b*e
2 楼
PS：您的每一个点击，每一张推荐，每一个收藏，每一条书评都是对“冰临神下”的支持
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殷不沉没能化鱼，他越是努力，越达不到上次海浪来袭时的平静状态，体内的妖术
被禁锢得越严重。
黑凰也变得慌乱了，“快用化鱼术！只要带我游出海浪禁锢就行。”
“你为什么不从海底走过去？”殷不沉喊道，极不习惯这种没有强者指明方向的处
境，“其他人呢？杨创是星落道士，应该没事吧。”
“笨蛋，杨创没出现那就是死了，星落道士有什么了不起？这种时候比的不是法术
，是体质强弱。”黑凰恼怒地说，虽然往南数里就能脱离禁锢，搁在平时只是极短的一
段距离，对现在的她的来说却是不可逾越的鸿沟，刚才她只在海下走了不到半里路，就
已经疲惫不堪。
“别再叫我笨蛋，我能活到现在，就已经证明……”
巨浪临近了，没有停下的迹象，殷不沉仍然没有化鱼，但他用行动证明了自己并非
笨蛋，也有灵机一闪的时候。
殷不沉一跃而至，死死抱住黑凰的腰，既然小岛上只有他们两个还活着，既然黑凰
是体质强健的大妖，曾经在巨浪的袭击中活下来，那她就有资格当他的靠山。
在殷不沉看来，这是对黑凰的赞美。
巨浪又一次吞没小岛，海水如铁锤一般狠狠砸来，殷不沉全身力气都用在双臂上，
闭上眼睛屏住呼吸，做好了死也不松手的准备。
他以为会随波逐浪一阵子，然后再从海底走上鸟来，结果却出乎意料，虽然什么也
看不见，但他能明显地感觉到，黑凰站在原地没动，像是长在礁石上。
不愧是真正的大妖，殷不沉暗自赞道。抱得更紧了，心中做出决定，在有更强者出
现之前，黑凰就是他的主妖，骂几声“笨蛋”有什么了不起？就算打几下也没问题。
海水消退，轰鸣止息，殷不沉小心地睁开双眼，发现他和黑凰仍然站在小岛上，全
身虽然再次湿透，却没有任何损伤。
“哈。黑凰，想不到你这么厉害！真是……我得道歉，从前我一直小瞧你了，想想
也是，你可是有资格称王的大妖……”殷不沉的吹捧之辞顺嘴就来，围着黑凰转圈，将
她身上沾的水草轻轻摘下来。
黑凰突然伸手握住殷不沉的手腕，冷冷地看着他。
殷不沉觉得黑凰的手比铁箍还要坚硬，身子立刻矮下去一截。谄笑道：“对不起对
不起，瞧我的蠢样，居然忘了你是天下无双的最美女妖，我居然……我有罪。我混蛋，
我还是笨蛋……”
黑凰开口了，却不是女妖的声音，“杨清音呢？”
殷不沉惊得差点跳起来。“安象形！不对，老君？”
“黑凰”没有回答，神情严肃而警惕。与女妖的样子截然不同。
殷不沉半蹲着，抬头观察女妖的面容，伸出另一只手想要触碰一下，马上又缩冇了
回来，“您真是……老君，为什么我感觉不到呢？”
“水晶眼是我造出的，当然随我的心意，我不控制它们，你自然感觉不到。”
女妖的眼睛里闪过一道光，殷不沉立刻全身发软，不由自主跪下去，两只眼睛又变
得泪水朦胧了，“老君，您真是老君，恭喜老君又收得新魂，我当时不知道这是老君的
计划，要不然给我天大的胆子我也不敢……”
“将杨创介绍给杨清音，那本来就是我让你做的事情。奇怪，慕行秋怎么会怀疑到
我？到底哪里露出了破绽？”
安象形已经成为众魂之一，声音虽然还是从前的声音，所谓的“我”却已不再是安
象形，而是异史君。
“黑凰呢？”殷不沉小声问，异史君已经收回对水晶眼的控制，他虽然还是害怕，
却是比较正常的害怕。
“我们共用一具身体，她本事太弱，只好由我来操控身体。”异史君的目光缓缓扫
视，右手仍然牢牢抓住殷不沉的手腕，“分身无力施法，你的身体太弱，我只好借住在
黑凰体内，杨创的身体更好一些，可道士的身体不好夺，他能被我说服，却不会……”
异史君闭嘴，目光紧盯着数十步以外的一处浅滩。
小岛微呈弧形，浅滩就在弧内正中间，朝南，离原来搭帐篷的地方不远。
“杨创……死了吗？”。殷不沉怯怯地问，一旦水晶眼不受操控，他发现自己对异
史君也不是特别敬畏忠诚，跟害怕其他强者没有太大区别。他不敢继续想下去，怕被异
史君发现，结果这个念头越来越强烈，甚至生出一股冲动，想冲着异史君的耳朵大叫一
声。
“我没感觉到他的存在，那就是死了。”异史君冷淡地说，移开目光，继续扫视。
殷不沉终究没敢叫出声，而是指着北方的天边，“巨浪又要来了，老君既然能施展
妖术，是不是可以……”
“逃走吗？除非拿到洗剑池水、杀死杨清音，我绝不会离开。”
殷不沉觉得自己的手腕快要断了，颤声道：“老君曾经有许多机会夺走洗剑池水，
为何非要等到现在？而且灵王……灵王也没有得罪过您吧。”
“会自己动脑子的妖仆果然要不得。”异史君语气越发冰冷，“我为异史君带来新
记忆，这段新记忆讲述了洗剑池水的种种妙用，包括如何熄灭远荒半岛的火。所以我决
定两种方法都试一下，于是分裂魂魄，一魂夺水，一魂按原计划去止步邦，利用慕行秋
开凿火路。我要杀死杨清音，因为她是道士，这就是她的罪。”
殷不沉侍奉异史君多年，早已习惯他变化莫测的性格，可是对异史君众魂之间的关
系一直没有弄明白，只能嗯嗯地应对。
从在拓山杀死同伴并失去道士形体的那一刻起，安象形就开始憎恨道士，并且将这
种憎恨带给了异史君。
“杨清音，我知道你就在岛上，躲在慕行秋给你留下的禁制里。”异史君抬高声音
，“禁制能挡住几次海浪冲击？你不可能一直躲下去，交出洗剑池水。我给你一个痛快
，你不是宁愿保留跟慕行秋的情劫吗？正好当一对……”
“老君快看，那是……”殷不沉指着岸边。
老君魔掌被海水冲上了小岛。
在禁锢之内，异史君的实力也大受影响，但他的妖术极多，总有几样能用上，伸手
召来魔掌，仔细打量。
“我造出许多妖丹与宝物，到处散布，就是为了有朝一日能控制拥有这些东西的人
类与妖族。可是慕行秋连这也看破了，他到底……难道是舍身王透露了什么秘密？不可
能，他只是一只愚蠢的半妖老王，能知道什么？”
“我愿意被老君控制。”殷不沉讨好地说，两只眼睛眨个不停。
异史君结束自言自语，再次抬高声音对看不见的杨清音说：“你想知道慕行秋的下
场吗？他本来不是我的目标，我要的是左流英那样的注神道士，可是太难了，我花了许
多年也没有取得进展。”
“我终于等到了左流英退出道统。可他还是那么棘手，我反而成为他的囚徒，然后
他又吐丹了，真是……世事无常。拥有几千年记忆的我也有预料不到的事情，没了注神
道士左流英，却来了一个念心科弟子慕行秋。”
“慕行秋比较好骗冇，但他太弱。可是谁能想到他会这么快又变强，竟然能与注神
道士较量一下呢？这是奇迹，不是他的奇迹。是我的奇迹，我找了这么久，终于得到一
名勉强合格的道士。”
“我原计划用太阴之火推开远荒祖火，慕行秋的身体就是火源！为了保住这些记忆
，我花了不少心思。杨清音，你了解太阴之火，想象一下，用一名强大道士的血液作为
火源，加上我多年来积攒的宝物，这团太阴之火会有多么强大！比不上万第山，可是足
够我用了。”
“我要感谢你，你在冰城用太阴之火挡住了潜龙之火，证明我的计划切实可行。一
切即将结束，道统也好，魔族也罢，都将接受应得的惩罚。慕行秋已经去了止步邦，你
不想去提醒他吗？凭着洗剑池水，没准你也能穿越巨浪。”
“或者我还能给你更好的条件，我可以带你去止步邦，用洗剑池水熄灭远荒祖火，
这样的话慕行秋就不用献祭了。或许，我还会饶你们一命，我是众魂之妖，当我与其他
魂魄融为一体时，对道士的恨意大概不会像现在这么强烈。”
巨浪涌来了，间隔似乎更短了一些，殷不沉吓得跪在地上，手腕却仍然被异史君掌
握着。
“出来吧，杨清音，慕行秋猜到了一点点真相，那又能怎样？除我以外的其它魂魄
，早已提前赶到止步邦，在那里与本魂结合，你知道什么是本魂吗？拥有本魂的我将恢
复全部实力，就算是注神境界的左流英也不是我的对手，慕行秋更不是！弱者就是弱者
，知道再多真相也还是弱者，你们只能接受事实，永远无力反抗！”
砰的一声，小岛中部的浅滩处发出一声巨响，那里不再一无所有，岸边站着一群人
，洪福天、欧阳槊、倒在地上的刘鼎，还有满面怒容的杨清音和站在她肩上同样愤怒的
秃子。
异史君微微一笑，他知道这只是显现，禁制还在那里，必须打破之后才能收拾里面
的人。
殷不沉的两只眼珠飞出眼眶，紧接着他的全身骨肉血筋都在收缩，他明白了，异史
君一直没有控制他，是要用他当祭品施展妖术，意志清醒的妖献祭效果更好。
“放开我！”殷不沉痛苦地大叫，意志清醒的妖也不愿就这么死去，张嘴咬向异史
君的小腿。
又一道巨浪奔涌而至，更高更厚。
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殷不沉没能化鱼，他越是努力，越达不到上次海浪来袭时的平静状态，体内的妖术
被禁锢得越严重。
黑凰也变得慌乱了，“快用化鱼术！只要带我游出海浪禁锢就行。”
“你为什么不从海底走过去？”殷不沉喊道，极不习惯这种没有强者指明方向的处
境，“其他人呢？杨创是星落道士，应该没事吧。”
“笨蛋，杨创没出现那就是死了，星落道士有什么了不起？这种时候比的不是法术
，是体质强弱。”黑凰恼怒地说，虽然往南数里就能脱离禁锢，搁在平时只是极短的一
段距离，对现在的她的来说却是不可逾越的鸿沟，刚才她只在海下走了不到半里路，就
已经疲惫不堪。
“别再叫我笨蛋，我能活到现在，就已经证明……”
巨浪临近了，没有停下的迹象，殷不沉仍然没有化鱼，但他用行动证明了自己并非
笨蛋，也有灵机一闪的时候。
殷不沉一跃而至，死死抱住黑凰的腰，既然小岛上只有他们两个还活着，既然黑凰
是体质强健的大妖，曾经在巨浪的袭击中活下来，那她就有资格当他的靠山。
在殷不沉看来，这是对黑凰的赞美。
巨浪又一次吞没小岛，海水如铁锤一般狠狠砸来，殷不沉全身力气都用在双臂上，
闭上眼睛屏住呼吸，做好了死也不松手的准备。
他以为会随波逐浪一阵子，然后再从海底走上鸟来，结果却出乎意料，虽然什么也
看不见，但他能明显地感觉到，黑凰站在原地没动，像是长在礁石上。
不愧是真正的大妖，殷不沉暗自赞道。抱得更紧了，心中做出决定，在有更强者出
现之前，黑凰就是他的主妖，骂几声“笨蛋”有什么了不起？就算打几下也没问题。
海水消退，轰鸣止息，殷不沉小心地睁开双眼，发现他和黑凰仍然站在小岛上，全
身虽然再次湿透，却没有任何损伤。
“哈。黑凰，想不到你这么厉害！真是……我得道歉，从前我一直小瞧你了，想想
也是，你可是有资格称王的大妖……”殷不沉的吹捧之辞顺嘴就来，围着黑凰转圈，将
她身上沾的水草轻轻摘下来。
黑凰突然伸手握住殷不沉的手腕，冷冷地看着他。
殷不沉觉得黑凰的手比铁箍还要坚硬，身子立刻矮下去一截。谄笑道：“对不起对
不起，瞧我的蠢样，居然忘了你是天下无双的最美女妖，我居然……我有罪。我混蛋，
我还是笨蛋……”
黑凰开口了，却不是女妖的声音，“杨清音呢？”
殷不沉惊得差点跳起来。“安象形！不对，老君？”
“黑凰”没有回答，神情严肃而警惕。与女妖的样子截然不同。
殷不沉半蹲着，抬头观察女妖的面容，伸出另一只手想要触碰一下，马上又缩冇了
回来，“您真是……老君，为什么我感觉不到呢？”
“水晶眼是我造出的，当然随我的心意，我不控制它们，你自然感觉不到。”
女妖的眼睛里闪过一道光，殷不沉立刻全身发软，不由自主跪下去，两只眼睛又变
得泪水朦胧了，“老君，您真是老君，恭喜老君又收得新魂，我当时不知道这是老君的
计划，要不然给我天大的胆子我也不敢……”
“将杨创介绍给杨清音，那本来就是我让你做的事情。奇怪，慕行秋怎么会怀疑到
我？到底哪里露出了破绽？”
安象形已经成为众魂之一，声音虽然还是从前的声音，所谓的“我”却已不再是安
象形，而是异史君。
“黑凰呢？”殷不沉小声问，异史君已经收回对水晶眼的控制，他虽然还是害怕，
却是比较正常的害怕。
“我们共用一具身体，她本事太弱，只好由我来操控身体。”异史君的目光缓缓扫
视，右手仍然牢牢抓住殷不沉的手腕，“分身无力施法，你的身体太弱，我只好借住在
黑凰体内，杨创的身体更好一些，可道士的身体不好夺，他能被我说服，却不会……”
异史君闭嘴，目光紧盯着数十步以外的一处浅滩。
小岛微呈弧形，浅滩就在弧内正中间，朝南，离原来搭帐篷的地方不远。
“杨创……死了吗？”。殷不沉怯怯地问，一旦水晶眼不受操控，他发现自己对异
史君也不是特别敬畏忠诚，跟害怕其他强者没有太大区别。他不敢继续想下去，怕被异
史君发现，结果这个念头越来越强烈，甚至生出一股冲动，想冲着异史君的耳朵大叫一
声。
“我没感觉到他的存在，那就是死了。”异史君冷淡地说，移开目光，继续扫视。
殷不沉终究没敢叫出声，而是指着北方的天边，“巨浪又要来了，老君既然能施展
妖术，是不是可以……”
“逃走吗？除非拿到洗剑池水、杀死杨清音，我绝不会离开。”
殷不沉觉得自己的手腕快要断了，颤声道：“老君曾经有许多机会夺走洗剑池水，
为何非要等到现在？而且灵王……灵王也没有得罪过您吧。”
“会自己动脑子的妖仆果然要不得。”异史君语气越发冰冷，“我为异史君带来新
记忆，这段新记忆讲述了洗剑池水的种种妙用，包括如何熄灭远荒半岛的火。所以我决
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开凿火路。我要杀死杨清音，因为她是道士，这就是她的罪。”
殷不沉侍奉异史君多年，早已习惯他变化莫测的性格，可是对异史君众魂之间的关
系一直没有弄明白，只能嗯嗯地应对。
从在拓山杀死同伴并失去道士形体的那一刻起，安象形就开始憎恨道士，并且将这
种憎恨带给了异史君。
“杨清音，我知道你就在岛上，躲在慕行秋给你留下的禁制里。”异史君抬高声音
，“禁制能挡住几次海浪冲击？你不可能一直躲下去，交出洗剑池水。我给你一个痛快
，你不是宁愿保留跟慕行秋的情劫吗？正好当一对……”
“老君快看，那是……”殷不沉指着岸边。
老君魔掌被海水冲上了小岛。
在禁锢之内，异史君的实力也大受影响，但他的妖术极多，总有几样能用上，伸手
召来魔掌，仔细打量。
“我造出许多妖丹与宝物，到处散布，就是为了有朝一日能控制拥有这些东西的人
类与妖族。可是慕行秋连这也看破了，他到底……难道是舍身王透露了什么秘密？不可
能，他只是一只愚蠢的半妖老王，能知道什么？”
“我愿意被老君控制。”殷不沉讨好地说，两只眼睛眨个不停。
异史君结束自言自语，再次抬高声音对看不见的杨清音说：“你想知道慕行秋的下
场吗？他本来不是我的目标，我要的是左流英那样的注神道士，可是太难了，我花了许
多年也没有取得进展。”
“我终于等到了左流英退出道统。可他还是那么棘手，我反而成为他的囚徒，然后
他又吐丹了，真是……世事无常。拥有几千年记忆的我也有预料不到的事情，没了注神
道士左流英，却来了一个念心科弟子慕行秋。”
“慕行秋比较好骗冇，但他太弱。可是谁能想到他会这么快又变强，竟然能与注神
道士较量一下呢？这是奇迹，不是他的奇迹。是我的奇迹，我找了这么久，终于得到一
名勉强合格的道士。”
“我原计划用太阴之火推开远荒祖火，慕行秋的身体就是火源！为了保住这些记忆
，我花了不少心思。杨清音，你了解太阴之火，想象一下，用一名强大道士的血液作为
火源，加上我多年来积攒的宝物，这团太阴之火会有多么强大！比不上万第山，可是足
够我用了。”
“我要感谢你，你在冰城用太阴之火挡住了潜龙之火，证明我的计划切实可行。一
切即将结束，道统也好，魔族也罢，都将接受应得的惩罚。慕行秋已经去了止步邦，你
不想去提醒他吗？凭着洗剑池水，没准你也能穿越巨浪。”
“或者我还能给你更好的条件，我可以带你去止步邦，用洗剑池水熄灭远荒祖火，
这样的话慕行秋就不用献祭了。或许，我还会饶你们一命，我是众魂之妖，当我与其他
魂魄融为一体时，对道士的恨意大概不会像现在这么强烈。”
巨浪涌来了，间隔似乎更短了一些，殷不沉吓得跪在地上，手腕却仍然被异史君掌
握着。
“出来吧，杨清音，慕行秋猜到了一点点真相，那又能怎样？除我以外的其它魂魄
，早已提前赶到止步邦，在那里与本魂结合，你知道什么是本魂吗？拥有本魂的我将恢
复全部实力，就算是注神境界的左流英也不是我的对手，慕行秋更不是！弱者就是弱者
，知道再多真相也还是弱者，你们只能接受事实，永远无力反抗！”
砰的一声，小岛中部的浅滩处发出一声巨响，那里不再一无所有，岸边站着一群人
，洪福天、欧阳槊、倒在地上的刘鼎，还有满面怒容的杨清音和站在她肩上同样愤怒的
秃子。
异史君微微一笑，他知道这只是显现，禁制还在那里，必须打破之后才能收拾里面
的人。
殷不沉的两只眼珠飞出眼眶，紧接着他的全身骨肉血筋都在收缩，他明白了，异史
君一直没有控制他，是要用他当祭品施展妖术，意志清醒的妖献祭效果更好。
“放开我！”殷不沉痛苦地大叫，意志清醒的妖也不愿就这么死去，张嘴咬向异史
君的小腿。
又一道巨浪奔涌而至，更高更厚。
s*y
3 楼
基因大小 2.7Kb, 蛋白质大小约为130KD，IPTG诱导3h，SDS-PAGE胶中大部分蛋白集中
在60KD附
近，目标蛋白似乎有，但是相对于同期的GST实在很少。
目前猜测是因为蛋白太大，大部分E.coli未转录完全。
本人大四，在做毕设。。没有什么经验，想请教下有没有其他的可能原因，还有，该怎
么改善下！
在60KD附
近，目标蛋白似乎有，但是相对于同期的GST实在很少。
目前猜测是因为蛋白太大，大部分E.coli未转录完全。
本人大四，在做毕设。。没有什么经验，想请教下有没有其他的可能原因，还有，该怎
么改善下！
x*g
4 楼
原来你看的是广告。
I*y
5 楼
我很怀疑60KD附近的那个蛋白带是heatshock protein
【在 s**********y 的大作中提到】
: 基因大小 2.7Kb, 蛋白质大小约为130KD，IPTG诱导3h，SDS-PAGE胶中大部分蛋白集中
: 在60KD附
: 近，目标蛋白似乎有，但是相对于同期的GST实在很少。
: 目前猜测是因为蛋白太大，大部分E.coli未转录完全。
: 本人大四，在做毕设。。没有什么经验，想请教下有没有其他的可能原因，还有，该怎
: 么改善下！
【在 s**********y 的大作中提到】
: 基因大小 2.7Kb, 蛋白质大小约为130KD，IPTG诱导3h，SDS-PAGE胶中大部分蛋白集中
: 在60KD附
: 近，目标蛋白似乎有，但是相对于同期的GST实在很少。
: 目前猜测是因为蛋白太大，大部分E.coli未转录完全。
: 本人大四，在做毕设。。没有什么经验，想请教下有没有其他的可能原因，还有，该怎
: 么改善下！
i*q
6 楼
看了几集就看不下去，背景音乐太响，对话都听不清。
n*w
7 楼
I don't think it's incomplete translation.
Have you run a Western blot to confirm that?
You sure your sequence is 100% right?
Any severe codon bias?
Bacterial strain? Protease deficient?
Have you run a Western blot to confirm that?
You sure your sequence is 100% right?
Any severe codon bias?
Bacterial strain? Protease deficient?
s*y
8 楼
暂时还没有做WB，但是测序结果显示是100%正确的，用的是BL21工程菌，没有突变～
还有，为什么肯定不是转录未完全？
【在 n***w 的大作中提到】
: I don't think it's incomplete translation.
: Have you run a Western blot to confirm that?
: You sure your sequence is 100% right?
: Any severe codon bias?
: Bacterial strain? Protease deficient?
p*y
9 楼
possible GroEL
z*g
10 楼
almost like mission impossible for any protein with size >100KD in E. coli.
forget about it.
【在 s**********y 的大作中提到】
: 基因大小 2.7Kb, 蛋白质大小约为130KD，IPTG诱导3h，SDS-PAGE胶中大部分蛋白集中
: 在60KD附
: 近，目标蛋白似乎有，但是相对于同期的GST实在很少。
: 目前猜测是因为蛋白太大，大部分E.coli未转录完全。
: 本人大四，在做毕设。。没有什么经验，想请教下有没有其他的可能原因，还有，该怎
: 么改善下！
forget about it.
【在 s**********y 的大作中提到】
: 基因大小 2.7Kb, 蛋白质大小约为130KD，IPTG诱导3h，SDS-PAGE胶中大部分蛋白集中
: 在60KD附
: 近，目标蛋白似乎有，但是相对于同期的GST实在很少。
: 目前猜测是因为蛋白太大，大部分E.coli未转录完全。
: 本人大四，在做毕设。。没有什么经验，想请教下有没有其他的可能原因，还有，该怎
: 么改善下！
e*s
11 楼
说实话，有点惊讶，很多到这里问关于蛋白表达的人都没有先做一下WB。
WB一做，你这个什么转录完不完全，蛋白有否表达的答案就都有了。
不能指望Overexpress老能让你在考染上看到明显的条带，特别是一个130KD的蛋白。你
要是能在Sup
里用Western检测到表达就很不错了。
【在 s**********y 的大作中提到】
:
: 暂时还没有做WB，但是测序结果显示是100%正确的，用的是BL21工程菌，没有突变～
: 还有，为什么肯定不是转录未完全？
WB一做，你这个什么转录完不完全，蛋白有否表达的答案就都有了。
不能指望Overexpress老能让你在考染上看到明显的条带，特别是一个130KD的蛋白。你
要是能在Sup
里用Western检测到表达就很不错了。
【在 s**********y 的大作中提到】
:
: 暂时还没有做WB，但是测序结果显示是100%正确的，用的是BL21工程菌，没有突变～
: 还有，为什么肯定不是转录未完全？
n*u
12 楼
agree...
coli.
【在 z****g 的大作中提到】
: almost like mission impossible for any protein with size >100KD in E. coli.
: forget about it.
coli.
【在 z****g 的大作中提到】
: almost like mission impossible for any protein with size >100KD in E. coli.
: forget about it.
b*n
13 楼
I think so
【在 p****y 的大作中提到】
: possible GroEL
【在 p****y 的大作中提到】
: possible GroEL
n*w
14 楼
so true.
my fusion protein is 116kDa. 2 hours is enough for the expression although
most of it are in inclusion body.
【在 e****s 的大作中提到】
: 说实话，有点惊讶，很多到这里问关于蛋白表达的人都没有先做一下WB。
: WB一做，你这个什么转录完不完全，蛋白有否表达的答案就都有了。
: 不能指望Overexpress老能让你在考染上看到明显的条带，特别是一个130KD的蛋白。你
: 要是能在Sup
: 里用Western检测到表达就很不错了。
my fusion protein is 116kDa. 2 hours is enough for the expression although
most of it are in inclusion body.
【在 e****s 的大作中提到】
: 说实话，有点惊讶，很多到这里问关于蛋白表达的人都没有先做一下WB。
: WB一做，你这个什么转录完不完全，蛋白有否表达的答案就都有了。
: 不能指望Overexpress老能让你在考染上看到明显的条带，特别是一个130KD的蛋白。你
: 要是能在Sup
: 里用Western检测到表达就很不错了。
t*2
15 楼
蛋白降解了吧，有gst的带没，低温试试，上清里的蛋白会显著增加，还有0.5%的乙醇
会增加上清的蛋白
会增加上清的蛋白
Z*5
16 楼
回收一下条带，打个最简单的质谱就知道了。
s*e
17 楼
try 16 degree, overnight
g*r
18 楼
you menan E.coli can not epress protein> 100 Kda?
that is not true
lots of examples
.
【在 z****g 的大作中提到】
: almost like mission impossible for any protein with size >100KD in E. coli.
: forget about it.
that is not true
lots of examples
.
【在 z****g 的大作中提到】
: almost like mission impossible for any protein with size >100KD in E. coli.
: forget about it.
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