g*p
2 楼
昨天一个相识不久的女孩小雪，从海南打来电话，心烦意乱地向我倾诉最近毕业的烦恼，论文没改完，工作也没确定好，工资少了不想干，工资要多了的企业又怕不让进。
小雪和许多即将毕业的大学生一样，普通本科，但学的是新闻，可能专业的缘故，所以看起来脑瓜子时不时迸发出别样的火花，再加上骨子里的古灵精怪，其实是一个足够讨人喜欢的姑娘。性格的强势使得未免在临近毕业选工作这件事上格外着急了些。
初认识她的时候，记得是去年离过年还有一个月的晚冬，拖着行李箱到我们这边借宿。后来才知道在一家只有7个人的互联网创业公司实习，好在做的是新媒体。也因是住得近、熟识了的缘故，什么工作被上司骂或者被同事有意无意打小报告的事儿也都会告诉我，让我帮她想办法。看着这个即将毕业的年纪，似乎想起了当年的自己。
谁都有大学毕业的时候。毕业的时候，你面临找工作，面临搬家，面临租房子，面临在恋还是失恋，面临城市的抉择。各种铺天盖地的好消息、坏消息把你填满，你会突然发现，前面究竟是什么？你会面对突如其来、五花八门的抉择，不知所措，想逃避，却又好奇。即将毕业的你，是不是也有这种感觉？我想这些不应该只是我的，我也只是恰巧路过而已，就好像我知道你也会路过，成为路人一样。可是首先也应该来看看眼下的事怎么办。
小雪和许多即将毕业的大学生一样，普通本科，但学的是新闻，可能专业的缘故，所以看起来脑瓜子时不时迸发出别样的火花，再加上骨子里的古灵精怪，其实是一个足够讨人喜欢的姑娘。性格的强势使得未免在临近毕业选工作这件事上格外着急了些。
初认识她的时候，记得是去年离过年还有一个月的晚冬，拖着行李箱到我们这边借宿。后来才知道在一家只有7个人的互联网创业公司实习，好在做的是新媒体。也因是住得近、熟识了的缘故，什么工作被上司骂或者被同事有意无意打小报告的事儿也都会告诉我，让我帮她想办法。看着这个即将毕业的年纪，似乎想起了当年的自己。
谁都有大学毕业的时候。毕业的时候，你面临找工作，面临搬家，面临租房子，面临在恋还是失恋，面临城市的抉择。各种铺天盖地的好消息、坏消息把你填满，你会突然发现，前面究竟是什么？你会面对突如其来、五花八门的抉择，不知所措，想逃避，却又好奇。即将毕业的你，是不是也有这种感觉？我想这些不应该只是我的，我也只是恰巧路过而已，就好像我知道你也会路过，成为路人一样。可是首先也应该来看看眼下的事怎么办。
c*k
3 楼
昨天收到MicroCenter的信，说i6有问题，Intel准备接受退货
详细原因语焉不详，就说significant SATA performace degration over time.
好笑的事，从收到这封信开始，我们家电脑就越来越过分了，今天从千兆网上拷贝，居
然只有5M/s，是我的心理因素还是电脑自己有心理问题。
详细原因语焉不详，就说significant SATA performace degration over time.
好笑的事，从收到这封信开始，我们家电脑就越来越过分了，今天从千兆网上拷贝，居
然只有5M/s，是我的心理因素还是电脑自己有心理问题。
i*t
4 楼
连穿着都要copy
A*d
5 楼
我知道抗体是有特异性的，跑Western要2天。能不能直接把蛋白质样品点在pvdf
membrane上，immunoblotting呢？有没有什么注意事项？
membrane上，immunoblotting呢？有没有什么注意事项？
m*a
6 楼
you will be asked to pay certain months from your grant.
【在 C***s 的大作中提到】
: 以后拉来funding也不能给自己开工资了？
【在 C***s 的大作中提到】
: 以后拉来funding也不能给自己开工资了？
U*t
7 楼
同意
t*s
8 楼
没有不详，缺陷很清楚
6系芯片组的4个SATA II接口，就是通道2-5有问题，长期使用之后会造成SATA设备不能
连通，SATA III接口也就是通道0-1正常
其余问题为个体问题，不属于缺陷
6系芯片组的4个SATA II接口，就是通道2-5有问题，长期使用之后会造成SATA设备不能
连通，SATA III接口也就是通道0-1正常
其余问题为个体问题，不属于缺陷
q*j
9 楼
还好了。
短袖 vs. 长袖
衣服没有放在裤腰里面。
【在 i**t 的大作中提到】
: 连穿着都要copy
短袖 vs. 长袖
衣服没有放在裤腰里面。
【在 i**t 的大作中提到】
: 连穿着都要copy
C*e
10 楼
做一个western要两天？？
anyway，要做dot blot的话不推荐用pvdf，用nc的比较方便
另外如果有vacuum blotter那做出来就很漂亮了
【在 A******d 的大作中提到】
: 我知道抗体是有特异性的，跑Western要2天。能不能直接把蛋白质样品点在pvdf
: membrane上，immunoblotting呢？有没有什么注意事项？
anyway，要做dot blot的话不推荐用pvdf，用nc的比较方便
另外如果有vacuum blotter那做出来就很漂亮了
【在 A******d 的大作中提到】
: 我知道抗体是有特异性的，跑Western要2天。能不能直接把蛋白质样品点在pvdf
: membrane上，immunoblotting呢？有没有什么注意事项？
x*s
11 楼
以后自己要付一定比例的，一般 50％ 以上
【在 C***s 的大作中提到】
: 以后拉来funding也不能给自己开工资了？
【在 C***s 的大作中提到】
: 以后拉来funding也不能给自己开工资了？
a*a
12 楼
Joys are often the shadows, cast by sorrows.
n*s
13 楼
SATA II 都不能用还玩个屁呀, defective就defective呗, 还有什么可说的
n*y
14 楼
确实，感觉搞得很像苹果发布会
A*d
15 楼
做胶跑胶半天，1抗过夜，就2天了。那你怎么弄？
【在 A******d 的大作中提到】
: 我知道抗体是有特异性的，跑Western要2天。能不能直接把蛋白质样品点在pvdf
: membrane上，immunoblotting呢？有没有什么注意事项？
【在 A******d 的大作中提到】
: 我知道抗体是有特异性的，跑Western要2天。能不能直接把蛋白质样品点在pvdf
: membrane上，immunoblotting呢？有没有什么注意事项？
A*y
16 楼
Usually in medical school, your share is 50% of your salary. Some schools
are 100% and some are 25% or less. If I have a 2nd national grant, I will
only put 25% into my salary to make it 75% total.
【在 C***s 的大作中提到】
: 以后拉来funding也不能给自己开工资了？
are 100% and some are 25% or less. If I have a 2nd national grant, I will
only put 25% into my salary to make it 75% total.
【在 C***s 的大作中提到】
: 以后拉来funding也不能给自己开工资了？
A*a
17 楼
神器
a*i
18 楼
你可以先换成sata iii的接口
等新板子铺货以后换个新的
等新板子铺货以后换个新的
p*m
19 楼
全世界穿牛仔+T恤的感情都是copy Jobs。。。
连穿着都要copy
【在 i**t 的大作中提到】
: 连穿着都要copy
连穿着都要copy
【在 i**t 的大作中提到】
: 连穿着都要copy
H*s
20 楼
(1). Spot your cell lysate (or culture supernatant) onto nitrocellulose
membrane. 2-5ul is good enough for each spot. Positive and negative control
is a must.
(2). Let it sit on the bench to dry. 20 minutes is more than enough.
(3). Block with 5% milk or BSA at room temp. 30 minutes. Gentle shaking.
(4). Add your primary antibody (let's say mouse monoclonal antibody) to the
milk directly. Room temperature 2 hours (or cold room overnight). Gentle shaking.
(5). Wash three time with 1XPBS. 15 minutes/wash. Gentle shaking.
(6). Replace your wash with AP-conjugated 2nd antibody (AP-anti-mouse
antibody) in 1XPBS. Room temperature, 2 hours. Gentle shaking.
(7). Wash as described in step (5). Gentle shaking.
(8). Add one-step NBP/BCIP to cover the blot. Positive dot should show up in
5 minutes. Gentle shaking.
(9). After dots show up, dump NBP/BCIP solution and rinse blot with water.
【在 A******d 的大作中提到】
: 做胶跑胶半天，1抗过夜，就2天了。那你怎么弄？
membrane. 2-5ul is good enough for each spot. Positive and negative control
is a must.
(2). Let it sit on the bench to dry. 20 minutes is more than enough.
(3). Block with 5% milk or BSA at room temp. 30 minutes. Gentle shaking.
(4). Add your primary antibody (let's say mouse monoclonal antibody) to the
milk directly. Room temperature 2 hours (or cold room overnight). Gentle shaking.
(5). Wash three time with 1XPBS. 15 minutes/wash. Gentle shaking.
(6). Replace your wash with AP-conjugated 2nd antibody (AP-anti-mouse
antibody) in 1XPBS. Room temperature, 2 hours. Gentle shaking.
(7). Wash as described in step (5). Gentle shaking.
(8). Add one-step NBP/BCIP to cover the blot. Positive dot should show up in
5 minutes. Gentle shaking.
(9). After dots show up, dump NBP/BCIP solution and rinse blot with water.
【在 A******d 的大作中提到】
: 做胶跑胶半天，1抗过夜，就2天了。那你怎么弄？
s*x
21 楼
check incentive plan. You can pay yourself additional 10% or so. Sort of
like bonus.
like bonus.
d*0
22 楼
这个很过分啊，别人买了一套，你把主板recall了，剩下的还怎么玩呀。据说当年
intel参照当年召回820主板的时候，MSI不光换了新的还送了免费的内存条。
intel参照当年召回820主板的时候，MSI不光换了新的还送了免费的内存条。
r*n
23 楼
所有的发布会走这个视角拍过去都差不多
【在 n**y 的大作中提到】
: 确实，感觉搞得很像苹果发布会
【在 n**y 的大作中提到】
: 确实，感觉搞得很像苹果发布会
X*n
24 楼
跑胶：200v， 45min
转膜：150v，45min
Blocking：20min
一抗：1h
2抗：30min
洗：30min total
一个下午完工
【在 A******d 的大作中提到】
: 做胶跑胶半天，1抗过夜，就2天了。那你怎么弄？
转膜：150v，45min
Blocking：20min
一抗：1h
2抗：30min
洗：30min total
一个下午完工
【在 A******d 的大作中提到】
: 做胶跑胶半天，1抗过夜，就2天了。那你怎么弄？
C*s
25 楼
Sounds great! I didn't see the incentive plan, but I haven't signed the
offer yet, better make it clear. Thank you
【在 s*********x 的大作中提到】
: check incentive plan. You can pay yourself additional 10% or so. Sort of
: like bonus.
offer yet, better make it clear. Thank you
【在 s*********x 的大作中提到】
: check incentive plan. You can pay yourself additional 10% or so. Sort of
: like bonus.
a*i
26 楼
官方说法是这个不是召回，你可以换成SATA III一直使用下去，等新板子出来了换一个
。SATA II接
口在未来三年出问题的概率是5%，出问题是渐进型的，不是一下子就连不上了挂掉。
【在 d*****0 的大作中提到】
: 这个很过分啊，别人买了一套，你把主板recall了，剩下的还怎么玩呀。据说当年
: intel参照当年召回820主板的时候，MSI不光换了新的还送了免费的内存条。
a*n
27 楼
根本不只这一点
连长相都copy 角不时
两个眼睛，一个鼻子， 一个嘴巴。。
【在 n**y 的大作中提到】
: 确实，感觉搞得很像苹果发布会
连长相都copy 角不时
两个眼睛，一个鼻子， 一个嘴巴。。
【在 n**y 的大作中提到】
: 确实，感觉搞得很像苹果发布会
h*n
28 楼
跑胶：200v， 30min
转膜：7 min (dry transfer)
Blocking：(No blocking)
一抗：30 min
2抗：30min
洗：10 min total
2 h完工
转膜：7 min (dry transfer)
Blocking：(No blocking)
一抗：30 min
2抗：30min
洗：10 min total
2 h完工
s*y
29 楼
这个你要问系里。我们的incentive plan的条件是必须prefromance exceed
expectation， 比方说，假如你能同时拿到三个R01...
【在 C***s 的大作中提到】
: Sounds great! I didn't see the incentive plan, but I haven't signed the
: offer yet, better make it clear. Thank you
expectation， 比方说，假如你能同时拿到三个R01...
【在 C***s 的大作中提到】
: Sounds great! I didn't see the incentive plan, but I haven't signed the
: offer yet, better make it clear. Thank you
c*k
30 楼
反正我的机器昨天网口连不上了，重启直接蓝屏，还是第一次见Win7蓝屏
【在 a*******i 的大作中提到】
:
: 官方说法是这个不是召回，你可以换成SATA III一直使用下去，等新板子出来了换一个
: 。SATA II接
: 口在未来三年出问题的概率是5%，出问题是渐进型的，不是一下子就连不上了挂掉。
【在 a*******i 的大作中提到】
:
: 官方说法是这个不是召回，你可以换成SATA III一直使用下去，等新板子出来了换一个
: 。SATA II接
: 口在未来三年出问题的概率是5%，出问题是渐进型的，不是一下子就连不上了挂掉。
j*a
31 楼
张的有点像易空气啊
【在 i**t 的大作中提到】
: 连穿着都要copy
X*n
32 楼
还是你狠。
【在 h******n 的大作中提到】
: 跑胶：200v， 30min
: 转膜：7 min (dry transfer)
: Blocking：(No blocking)
: 一抗：30 min
: 2抗：30min
: 洗：10 min total
: 2 h完工
【在 h******n 的大作中提到】
: 跑胶：200v， 30min
: 转膜：7 min (dry transfer)
: Blocking：(No blocking)
: 一抗：30 min
: 2抗：30min
: 洗：10 min total
: 2 h完工
C*s
33 楼
多谢提醒，我对这个确实一无所知。
【在 s******y 的大作中提到】
: 这个你要问系里。我们的incentive plan的条件是必须prefromance exceed
: expectation， 比方说，假如你能同时拿到三个R01...
【在 s******y 的大作中提到】
: 这个你要问系里。我们的incentive plan的条件是必须prefromance exceed
: expectation， 比方说，假如你能同时拿到三个R01...
f*a
34 楼
http://www.expreview.com/13741.html
"出问题的并非整个SNB平台，而是代号Cougar Point的6系芯片组，包括P67、H67
以及它们衍生出来的移动/商用型号，再准确来说是这些主板上的SATA接口存在Bug，使
用久了可能会导致SATA设备性能下降，最终甚至会无法识别。
6系芯片组提供了2种SATA接口，编号分别为0-5，其中0和1支持SATA 6Gbps规范（
也称SATA 3.0或者SATA III)，2-5支持SATA 3Gbps(SATA 2.0或者是SATA II），出问题
的就是2-5这四个接口。在3Gbps的PLL时钟树（clocking tree）电路中有一颗晶体管，
它的栅氧化层非常薄，正常状态下只需要很低的电压即可工作，不幸的是Intel给它设
计了很高的电压，这一画蛇添足的举动导致漏电流过高，随着时间的推移最终会导致
3Gbps接口失效。"
【在 c***k 的大作中提到】
: 昨天收到MicroCenter的信，说i6有问题，Intel准备接受退货
: 详细原因语焉不详，就说significant SATA performace degration over time.
: 好笑的事，从收到这封信开始，我们家电脑就越来越过分了，今天从千兆网上拷贝，居
: 然只有5M/s，是我的心理因素还是电脑自己有心理问题。
"出问题的并非整个SNB平台，而是代号Cougar Point的6系芯片组，包括P67、H67
以及它们衍生出来的移动/商用型号，再准确来说是这些主板上的SATA接口存在Bug，使
用久了可能会导致SATA设备性能下降，最终甚至会无法识别。
6系芯片组提供了2种SATA接口，编号分别为0-5，其中0和1支持SATA 6Gbps规范（
也称SATA 3.0或者SATA III)，2-5支持SATA 3Gbps(SATA 2.0或者是SATA II），出问题
的就是2-5这四个接口。在3Gbps的PLL时钟树（clocking tree）电路中有一颗晶体管，
它的栅氧化层非常薄，正常状态下只需要很低的电压即可工作，不幸的是Intel给它设
计了很高的电压，这一画蛇添足的举动导致漏电流过高，随着时间的推移最终会导致
3Gbps接口失效。"
【在 c***k 的大作中提到】
: 昨天收到MicroCenter的信，说i6有问题，Intel准备接受退货
: 详细原因语焉不详，就说significant SATA performace degration over time.
: 好笑的事，从收到这封信开始，我们家电脑就越来越过分了，今天从千兆网上拷贝，居
: 然只有5M/s，是我的心理因素还是电脑自己有心理问题。
H*s
35 楼
我靠，以后你们做了PI，不知道要变态成什么模样？按照这个速度，一天怎么也得做它
五、六个WB。下面的人还不都得累死。
【在 X******n 的大作中提到】
: 还是你狠。
五、六个WB。下面的人还不都得累死。
【在 X******n 的大作中提到】
: 还是你狠。
A*d
36 楼
谢谢
control
the
shaking.
【在 H****s 的大作中提到】
: (1). Spot your cell lysate (or culture supernatant) onto nitrocellulose
: membrane. 2-5ul is good enough for each spot. Positive and negative control
: is a must.
: (2). Let it sit on the bench to dry. 20 minutes is more than enough.
: (3). Block with 5% milk or BSA at room temp. 30 minutes. Gentle shaking.
: (4). Add your primary antibody (let's say mouse monoclonal antibody) to the
: milk directly. Room temperature 2 hours (or cold room overnight). Gentle shaking.
: (5). Wash three time with 1XPBS. 15 minutes/wash. Gentle shaking.
: (6). Replace your wash with AP-conjugated 2nd antibody (AP-anti-mouse
: antibody) in 1XPBS. Room temperature, 2 hours. Gentle shaking.
control
the
shaking.
【在 H****s 的大作中提到】
: (1). Spot your cell lysate (or culture supernatant) onto nitrocellulose
: membrane. 2-5ul is good enough for each spot. Positive and negative control
: is a must.
: (2). Let it sit on the bench to dry. 20 minutes is more than enough.
: (3). Block with 5% milk or BSA at room temp. 30 minutes. Gentle shaking.
: (4). Add your primary antibody (let's say mouse monoclonal antibody) to the
: milk directly. Room temperature 2 hours (or cold room overnight). Gentle shaking.
: (5). Wash three time with 1XPBS. 15 minutes/wash. Gentle shaking.
: (6). Replace your wash with AP-conjugated 2nd antibody (AP-anti-mouse
: antibody) in 1XPBS. Room temperature, 2 hours. Gentle shaking.
A*d
37 楼
No blocking不会背景很大？
时间这么短会不会影响结果质量？难道一般的protocol都是浪费时间？
【在 h******n 的大作中提到】
: 跑胶：200v， 30min
: 转膜：7 min (dry transfer)
: Blocking：(No blocking)
: 一抗：30 min
: 2抗：30min
: 洗：10 min total
: 2 h完工
时间这么短会不会影响结果质量？难道一般的protocol都是浪费时间？
【在 h******n 的大作中提到】
: 跑胶：200v， 30min
: 转膜：7 min (dry transfer)
: Blocking：(No blocking)
: 一抗：30 min
: 2抗：30min
: 洗：10 min total
: 2 h完工
X*n
38 楼
这个真要看蛋白和抗体质量了。如果你同时要做其他实验，你可以跑慢点，转膜过夜，
ｂｌｏｃｋｉｎｇ过夜，一抗过夜。但是如果你就等一个western结果，很多地方是可
以加快的。
【在 A******d 的大作中提到】
: No blocking不会背景很大？
: 时间这么短会不会影响结果质量？难道一般的protocol都是浪费时间？
ｂｌｏｃｋｉｎｇ过夜，一抗过夜。但是如果你就等一个western结果，很多地方是可
以加快的。
【在 A******d 的大作中提到】
: No blocking不会背景很大？
: 时间这么短会不会影响结果质量？难道一般的protocol都是浪费时间？
m*5
39 楼
也看抗体质量和信号强度吧……有些抗体不过夜根本没信号
【在 X******n 的大作中提到】
: 这个真要看蛋白和抗体质量了。如果你同时要做其他实验，你可以跑慢点，转膜过夜，
: ｂｌｏｃｋｉｎｇ过夜，一抗过夜。但是如果你就等一个western结果，很多地方是可
: 以加快的。
【在 X******n 的大作中提到】
: 这个真要看蛋白和抗体质量了。如果你同时要做其他实验，你可以跑慢点，转膜过夜，
: ｂｌｏｃｋｉｎｇ过夜，一抗过夜。但是如果你就等一个western结果，很多地方是可
: 以加快的。
a*f
40 楼
show off 抗体好，设备牛。
曾几何时，转膜4度过夜，一抗4度过夜，第三天看结果。
【在 h******n 的大作中提到】
: 跑胶：200v， 30min
: 转膜：7 min (dry transfer)
: Blocking：(No blocking)
: 一抗：30 min
: 2抗：30min
: 洗：10 min total
: 2 h完工
曾几何时，转膜4度过夜，一抗4度过夜，第三天看结果。
【在 h******n 的大作中提到】
: 跑胶：200v， 30min
: 转膜：7 min (dry transfer)
: Blocking：(No blocking)
: 一抗：30 min
: 2抗：30min
: 洗：10 min total
: 2 h完工
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