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Do you save glycerol stocks for BL21(DE3) or Rosetta2(DE3)
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Do you save glycerol stocks for BL21(DE3) or Rosetta2(DE3)# Biology - 生物学
o*e
1
本来是写个求职人士的。
但是那些老实给烙印打工,
给烙印踩在脚下的人士也可以借鉴。
【 以下文字转载自 JobHunting 讨论区 】
发信人: onetiemyshoe (onetiemyshoe), 信区: JobHunting
标 题: IT求职:刷题不如听我二计
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Apr 20 12:03:57 2014, 美东)
1. 把Heart Bleed Bug搞清楚。
从源代码到business impact,
你要能一清二楚而且表达得头头是道。
保证你们面见的大头都扫地相迎。
因为他们正身在噩梦之中,
不在乎有功,只在乎无过。
http://www.inferse.com/14435/heartbleed-bug-handling-security/
学习code quality/security audit.
几个人一起,把openssl 合力audit一次。
特别是用的少的部分, 互相交流,互相present。
最基本的比如: web programming,
mobile programming, framework
有什么 coding standard,
secure coding practice.
有什么 常见的网络安全fail.
私心希望这样大家都可以自己养成好习惯,
而且知道怎样挑某族裔的刺,掌握主动权。
可攻可守。
当然遇到烙印就别来这一套。
烙印最忌讳有人比他们能吹。
装书呆子,老实巴交,苦力怕事
最有机会被烙印放过。
2. 提高EQ
参照烙印的EQ:
http://www.mitbbs.com/clubarticle_t2/ITRelief/31108509.html
先入club, 再阅读:
http://www.mitbbs.com/club_bbsdoc/ITRelief.html
建议老中发动起来帮助老中政客们电话拉票,
学习目标: 聆听, 见机行事, 电话礼貌, 英语, 心理抗rejection, 责任感, 荣
誉心,移位思考。
老中政客们入选,你们以后resume也多一个reference, experience!
请当双赢来认真对待。 你们看烙印支持O8 campaign卖了苦力,就无数O8的
"恩主”出现了, 在技术公司政府狐假虎威。
SVCA征集全美义工Phone Banking:
http://www.mitbbs.com/article_t/CivilSociety/9909.html
Tipsheet by Aijie:
Phone bankings tips by our volunteer, Aijie.
1)打电话前,注意一下他们的性别,年龄,党派,地址,因为有的人家用一个电话,
甚至夫妻互换了电话。这样接通时自己可以有心理准备。称呼Mr.或者Ms.,而不是其
first name, 一方面是正式尊重,另一方面是因为知道姓,比知道名要容易,不会让对
方的第一反应是‘你怎么知道我的名字’。 对DM先不要说PK是共和党,侧重介绍PK做
了什么,尤其是为亚裔,作为我们的一份子为我们发声。
2)对典型的华人的名字,hello后可以直接用中文,尤其是40-50岁的人,一定会中文。
而且一些60岁左右的叔叔阿姨,他们不会英文,不至于开口就把他们吓走。对于不太确
定的名字,可用英文问是否可以讲中文。从对方口音,可以找认同感,比如来自大陆就
介绍自己也是,来自台湾就介绍PK也是,等等。
3) 打电话时间的选择,个人觉得11am-12pm, 最迟不能超过12:30pm,因为忙了一上午
,11开始大家会比较放松,好聊。最晚12半后应该都在吃饭,不好打扰。然后4pm-7pm
,最迟不能超过7:30pm,呵呵,比建议的8pm早了半小时。另外要注意对方下班开车时
间,如果遇到,可以说还是先注意驾车安全,晚些再打。
4)记录自己打电话的时间。如果中午没人接,晚上再打。2次后都没人接,第3次留言
。最多别超过3次,不然对方也会烦的。这一点和建议的也不一样。我用这种办法,找
到了几个第一次没接的,有了直接对话的机会,成功率大些。当然,如果建议还是第一
次就直接留言,我会照做。
5)对于不同的声音,不要马上反对。尊重对方,听他讲,再用事实和数据说话。我和
一位Xu太太聊了半个小时,她有几点不同的意见。(1)她是支持平权法案的,觉得不
能因为当初我们亚裔受益就支持,现在不受益就反对。我听她说完,称赞她关心实事,
为所有族裔利益考虑,有开明的思想,等等。然后再说历史的原因,50年前,为了那些
历史上受歧视压迫受到不公待遇的少数族裔和女性,有了平权AA,照顾他们,是真的为
少数族裔提供机会。而后来,加州的各个族裔在变化,一些有才华的学生却因为族裔而
受到逆向歧视不能入学。所以20年前才取消了平权,所有学生都用成绩来竞争,而不是
族裔。20年后,现在的SCA5不是平权,西裔人口已经接近40%,如果通过,就是为人数
占多数的族裔服务了。(2)Xu太又说不赞成华人只知道学习,就成绩好。我又先赞她
考虑周全,不能让孩子死读书。然后指出大学录取学生并不是只看GPA,学生的申请要
全方位发展,各项优秀,才能被看中。并用林书豪Jeremy Lin的例子来说。她很开心,
很喜欢林那样的。(3)Xu太说不喜欢竞选的人到了社区总是强调自己是亚裔,会为亚
裔争取利益。不能说对亚裔好,而是应该是对美国的发展好。我还是赞她有开明的思想
,民主的意识。然后再说,其实其他族裔的竞选者也都是打自己的社区这样说的。比如
奥巴马当年竞选,自己族裔的都去投票。首先要让自己的族裔支持自己,才有可能获得
更大的支持啊。后来Xu太也说明白为什么西裔的竞选也要这样,不管怎样,还是要支持
PK的。
6) 留言。因为没有反馈,我不知道效果如果。我录了一下几段留言的时长。范例用时
1:45-2min。我很喜欢Lei的简短版,约1min.我自己也有个简短版,和Lei的非常相似
,约1min.增加了一点,就是对于名字像华人的,我在说完PK后,用中文再说一遍他的
名字。
谢谢大家!一起努力!
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S*4
2
实不相瞒,到现在为止我都不会玩扑克牌,什么斗地主、升级等等,对我来说比认识天
上的星座还难。但是,我可以拍拍胸脯相当自信地说,我会玩7王523,而且玩到相当的
境界。
7王523玩法是这样的,在一副扑克牌中,7最大,接下来是王523,除了这五张牌,剩下
的没有威力,但如果你手上有两张一样的对对,三张一样叫做炸,四张一样叫做轰,那
么这五张牌是敌不过炸轰的威力。5,10,k,都算作分。好,开始打牌,两人三人都可
以,一人轮流接牌,直到手上满5张为止。彼此不知道手里有什么样的牌,只能靠自己
的智慧了。
心理素质相当重要,不仅要压得住气,还要揣测对方手里会有什么样的武器。不要贪图
5分,要把好牌用在刀刃上,如果对方攒了好久三张k,以为可以威震四方,这时候你拿
出一个轰,OMG,对方的脸一下子就绿了。
有一年暑假,我,小丹,小翔三人玩7王523上瘾了,一吃过饭就聚在一起,后来甚至还
赌钱,输一次给赢的一方一角钱,那时候,身上全是一角硬币,以充赌资。有时候,看
到自己臭牌即将走上毁灭的时候,心里安慰,哼,不就是一角钱嘛。
现在还想再玩一把,小伙伴们已经各在天涯了。
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l*u
3
【 以下文字转载自 Texas 讨论区 】
发信人: lilumilu (lilumilu), 信区: Texas
标 题: 请教apple store买iphone 4s
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Dec 1 01:28:24 2011, 美东)
想买3个4s回国,apple store限制每人2个,我下两次单可以吗?apple有啥方法限制不
,不行我就别人代我买一个了。
另外,带3个过关会不会被查啊。。。。。
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H*g
4
Sorry only could type in English using lab computers
I a trying to express protein in E.coli and am wondering if I should save
glycerol stocks for transformed
BL21(DE3) or Rosetta2(DE3) strains for future or should we always start from
a new transformant?
How often does mutation occur in these strains?
Thanks a lot!
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i*1
5
一般带3个过关不会被查,除非你的运气特别差。。。

【在 l******u 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 Texas 讨论区 】
: 发信人: lilumilu (lilumilu), 信区: Texas
: 标 题: 请教apple store买iphone 4s
: 发信站: BBS 未名空间站 (Thu Dec 1 01:28:24 2011, 美东)
: 想买3个4s回国,apple store限制每人2个,我下两次单可以吗?apple有啥方法限制不
: ,不行我就别人代我买一个了。
: 另外,带3个过关会不会被查啊。。。。。

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n*w
6
I do glycerol stocks and expressed my protein for couples of times and at
this point, no mutations found. And honestly I do not know the answer...
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l*u
7
谢谢,我放心点了

【在 i***1 的大作中提到】
: 一般带3个过关不会被查,除非你的运气特别差。。。
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T*t
8
Of course make glycerol stocks for those strains.
It's usually recommended to renew those stocks every 6 months. But I've used
frozen stocks of several years old and still got satisfactory expression. I
guess it may vary from case to case, though.
I would do small scale expression test each time before a large scale
expression culture if I'm worried about the quality of the frozen stock.
Just use a 5-ml culture and induce as how you would with a 1-L or larger
culture (scale down the amount of IPTG, of course). Then lyse the cells (
before and after induction) and run lysate on a SDS-PAGE gel to check
expression level.
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n*w
9
Actually many protocols say high concentrations of IPTG can be used at
screening stage, up to 1mM.

used
I

【在 T**********t 的大作中提到】
: Of course make glycerol stocks for those strains.
: It's usually recommended to renew those stocks every 6 months. But I've used
: frozen stocks of several years old and still got satisfactory expression. I
: guess it may vary from case to case, though.
: I would do small scale expression test each time before a large scale
: expression culture if I'm worried about the quality of the frozen stock.
: Just use a 5-ml culture and induce as how you would with a 1-L or larger
: culture (scale down the amount of IPTG, of course). Then lyse the cells (
: before and after induction) and run lysate on a SDS-PAGE gel to check
: expression level.

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T*t
10
I meant the amount of IPTG, not the concentration of IPTG... If you use much
less volume of culture (5ml vs. 1 L), the amount of IPTG needs to be scaled
down accordingly.

【在 n***w 的大作中提到】
: Actually many protocols say high concentrations of IPTG can be used at
: screening stage, up to 1mM.
:
: used
: I

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s*n
11
我都是每一次都重新做transformation,平板4度保存,大概可以用2-4周。
大部分Novagen的protein expression strains都是recA+,质粒不稳定,虽然保存在-
80C,接种多次以后难免会有影响。我知道至少有3个negative的例子了。
如果你坚持要这么做,有一个相对low risk的方法,就是用含有葡萄糖的培养基培养,
分装成许多小管,0.5-1 ml (或更大体积),-80C保存,每次拿一管直接培养做表达
,不要多次冻融。

from

【在 H*g 的大作中提到】
: Sorry only could type in English using lab computers
: I a trying to express protein in E.coli and am wondering if I should save
: glycerol stocks for transformed
: BL21(DE3) or Rosetta2(DE3) strains for future or should we always start from
: a new transformant?
: How often does mutation occur in these strains?
: Thanks a lot!

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w*t
12
接种不用反复冻融吧,我都是n从-80拿出来就用tips挑一点冰渣划在板上。动作快点就
好了

【在 s********n 的大作中提到】
: 我都是每一次都重新做transformation,平板4度保存,大概可以用2-4周。
: 大部分Novagen的protein expression strains都是recA+,质粒不稳定,虽然保存在-
: 80C,接种多次以后难免会有影响。我知道至少有3个negative的例子了。
: 如果你坚持要这么做,有一个相对low risk的方法,就是用含有葡萄糖的培养基培养,
: 分装成许多小管,0.5-1 ml (或更大体积),-80C保存,每次拿一管直接培养做表达
: ,不要多次冻融。
:
: from

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s*n
13
到是没有溶解,还是凝固的,但温度还是升高了不少。Anyway,我是由于周围有不少
negative的例子,所以不这么做的,并不是说所有都会出问题。

【在 w**t 的大作中提到】
: 接种不用反复冻融吧,我都是n从-80拿出来就用tips挑一点冰渣划在板上。动作快点就
: 好了

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H*g
14
For the negative examples that you mentioned, since the transformed E.coli
could survive antibiotic stress, so
the plasmids are still there. So the researchers discovered mutation(s) in
the coding region of protein
interested in those plasmid(s)?

【在 s********n 的大作中提到】
: 到是没有溶解,还是凝固的,但温度还是升高了不少。Anyway,我是由于周围有不少
: negative的例子,所以不这么做的,并不是说所有都会出问题。

avatar
s*n
15
我所说的negative不是指质粒丢失了,一个例子是质粒变大了,估计是重组了,蛋白表
达量下降很多;另外两个例子都是蛋白不表达了,估计他们都没有测序,只是重新转化
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y*1
16
哈哈!! 1mM means 1mM final concentration in the culture....

much
scaled

【在 T**********t 的大作中提到】
: I meant the amount of IPTG, not the concentration of IPTG... If you use much
: less volume of culture (5ml vs. 1 L), the amount of IPTG needs to be scaled
: down accordingly.

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