j*a
2 楼
用size exclusive column (Sephacryl 100, buffer Tris-HCl (pH 8.5) 5% glycerol
)分离 ionic exchange column pools (desired protein 35 kda).所有的蛋白在死体
积同时下来，完全没有分离.请问怎么办？谢谢.
)分离 ionic exchange column pools (desired protein 35 kda).所有的蛋白在死体
积同时下来，完全没有分离.请问怎么办？谢谢.
S*o
3 楼
多读读“天地玄黄，宇宙洪荒。日月盈昃，辰宿列张”这类，劝自己天下之大，要想开
些。
如果还是想不开，就去找他喽
些。
如果还是想不开，就去找他喽
m*z
4 楼
your sample loading volume and column volume? you said all proteins, that
means all proteins including your target protein and the impurities? Do you
have any salt in your running buffer?
glycerol
【在 j*****a 的大作中提到】
: 用size exclusive column (Sephacryl 100, buffer Tris-HCl (pH 8.5) 5% glycerol
: )分离 ionic exchange column pools (desired protein 35 kda).所有的蛋白在死体
: 积同时下来，完全没有分离.请问怎么办？谢谢.
means all proteins including your target protein and the impurities? Do you
have any salt in your running buffer?
glycerol
【在 j*****a 的大作中提到】
: 用size exclusive column (Sephacryl 100, buffer Tris-HCl (pH 8.5) 5% glycerol
: )分离 ionic exchange column pools (desired protein 35 kda).所有的蛋白在死体
: 积同时下来，完全没有分离.请问怎么办？谢谢.
n*0
5 楼
http://mp.weixin.qq.com/s?__biz=MjM5ODI4Mjg2MA==&mid=204098788&
【在 S********o 的大作中提到】
: 多读读“天地玄黄，宇宙洪荒。日月盈昃，辰宿列张”这类，劝自己天下之大，要想开
: 些。
: 如果还是想不开，就去找他喽
【在 S********o 的大作中提到】
: 多读读“天地玄黄，宇宙洪荒。日月盈昃，辰宿列张”这类，劝自己天下之大，要想开
: 些。
: 如果还是想不开，就去找他喽
a*e
6 楼
run a control, such as 溴芬蓝 & dextran blue first.
n*0
7 楼
【开心一刻】
刚才接一电话：喂，您好!
我：你好，哪位? 她：我是保险公司的，请问您开车吗?
我：我不开，司机开。
她：你的车有保险吗?
我：应该有吧，我没问过司机，回头我问问。
她：您坐的车值多少钱?
我：没问司机多少钱，估计有几千万吧。
她：大哥您啥车呀?
我：地铁!
砰，电话挂了。
脾气还挺大，我说错了吗？
刚才接一电话：喂，您好!
我：你好，哪位? 她：我是保险公司的，请问您开车吗?
我：我不开，司机开。
她：你的车有保险吗?
我：应该有吧，我没问过司机，回头我问问。
她：您坐的车值多少钱?
我：没问司机多少钱，估计有几千万吧。
她：大哥您啥车呀?
我：地铁!
砰，电话挂了。
脾气还挺大，我说错了吗？
j*a
8 楼
your sample loading volume: 0.5 mL
column volume 50 mL
you said all proteins, that
means all proteins including your target protein: Yes
and the impurities?
Do you have any salt in your running buffer? no
Thanks
column volume 50 mL
you said all proteins, that
means all proteins including your target protein: Yes
and the impurities?
Do you have any salt in your running buffer? no
Thanks
n*s
9 楼
楼主你想的跟我念的不会是一个人吧？
m*z
10 楼
could be proteins aggregates/precipitates during running due to no salt?
agree with the previous reply that some control/standard may be a good idea
as well
【在 j*****a 的大作中提到】
: your sample loading volume: 0.5 mL
: column volume 50 mL
: you said all proteins, that
: means all proteins including your target protein: Yes
: and the impurities?
: Do you have any salt in your running buffer? no
: Thanks
agree with the previous reply that some control/standard may be a good idea
as well
【在 j*****a 的大作中提到】
: your sample loading volume: 0.5 mL
: column volume 50 mL
: you said all proteins, that
: means all proteins including your target protein: Yes
: and the impurities?
: Do you have any salt in your running buffer? no
: Thanks
c*0
11 楼
哈哈哈
笑了
【在 n******0 的大作中提到】
: http://mp.weixin.qq.com/s?__biz=MjM5ODI4Mjg2MA==&mid=204098788&
笑了
【在 n******0 的大作中提到】
: http://mp.weixin.qq.com/s?__biz=MjM5ODI4Mjg2MA==&mid=204098788&
I*y
12 楼
what sizing column did you use? I guess your proteins of interest have
aggregated without salt or DTT? The aggregated proteins behave like a huge proteins
that you find in the first few fractions.
glycerol
【在 j*****a 的大作中提到】
: 用size exclusive column (Sephacryl 100, buffer Tris-HCl (pH 8.5) 5% glycerol
: )分离 ionic exchange column pools (desired protein 35 kda).所有的蛋白在死体
: 积同时下来，完全没有分离.请问怎么办？谢谢.
aggregated without salt or DTT? The aggregated proteins behave like a huge proteins
that you find in the first few fractions.
glycerol
【在 j*****a 的大作中提到】
: 用size exclusive column (Sephacryl 100, buffer Tris-HCl (pH 8.5) 5% glycerol
: )分离 ionic exchange column pools (desired protein 35 kda).所有的蛋白在死体
: 积同时下来，完全没有分离.请问怎么办？谢谢.
c*0
13 楼
贝贝么？
【在 n*******s 的大作中提到】
: 楼主你想的跟我念的不会是一个人吧？
【在 n*******s 的大作中提到】
: 楼主你想的跟我念的不会是一个人吧？
y*1
14 楼
what's the PI of your protein?
If it is close to 8.5, change the pH
If it is close to 8.5, change the pH
n*s
15 楼
Beibei 是我家老小的小名，I surely miss him...
【在 c***0 的大作中提到】
: 贝贝么？
【在 c***0 的大作中提到】
: 贝贝么？
s*l
16 楼
do a control first to make sure column is fine.
then it could be your protein is too small for this kinda beads, if the
protein is not aggregated.
glycerol
【在 j*****a 的大作中提到】
: 用size exclusive column (Sephacryl 100, buffer Tris-HCl (pH 8.5) 5% glycerol
: )分离 ionic exchange column pools (desired protein 35 kda).所有的蛋白在死体
: 积同时下来，完全没有分离.请问怎么办？谢谢.
then it could be your protein is too small for this kinda beads, if the
protein is not aggregated.
glycerol
【在 j*****a 的大作中提到】
: 用size exclusive column (Sephacryl 100, buffer Tris-HCl (pH 8.5) 5% glycerol
: )分离 ionic exchange column pools (desired protein 35 kda).所有的蛋白在死体
: 积同时下来，完全没有分离.请问怎么办？谢谢.
I*n
17 楼
乡村小学的一个学生迟到，他向老师解释说：“我今天早晨要把一头猪送去配种。”
老师问：“这事你爸爸不能做吗？”
“不行，一定要公猪才行。”
【在 w**2 的大作中提到】
: 谢谢！
老师问：“这事你爸爸不能做吗？”
“不行，一定要公猪才行。”
【在 w**2 的大作中提到】
: 谢谢！
I*n
18 楼
语文课，老师在黑板上写下“软”，然后让大家拼读
男生齐喊：日完---软。
老师说：男生发音不标准请女生补充。
女生齐喊：日完俺---软。
班长纠正说：日五晚---软。
老师不耐烦了，厉声纠正道：正确的拼读应该是---日五晚俺---软
【在 w**2 的大作中提到】
: 谢谢！
男生齐喊：日完---软。
老师说：男生发音不标准请女生补充。
女生齐喊：日完俺---软。
班长纠正说：日五晚---软。
老师不耐烦了，厉声纠正道：正确的拼读应该是---日五晚俺---软
【在 w**2 的大作中提到】
: 谢谢！
n*s
19 楼
呵呵，今晚住Indigo了
w*2
20 楼
谢谢各位！请继续。
c*0
21 楼
一个是阆苑仙葩，一个是精神焕发，若说有奇缘，应是防冷涂的蜡，若说没奇缘，又为
何要莫哈莫哈, 想眼中能有多少泪珠儿，怎禁得正晌午说话，谁也没有家
上海滩《智取虎威山》“哦哟小赤佬侬脸红莫子啦？”“阿拉精神好的不得了啊！”“
鬼才要信你哟，又黄了是怎么回寺你倒寺给我讲讲清楚！”“冬天不要太冷哦，涂的蜡
嘛”
其实小孩子真的不能随便开玩笑。小学二年级的时候，我妈说要把我卖掉，我妈的语气
特别真实。我当真了，上学的时候哭着告诉了我们班长。班长也很着急，放学后帮我叫
了全班同学到我家里，求我妈不要把我卖掉。当一大片孩子跪倒在地的时候，正在打麻
将的我妈彻底惊了……
何要莫哈莫哈, 想眼中能有多少泪珠儿，怎禁得正晌午说话，谁也没有家
上海滩《智取虎威山》“哦哟小赤佬侬脸红莫子啦？”“阿拉精神好的不得了啊！”“
鬼才要信你哟，又黄了是怎么回寺你倒寺给我讲讲清楚！”“冬天不要太冷哦，涂的蜡
嘛”
其实小孩子真的不能随便开玩笑。小学二年级的时候，我妈说要把我卖掉，我妈的语气
特别真实。我当真了，上学的时候哭着告诉了我们班长。班长也很着急，放学后帮我叫
了全班同学到我家里，求我妈不要把我卖掉。当一大片孩子跪倒在地的时候，正在打麻
将的我妈彻底惊了……
I*n
22 楼
你也不说说情况， 你是骨肉分离呢， 还是生死相隔呢，还是情意绵绵呢。。
【在 w**2 的大作中提到】
: 谢谢各位！请继续。
【在 w**2 的大作中提到】
: 谢谢各位！请继续。
w*2
23 楼
最后一个不错。
【在 c***0 的大作中提到】
: 一个是阆苑仙葩，一个是精神焕发，若说有奇缘，应是防冷涂的蜡，若说没奇缘，又为
: 何要莫哈莫哈, 想眼中能有多少泪珠儿，怎禁得正晌午说话，谁也没有家
: 上海滩《智取虎威山》“哦哟小赤佬侬脸红莫子啦？”“阿拉精神好的不得了啊！”“
: 鬼才要信你哟，又黄了是怎么回寺你倒寺给我讲讲清楚！”“冬天不要太冷哦，涂的蜡
: 嘛”
: 其实小孩子真的不能随便开玩笑。小学二年级的时候，我妈说要把我卖掉，我妈的语气
: 特别真实。我当真了，上学的时候哭着告诉了我们班长。班长也很着急，放学后帮我叫
: 了全班同学到我家里，求我妈不要把我卖掉。当一大片孩子跪倒在地的时候，正在打麻
: 将的我妈彻底惊了……
【在 c***0 的大作中提到】
: 一个是阆苑仙葩，一个是精神焕发，若说有奇缘，应是防冷涂的蜡，若说没奇缘，又为
: 何要莫哈莫哈, 想眼中能有多少泪珠儿，怎禁得正晌午说话，谁也没有家
: 上海滩《智取虎威山》“哦哟小赤佬侬脸红莫子啦？”“阿拉精神好的不得了啊！”“
: 鬼才要信你哟，又黄了是怎么回寺你倒寺给我讲讲清楚！”“冬天不要太冷哦，涂的蜡
: 嘛”
: 其实小孩子真的不能随便开玩笑。小学二年级的时候，我妈说要把我卖掉，我妈的语气
: 特别真实。我当真了，上学的时候哭着告诉了我们班长。班长也很着急，放学后帮我叫
: 了全班同学到我家里，求我妈不要把我卖掉。当一大片孩子跪倒在地的时候，正在打麻
: 将的我妈彻底惊了……
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