【求助】CM-DiI注射标记斑马鱼神经元# Biology - 生物学
g*l
1 楼
有个华人卖的，不知道好不好。了解的请帮忙看
http://www.kitchenyourway.com/cabinet/product_enlarge.php?catid=88&id=196297
http://www.kitchenyourway.com/cabinet/product_enlarge.php?catid=88&id=196297
g*e
2 楼
主要是每个选手都挑战成功了，成功率１００％。
要知道像奥运会这种真实的比赛现场，失误是层出不穷的。
要知道像奥运会这种真实的比赛现场，失误是层出不穷的。
L*f
3 楼
【 以下文字转载自 Family 讨论区 】
发信人: LoneWolf (孤独的狼), 信区: Family
标 题: 嫁给中国男人的好处(ZZ)
发信站: BBS 未名空间站 (Sat May 29 00:20:14 2010, 美东)
网上常有文章批评中国男人不会赞美女人，不会浪漫，把中国男人形容成木头，二傻。
是滴，嫁给中国男人，也许不会lease一辆顶级BMW，大奔敞篷车，享受人生。但是，你
的车title确是你名下，爱开几年开几年，更不需要月月忙着付lease fee.
是滴，嫁给中国男人，也许不会住在Manhattan Central Park的好区，享受door man给
你开门，踩着厚厚地毯过道的感觉。但是，你住的房子不用担心被拍卖掉，因为你的中
国老公早把接下来数年的房款给备好了。
是滴，嫁给中国男人，也许不会每个季度陪你去某个浪漫的小岛，深林去渡假。但是，
哪年你想会国转转，那肯定帖身三陪。
是滴，嫁给中国男人，也许不会天天下馆子，叫外买，也很少有机会去泡酒吧，喝喝酒
。但是，你中国老公做的菜，也许比你做的更美味。想吃什么，你就言语一声，外国老
公，哪会这个。
发信人: LoneWolf (孤独的狼), 信区: Family
标 题: 嫁给中国男人的好处(ZZ)
发信站: BBS 未名空间站 (Sat May 29 00:20:14 2010, 美东)
网上常有文章批评中国男人不会赞美女人，不会浪漫，把中国男人形容成木头，二傻。
是滴，嫁给中国男人，也许不会lease一辆顶级BMW，大奔敞篷车，享受人生。但是，你
的车title确是你名下，爱开几年开几年，更不需要月月忙着付lease fee.
是滴，嫁给中国男人，也许不会住在Manhattan Central Park的好区，享受door man给
你开门，踩着厚厚地毯过道的感觉。但是，你住的房子不用担心被拍卖掉，因为你的中
国老公早把接下来数年的房款给备好了。
是滴，嫁给中国男人，也许不会每个季度陪你去某个浪漫的小岛，深林去渡假。但是，
哪年你想会国转转，那肯定帖身三陪。
是滴，嫁给中国男人，也许不会天天下馆子，叫外买，也很少有机会去泡酒吧，喝喝酒
。但是，你中国老公做的菜，也许比你做的更美味。想吃什么，你就言语一声，外国老
公，哪会这个。
c*r
4 楼
代LP发帖，欢迎交流指教。多谢！^_^
实验中需要标记斑马鱼幼体（D1-D4）的运动神经元，就是通过在肌肉里面的运动神经
元轴突把荧光染料注射进去（retrograde backfilling）。由于注射后的斑马鱼会用于
冰冻切片和免疫染色，同时用的抗体需要先切片然后再快速用甲醛固定，然后还要做免
疫染色，所以一般的dextran或者DiI的染料都不适用，会被洗掉。最后选择了
Invitrogen的CM-DiI，说是可以共价联接在膜蛋白上。
试了CM-DiI，确实不会被洗掉，但出现了几个问题：
1. 注射鱼的时候鱼的组织会被粘在注射用的玻璃针里面，一来会堵玻璃针，二来对鱼
造成的伤害很大。我试过用DMF、酒精以及二者的混合溶液作溶剂，全都有这个问题（
染料浓度是1 mg/ml）。其中用酒精做溶剂造成的存活率相对高一点，所以最后我一直
都用酒精作溶剂。
2. 标记运动神经元的效率下降。以前我用dextran注射的时候，只要注射到轴突支配的
肌肉里面，很容易就标记了运动神经元。现在用CM-DiI，会发现被注射的肌肉部分有很
强的荧光，但却没有进入轴突。貌似需要很精确地注射到轴突里面才行，那个难度就比
较大了。
总之，现在用这个CM-DiI用得非常失败，目前为止还没有一例标记成功。如果有哪位有
用过这个染料或者知道一些经验，还望多多指教。多谢了！
实验中需要标记斑马鱼幼体（D1-D4）的运动神经元，就是通过在肌肉里面的运动神经
元轴突把荧光染料注射进去（retrograde backfilling）。由于注射后的斑马鱼会用于
冰冻切片和免疫染色，同时用的抗体需要先切片然后再快速用甲醛固定，然后还要做免
疫染色，所以一般的dextran或者DiI的染料都不适用，会被洗掉。最后选择了
Invitrogen的CM-DiI，说是可以共价联接在膜蛋白上。
试了CM-DiI，确实不会被洗掉，但出现了几个问题：
1. 注射鱼的时候鱼的组织会被粘在注射用的玻璃针里面，一来会堵玻璃针，二来对鱼
造成的伤害很大。我试过用DMF、酒精以及二者的混合溶液作溶剂，全都有这个问题（
染料浓度是1 mg/ml）。其中用酒精做溶剂造成的存活率相对高一点，所以最后我一直
都用酒精作溶剂。
2. 标记运动神经元的效率下降。以前我用dextran注射的时候，只要注射到轴突支配的
肌肉里面，很容易就标记了运动神经元。现在用CM-DiI，会发现被注射的肌肉部分有很
强的荧光，但却没有进入轴突。貌似需要很精确地注射到轴突里面才行，那个难度就比
较大了。
总之，现在用这个CM-DiI用得非常失败，目前为止还没有一例标记成功。如果有哪位有
用过这个染料或者知道一些经验，还望多多指教。多谢了！
i*i
5 楼
你这个跟央视在火车上采访乘客然后欣慰的发现大家都买到火车票了有的一拼。
【在 g*******e 的大作中提到】
: 主要是每个选手都挑战成功了，成功率１００％。
: 要知道像奥运会这种真实的比赛现场，失误是层出不穷的。
【在 g*******e 的大作中提到】
: 主要是每个选手都挑战成功了，成功率１００％。
: 要知道像奥运会这种真实的比赛现场，失误是层出不穷的。
h*y
6 楼
You can try FluoroGold, which is compatible with PFA.
Check out here.
http://www.fluorochrome.com/
【在 c*********r 的大作中提到】
: 代LP发帖，欢迎交流指教。多谢！^_^
: 实验中需要标记斑马鱼幼体（D1-D4）的运动神经元，就是通过在肌肉里面的运动神经
: 元轴突把荧光染料注射进去（retrograde backfilling）。由于注射后的斑马鱼会用于
: 冰冻切片和免疫染色，同时用的抗体需要先切片然后再快速用甲醛固定，然后还要做免
: 疫染色，所以一般的dextran或者DiI的染料都不适用，会被洗掉。最后选择了
: Invitrogen的CM-DiI，说是可以共价联接在膜蛋白上。
: 试了CM-DiI，确实不会被洗掉，但出现了几个问题：
: 1. 注射鱼的时候鱼的组织会被粘在注射用的玻璃针里面，一来会堵玻璃针，二来对鱼
: 造成的伤害很大。我试过用DMF、酒精以及二者的混合溶液作溶剂，全都有这个问题（
: 染料浓度是1 mg/ml）。其中用酒精做溶剂造成的存活率相对高一点，所以最后我一直
Check out here.
http://www.fluorochrome.com/
【在 c*********r 的大作中提到】
: 代LP发帖，欢迎交流指教。多谢！^_^
: 实验中需要标记斑马鱼幼体（D1-D4）的运动神经元，就是通过在肌肉里面的运动神经
: 元轴突把荧光染料注射进去（retrograde backfilling）。由于注射后的斑马鱼会用于
: 冰冻切片和免疫染色，同时用的抗体需要先切片然后再快速用甲醛固定，然后还要做免
: 疫染色，所以一般的dextran或者DiI的染料都不适用，会被洗掉。最后选择了
: Invitrogen的CM-DiI，说是可以共价联接在膜蛋白上。
: 试了CM-DiI，确实不会被洗掉，但出现了几个问题：
: 1. 注射鱼的时候鱼的组织会被粘在注射用的玻璃针里面，一来会堵玻璃针，二来对鱼
: 造成的伤害很大。我试过用DMF、酒精以及二者的混合溶液作溶剂，全都有这个问题（
: 染料浓度是1 mg/ml）。其中用酒精做溶剂造成的存活率相对高一点，所以最后我一直
r*y
7 楼
dr魏肯定很委屈：根本轮不到我打分的场面都不见了，只剩下我一票否决的。。。
还有梁冬，还要在否决以后大喊什么意思嘛。。。
【在 g*******e 的大作中提到】
: 主要是每个选手都挑战成功了，成功率１００％。
: 要知道像奥运会这种真实的比赛现场，失误是层出不穷的。
还有梁冬，还要在否决以后大喊什么意思嘛。。。
【在 g*******e 的大作中提到】
: 主要是每个选手都挑战成功了，成功率１００％。
: 要知道像奥运会这种真实的比赛现场，失误是层出不穷的。
c*r
8 楼
多谢！不过我的问题其实不是是否能够用PFA，dextran、DiI和CM-DiI都有可以用PFA的
种类。但是我的实验中甲醛固定是在切片之后，因为切片时会把切开一部分细胞，而在
甲醛固定之前染料是不会和组织交联的，所以水溶性的染料比如dextran在固定的时候
就被洗掉了。
这个FluoroGold我看了一下也是水溶性的，不知道会不会也有这个问题……
【在 h******y 的大作中提到】
: You can try FluoroGold, which is compatible with PFA.
: Check out here.
: http://www.fluorochrome.com/
种类。但是我的实验中甲醛固定是在切片之后，因为切片时会把切开一部分细胞，而在
甲醛固定之前染料是不会和组织交联的，所以水溶性的染料比如dextran在固定的时候
就被洗掉了。
这个FluoroGold我看了一下也是水溶性的，不知道会不会也有这个问题……
【在 h******y 的大作中提到】
: You can try FluoroGold, which is compatible with PFA.
: Check out here.
: http://www.fluorochrome.com/
n*r
9 楼
失败的都剪了
【在 g*******e 的大作中提到】
: 主要是每个选手都挑战成功了，成功率１００％。
: 要知道像奥运会这种真实的比赛现场，失误是层出不穷的。
【在 g*******e 的大作中提到】
: 主要是每个选手都挑战成功了，成功率１００％。
: 要知道像奥运会这种真实的比赛现场，失误是层出不穷的。
h*y
10 楼
你可以固定之后再切片吗？
【在 c*********r 的大作中提到】
: 多谢！不过我的问题其实不是是否能够用PFA，dextran、DiI和CM-DiI都有可以用PFA的
: 种类。但是我的实验中甲醛固定是在切片之后，因为切片时会把切开一部分细胞，而在
: 甲醛固定之前染料是不会和组织交联的，所以水溶性的染料比如dextran在固定的时候
: 就被洗掉了。
: 这个FluoroGold我看了一下也是水溶性的，不知道会不会也有这个问题……
【在 c*********r 的大作中提到】
: 多谢！不过我的问题其实不是是否能够用PFA，dextran、DiI和CM-DiI都有可以用PFA的
: 种类。但是我的实验中甲醛固定是在切片之后，因为切片时会把切开一部分细胞，而在
: 甲醛固定之前染料是不会和组织交联的，所以水溶性的染料比如dextran在固定的时候
: 就被洗掉了。
: 这个FluoroGold我看了一下也是水溶性的，不知道会不会也有这个问题……
c*r
11 楼
不行，因为目标蛋白需要快速固定。先固定后切片的话目标蛋白就扩散了。所以我是快
速冷冻、快速切片、然后固定染色。。。
【在 h******y 的大作中提到】
: 你可以固定之后再切片吗？
速冷冻、快速切片、然后固定染色。。。
【在 h******y 的大作中提到】
: 你可以固定之后再切片吗？
r*1
12 楼
楼主的lp搞什么专业啊，居然弄斑马鱼的神经元啊！
c*r
13 楼
她做斑马鱼神经发育。^_^
【在 r******1 的大作中提到】
: 楼主的lp搞什么专业啊，居然弄斑马鱼的神经元啊！
【在 r******1 的大作中提到】
: 楼主的lp搞什么专业啊，居然弄斑马鱼的神经元啊！
c*r
14 楼
自己顶一下。
我猜想这个和染料以及注射用的needle材料表面的亲水性、疏水性有些关系，但不确定
。现在开始查一下。
我猜想这个和染料以及注射用的needle材料表面的亲水性、疏水性有些关系，但不确定
。现在开始查一下。
相关阅读
生物与数学结合最成功的例子有人用FISHER （THERMO SCIENTIFIC）的PVDF膜么？统计算不算数学？paper help简单谈谈科学和工程的区别以及生物的收入。原位杂交探针保存时间生物工程问问题：去哪里查开会的信息一个著名物理学家说过关于DNA methylation 研究的引物有人熟悉颅咽管瘤的吗?生物版的都是PI稳拿级别的，应该还轮不到我说话的份发育生物学Phd找Industry job千人计划严起来怕真要成百人了 (转载)请教science in-depth review之后，接受的概率是多大呀？谁说说molecular metabolism这个杂志如何？不如说说具体哪个生物领域比较容易和数学结合起来吧？关于HPV和KSHV的活性这个位置我该继续等下去吗？我有一个孟加拉同事