h*2
2 楼
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ay
3 楼
要的速度
b*8
4 楼
如题，手上的一个真和表达质粒，据说是当初从Addgene买回来的，DH5alpha的菌液，
前段时间快用完了，用TOP10做了转化，使用invitrogen的midi prep kit提取中抽，产
量超低，几乎看不到沉淀，重复两次都一样，同一批操作的其它质粒都没问题，产量一
般在100ug左右。后来考虑是不是感受态不同导致，找别的组要了DH5alpha回来转化，
再提，还是没有改善，只能看到很少的一点点白色沉淀，现在正在airdry，估计产量也
就在几ug的水平，请问大家有没有遇到这个问题，该怎么解决呢？
前段时间快用完了，用TOP10做了转化，使用invitrogen的midi prep kit提取中抽，产
量超低，几乎看不到沉淀，重复两次都一样，同一批操作的其它质粒都没问题，产量一
般在100ug左右。后来考虑是不是感受态不同导致，找别的组要了DH5alpha回来转化，
再提，还是没有改善，只能看到很少的一点点白色沉淀，现在正在airdry，估计产量也
就在几ug的水平，请问大家有没有遇到这个问题，该怎么解决呢？
s*g
5 楼
Not a bad card, esp it's low profile and funless.
【在 ay 的大作中提到】
: 要的速度
【在 ay 的大作中提到】
: 要的速度
m*7
6 楼
我建议你先小提看看。
见过一个很极端的例子，某个质粒小提时没有任何问题，一扩大培养基体积细菌就产不
了多少质粒。那个实验室每次提质粒时就只好上１００个试管，再合起来提；或者铺一
大块琼脂培养基，等菌苔长满再刮下来提。
那个实验室的PI和别人讨论觉得可能是插入序列有未知潜在抑制作用，但谁也不知道原
因，只好先这么做了。
另外，很早以前有些老质粒是需要在培养过程中用 IPTG诱导的。你看看质粒信息是否
有这种可能性存在。
见过一个很极端的例子，某个质粒小提时没有任何问题，一扩大培养基体积细菌就产不
了多少质粒。那个实验室每次提质粒时就只好上１００个试管，再合起来提；或者铺一
大块琼脂培养基，等菌苔长满再刮下来提。
那个实验室的PI和别人讨论觉得可能是插入序列有未知潜在抑制作用，但谁也不知道原
因，只好先这么做了。
另外，很早以前有些老质粒是需要在培养过程中用 IPTG诱导的。你看看质粒信息是否
有这种可能性存在。
t*g
7 楼
这种卡以后估计彻底没前途了，需要亮机的用集显就行了。
【在 s*****g 的大作中提到】
: Not a bad card, esp it's low profile and funless.
【在 s*****g 的大作中提到】
: Not a bad card, esp it's low profile and funless.
r*e
8 楼
这种情况遇到过，降到温度可能有效。
好像质粒自己重组了。
【在 m*********7 的大作中提到】
: 我建议你先小提看看。
: 见过一个很极端的例子，某个质粒小提时没有任何问题，一扩大培养基体积细菌就产不
: 了多少质粒。那个实验室每次提质粒时就只好上１００个试管，再合起来提；或者铺一
: 大块琼脂培养基，等菌苔长满再刮下来提。
: 那个实验室的PI和别人讨论觉得可能是插入序列有未知潜在抑制作用，但谁也不知道原
: 因，只好先这么做了。
: 另外，很早以前有些老质粒是需要在培养过程中用 IPTG诱导的。你看看质粒信息是否
: 有这种可能性存在。
好像质粒自己重组了。
【在 m*********7 的大作中提到】
: 我建议你先小提看看。
: 见过一个很极端的例子，某个质粒小提时没有任何问题，一扩大培养基体积细菌就产不
: 了多少质粒。那个实验室每次提质粒时就只好上１００个试管，再合起来提；或者铺一
: 大块琼脂培养基，等菌苔长满再刮下来提。
: 那个实验室的PI和别人讨论觉得可能是插入序列有未知潜在抑制作用，但谁也不知道原
: 因，只好先这么做了。
: 另外，很早以前有些老质粒是需要在培养过程中用 IPTG诱导的。你看看质粒信息是否
: 有这种可能性存在。
ay
9 楼
然
不过我两台电脑一个是x1600,一个是hd3000
这个卡比我目前的两个都好
【在 t****g 的大作中提到】
: 这种卡以后估计彻底没前途了，需要亮机的用集显就行了。
不过我两台电脑一个是x1600,一个是hd3000
这个卡比我目前的两个都好
【在 t****g 的大作中提到】
: 这种卡以后估计彻底没前途了，需要亮机的用集显就行了。
w*n
10 楼
买过一个addgene的质粒，小提提不出来，大提才行。
【在 b**********8 的大作中提到】
: 如题，手上的一个真和表达质粒，据说是当初从Addgene买回来的，DH5alpha的菌液，
: 前段时间快用完了，用TOP10做了转化，使用invitrogen的midi prep kit提取中抽，产
: 量超低，几乎看不到沉淀，重复两次都一样，同一批操作的其它质粒都没问题，产量一
: 般在100ug左右。后来考虑是不是感受态不同导致，找别的组要了DH5alpha回来转化，
: 再提，还是没有改善，只能看到很少的一点点白色沉淀，现在正在airdry，估计产量也
: 就在几ug的水平，请问大家有没有遇到这个问题，该怎么解决呢？
【在 b**********8 的大作中提到】
: 如题，手上的一个真和表达质粒，据说是当初从Addgene买回来的，DH5alpha的菌液，
: 前段时间快用完了，用TOP10做了转化，使用invitrogen的midi prep kit提取中抽，产
: 量超低，几乎看不到沉淀，重复两次都一样，同一批操作的其它质粒都没问题，产量一
: 般在100ug左右。后来考虑是不是感受态不同导致，找别的组要了DH5alpha回来转化，
: 再提，还是没有改善，只能看到很少的一点点白色沉淀，现在正在airdry，估计产量也
: 就在几ug的水平，请问大家有没有遇到这个问题，该怎么解决呢？
t*g
11 楼
我还有台机器在用HD2400pro，不过AGP的卡现在估计很难觅了。
【在 ay 的大作中提到】
: 然
: 不过我两台电脑一个是x1600,一个是hd3000
: 这个卡比我目前的两个都好
【在 ay 的大作中提到】
: 然
: 不过我两台电脑一个是x1600,一个是hd3000
: 这个卡比我目前的两个都好
S*e
12 楼
我也碰到过这样的问题，挺烦人
其他人也说了，1）试试miniprep; 2)降低培养温度
【在 b**********8 的大作中提到】
: 如题，手上的一个真和表达质粒，据说是当初从Addgene买回来的，DH5alpha的菌液，
: 前段时间快用完了，用TOP10做了转化，使用invitrogen的midi prep kit提取中抽，产
: 量超低，几乎看不到沉淀，重复两次都一样，同一批操作的其它质粒都没问题，产量一
: 般在100ug左右。后来考虑是不是感受态不同导致，找别的组要了DH5alpha回来转化，
: 再提，还是没有改善，只能看到很少的一点点白色沉淀，现在正在airdry，估计产量也
: 就在几ug的水平，请问大家有没有遇到这个问题，该怎么解决呢？
其他人也说了，1）试试miniprep; 2)降低培养温度
【在 b**********8 的大作中提到】
: 如题，手上的一个真和表达质粒，据说是当初从Addgene买回来的，DH5alpha的菌液，
: 前段时间快用完了，用TOP10做了转化，使用invitrogen的midi prep kit提取中抽，产
: 量超低，几乎看不到沉淀，重复两次都一样，同一批操作的其它质粒都没问题，产量一
: 般在100ug左右。后来考虑是不是感受态不同导致，找别的组要了DH5alpha回来转化，
: 再提，还是没有改善，只能看到很少的一点点白色沉淀，现在正在airdry，估计产量也
: 就在几ug的水平，请问大家有没有遇到这个问题，该怎么解决呢？
d*0
13 楼
传说中的亮机卡
b*8
14 楼
多谢楼上各位分享经验。看到有人建议用miniprep，可是我要用这个质粒做转染，
miniprep的产物可以直接转染吗？
另外，降低温度可能有效，这个温度有没有具体的范围呢？室温？30度？我昨天晚上又挑了一个放在室温下摇过夜，今早来看发现培养液清亮，应该是没涨起来，刚才又把温度加到30度了，不知道行不行。
miniprep的产物可以直接转染吗？
另外，降低温度可能有效，这个温度有没有具体的范围呢？室温？30度？我昨天晚上又挑了一个放在室温下摇过夜，今早来看发现培养液清亮，应该是没涨起来，刚才又把温度加到30度了，不知道行不行。
l*1
15 楼
可怜我400sc还在用ATI Rage XL 8MB PCI card...
【在 ay 的大作中提到】
: 然
: 不过我两台电脑一个是x1600,一个是hd3000
: 这个卡比我目前的两个都好
【在 ay 的大作中提到】
: 然
: 不过我两台电脑一个是x1600,一个是hd3000
: 这个卡比我目前的两个都好
w*n
16 楼
抗生素浓度加倍，培养时间加倍，培养体积10倍，然后大提。
【在 b**********8 的大作中提到】
: 如题，手上的一个真和表达质粒，据说是当初从Addgene买回来的，DH5alpha的菌液，
: 前段时间快用完了，用TOP10做了转化，使用invitrogen的midi prep kit提取中抽，产
: 量超低，几乎看不到沉淀，重复两次都一样，同一批操作的其它质粒都没问题，产量一
: 般在100ug左右。后来考虑是不是感受态不同导致，找别的组要了DH5alpha回来转化，
: 再提，还是没有改善，只能看到很少的一点点白色沉淀，现在正在airdry，估计产量也
: 就在几ug的水平，请问大家有没有遇到这个问题，该怎么解决呢？
【在 b**********8 的大作中提到】
: 如题，手上的一个真和表达质粒，据说是当初从Addgene买回来的，DH5alpha的菌液，
: 前段时间快用完了，用TOP10做了转化，使用invitrogen的midi prep kit提取中抽，产
: 量超低，几乎看不到沉淀，重复两次都一样，同一批操作的其它质粒都没问题，产量一
: 般在100ug左右。后来考虑是不是感受态不同导致，找别的组要了DH5alpha回来转化，
: 再提，还是没有改善，只能看到很少的一点点白色沉淀，现在正在airdry，估计产量也
: 就在几ug的水平，请问大家有没有遇到这个问题，该怎么解决呢？
m*7
17 楼
为啥小提的产物不能直接做转染？你以为别人提１００个试管小提的产物是干嘛用的？
又挑了一个放在室温下摇过夜，今早来看发现培养液清亮，应该是没涨起来，刚才又把
温度加到30度了，不知道行不行。
【在 b**********8 的大作中提到】
: 多谢楼上各位分享经验。看到有人建议用miniprep，可是我要用这个质粒做转染，
: miniprep的产物可以直接转染吗？
: 另外，降低温度可能有效，这个温度有没有具体的范围呢？室温？30度？我昨天晚上又挑了一个放在室温下摇过夜，今早来看发现培养液清亮，应该是没涨起来，刚才又把温度加到30度了，不知道行不行。
又挑了一个放在室温下摇过夜，今早来看发现培养液清亮，应该是没涨起来，刚才又把
温度加到30度了，不知道行不行。
【在 b**********8 的大作中提到】
: 多谢楼上各位分享经验。看到有人建议用miniprep，可是我要用这个质粒做转染，
: miniprep的产物可以直接转染吗？
: 另外，降低温度可能有效，这个温度有没有具体的范围呢？室温？30度？我昨天晚上又挑了一个放在室温下摇过夜，今早来看发现培养液清亮，应该是没涨起来，刚才又把温度加到30度了，不知道行不行。
j*x
18 楼
小提有可能纯度不够，某些敏感细胞系内毒素等除不干净的话影响很大。
当然，也可以先小提之后再集中纯化一次
【在 m*********7 的大作中提到】
: 为啥小提的产物不能直接做转染？你以为别人提１００个试管小提的产物是干嘛用的？
:
: 又挑了一个放在室温下摇过夜，今早来看发现培养液清亮，应该是没涨起来，刚才又把
: 温度加到30度了，不知道行不行。
当然，也可以先小提之后再集中纯化一次
【在 m*********7 的大作中提到】
: 为啥小提的产物不能直接做转染？你以为别人提１００个试管小提的产物是干嘛用的？
:
: 又挑了一个放在室温下摇过夜，今早来看发现培养液清亮，应该是没涨起来，刚才又把
: 温度加到30度了，不知道行不行。
O*e
19 楼
the quality is lower
【在 m*********7 的大作中提到】
: 为啥小提的产物不能直接做转染？你以为别人提１００个试管小提的产物是干嘛用的？
:
: 又挑了一个放在室温下摇过夜，今早来看发现培养液清亮，应该是没涨起来，刚才又把
: 温度加到30度了，不知道行不行。
【在 m*********7 的大作中提到】
: 为啥小提的产物不能直接做转染？你以为别人提１００个试管小提的产物是干嘛用的？
:
: 又挑了一个放在室温下摇过夜，今早来看发现培养液清亮，应该是没涨起来，刚才又把
: 温度加到30度了，不知道行不行。
s*s
20 楼
qiacube做出来的小提质量很好，不知道是什么trick
【在 O******e 的大作中提到】
: the quality is lower
【在 O******e 的大作中提到】
: the quality is lower
s*s
21 楼
经典方法是直接摇1L，长到对数期的时候加点氯霉素抑制细胞分裂，
然后过夜。这样菌体可能和200ml的普通生长差不多，适合中大提，但
是质粒会累积很多
又挑了一个放在室温下摇过夜，今早来看发现培养液清亮，应该是没涨起来，刚才又把
温度加到30度了，不知道行不行。
【在 b**********8 的大作中提到】
: 多谢楼上各位分享经验。看到有人建议用miniprep，可是我要用这个质粒做转染，
: miniprep的产物可以直接转染吗？
: 另外，降低温度可能有效，这个温度有没有具体的范围呢？室温？30度？我昨天晚上又挑了一个放在室温下摇过夜，今早来看发现培养液清亮，应该是没涨起来，刚才又把温度加到30度了，不知道行不行。
然后过夜。这样菌体可能和200ml的普通生长差不多，适合中大提，但
是质粒会累积很多
又挑了一个放在室温下摇过夜，今早来看发现培养液清亮，应该是没涨起来，刚才又把
温度加到30度了，不知道行不行。
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