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快疯了～~Luciferase assay
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快疯了～~Luciferase assay# Biology - 生物学
L*O
1 楼
我用HEK293T细胞，FIREFLY读数大概是２００００００，RENILLA读数大概是4００００
０。
但是我必须用osteoblast做实验。。FIREFLY读数大概是６０，RENILLA读数大概是２５
０。。
一开始怀疑是transfection的问题. 我用的是Lipofectamine。转染GFP以后，镜下观察
转染率大概50％。。
不知道该怎么改进了～～
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V*n
2 楼
感觉还是转染率的问题。镜下观察不准，一般会高估转染效率。可以转GFP过后，把细
胞弄下来跑flow。另，GFP一般是最容易转的，如果GFP转出来效率５０％，其他东西转的效率低个百分之１０－２０都很正常。
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m*7
3 楼
try nucleofection to improve transfection efficiency
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a*n
4 楼
Transfection efficiency可能是问题，用你最终需要用的cell line测试各种
transfection reagent，比如Fugene HD
我问过公司里专门做transfection的人，说每个细胞系合适的reagent不同。
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L*O
5 楼
Do you mean amaxa? i tried~~~ but still bad~~~~~ :(((((

【在 m*********7 的大作中提到】
: try nucleofection to improve transfection efficiency
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L*O
6 楼
I tried 3 kits from amaxa nucleofection and lipofectamine.... But they are
all crap~~~~ :(((

【在 a********n 的大作中提到】
: Transfection efficiency可能是问题，用你最终需要用的cell line测试各种
: transfection reagent，比如Fugene HD
: 我问过公司里专门做transfection的人，说每个细胞系合适的reagent不同。
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k*o
7 楼

are
amaxa的GFP control转染效率如何？按理说应该很高的。另外试过不同的program吗？

【在 L**********O 的大作中提到】
: I tried 3 kits from amaxa nucleofection and lipofectamine.... But they are
: all crap~~~~ :(((
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L*O
8 楼
about 50-80%.. I tried three different programs...

【在 k****o 的大作中提到】
:
: are
: amaxa的GFP control转染效率如何？按理说应该很高的。另外试过不同的program吗？
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k*o
9 楼
按我的经验GFP的效率应该是大于80％。你的培养基里含有抗生素或者其它什么添加剂
吗？有时候那些会降低转染效率。
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