有关?
起来比28S亮一点。这是不是跟降解有关?
g*1
10 楼
不知道非变形胶中是不是仍然适用2:1比例
s*y
11 楼
Well, you should add RNaseH. Because sometimes you never know what kind of
strange conformation those double-strand DNA-RNA can be.
They can easily inhibit your PCR reaction.
I would also suggest you to increase the template amount, and on the
meantime, try to do the RT-PCR again carefully.
【在 g******1 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png)
: 以前从不加RNAse,扩增2kb也没问题啊。
: 倒是确实不排除RNA降解的可能性
strange conformation those double-strand DNA-RNA can be.
They can easily inhibit your PCR reaction.
I would also suggest you to increase the template amount, and on the
meantime, try to do the RT-PCR again carefully.
【在 g******1 的大作中提到】
![](/moin_static193/solenoid/img/up.png)
: 以前从不加RNAse,扩增2kb也没问题啊。
: 倒是确实不排除RNA降解的可能性
g*1
13 楼
多谢楼上建议,我重做一遍试试
相关阅读
外行问:你们老说的K99呀R01呀的是什么?从整个北美华人圈的角度看生物猥琐男女的出路。千老终于可以为老婆创造一点价值了。。求文献,有链接(包子酬谢)说钱不重要的都是年轻的傻冒从BIOCHEMISTRY到BIOPHYSICS再到BIOENGINEERING学生物最傻逼的就是看谁最能吃苦最能忍发邮件请committee member 写推荐信没回应怎么办?so...job opennings at Incyte中科大校友、硅谷创业家柯民英年早逝 (转载)for primary T cell culture审稿求助( 代谢,糖尿病,炎症,病毒HIV领域)科大内部关于那个非编码RNA的通信稿有人知道AAV2.CMV.PI.eGFP 这个里面PI是代表什么吗? (转载)SAS Programmer Opportunity回上一个坑@truelove27,别找骂了paper help [bz!]请问做定点突变的话,有没有什么高通量的方法可以节省点体力?求文两篇