promoter是不是比较难克隆？# Biology - 生物学
c*y
1 楼
how to enforce an object instance only be allocated on the stack rather than
the heap at compile time?
thanks a lot.
the heap at compile time?
thanks a lot.
r*o
2 楼
今天早上manager特别温柔滴叫楼主去小房间谈话，我们组budget cut要layoff三个人
，楼主就在其中。我们是业内臭名昭著每年都要大裁员的大公司，没想到这一天这么快
就轮到我了。其实我有一直在找工作，有一份dream job，已经过了2轮了，HM对我印象
也特别好，昨天刚和HR约了下周一的onsite面试，如果一切顺利的话感觉下个月就可以
出结果。可是今天就被华丽丽滴裁员了，不知道面试的时候该怎么说？
如果提自己被layoff， 会不会影响offer的薪水？如果不提自己被裁，background
check的时候怎么办呢？
还有关于失业金的问题，楼主绿卡，contract工作，做了将近三年，有资格领取失业金
吗？
，楼主就在其中。我们是业内臭名昭著每年都要大裁员的大公司，没想到这一天这么快
就轮到我了。其实我有一直在找工作，有一份dream job，已经过了2轮了，HM对我印象
也特别好，昨天刚和HR约了下周一的onsite面试，如果一切顺利的话感觉下个月就可以
出结果。可是今天就被华丽丽滴裁员了，不知道面试的时候该怎么说？
如果提自己被layoff， 会不会影响offer的薪水？如果不提自己被裁，background
check的时候怎么办呢？
还有关于失业金的问题，楼主绿卡，contract工作，做了将近三年，有资格领取失业金
吗？
i*t
3 楼
123
c*i
4 楼
没必然联系吧。。
打扮得再好脑中长草，时间久了也是被男人踢掉的料；
打扮再差但有思想又性格好，迟早也有男人相中。
爱情的真谛其实不在于你拥有什么，完全是看个人运气啊。两个人的互相吸引，有时候
，也不是靠一些有形的物体，更多的是无形的魅力。。
为自己努力就为自己努力呗。
越想找男人越找不到，就算找到也未必找的好。
打扮得再好脑中长草，时间久了也是被男人踢掉的料；
打扮再差但有思想又性格好，迟早也有男人相中。
爱情的真谛其实不在于你拥有什么，完全是看个人运气啊。两个人的互相吸引，有时候
，也不是靠一些有形的物体，更多的是无形的魅力。。
为自己努力就为自己努力呗。
越想找男人越找不到，就算找到也未必找的好。
g*e
5 楼
做飞机的时候 方便拿出来准备因特唯有。蛮好的
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d*i
6 楼
要克隆一个promoter出来，但是从genomic DNA做模板怎么都PCR不出来，好几天非特异带，每一个和预期大小一致的。梯度也做了，
Taq也换了。很郁闷啊！
有经验的指点一下！谢谢了！
Taq也换了。很郁闷啊！
有经验的指点一下！谢谢了！
l*c
7 楼
override operator new?????
than
【在 c***y 的大作中提到】
: how to enforce an object instance only be allocated on the stack rather than
: the heap at compile time?
: thanks a lot.
than
【在 c***y 的大作中提到】
: how to enforce an object instance only be allocated on the stack rather than
: the heap at compile time?
: thanks a lot.
z*n
8 楼
好像可以领失业金的。。。不过现在只有三个月了。。
i*i
9 楼
受不了了。版主来封了这个标题党吧！
你都发了多少个内容只要「123」的帖子了？这是有多需要关注啊？
你都发了多少个内容只要「123」的帖子了？这是有多需要关注啊？
C*1
10 楼
99%的男人是视觉动物，首先被外表吸引，BIO天性如此。“打扮再差但有思想又性格好
”，没有男人有兴趣来了解你，有多少机会被“男人相中”？
【在 c**i 的大作中提到】
: 没必然联系吧。。
: 打扮得再好脑中长草，时间久了也是被男人踢掉的料；
: 打扮再差但有思想又性格好，迟早也有男人相中。
: 爱情的真谛其实不在于你拥有什么，完全是看个人运气啊。两个人的互相吸引，有时候
: ，也不是靠一些有形的物体，更多的是无形的魅力。。
: 为自己努力就为自己努力呗。
: 越想找男人越找不到，就算找到也未必找的好。
”，没有男人有兴趣来了解你，有多少机会被“男人相中”？
【在 c**i 的大作中提到】
: 没必然联系吧。。
: 打扮得再好脑中长草，时间久了也是被男人踢掉的料；
: 打扮再差但有思想又性格好，迟早也有男人相中。
: 爱情的真谛其实不在于你拥有什么，完全是看个人运气啊。两个人的互相吸引，有时候
: ，也不是靠一些有形的物体，更多的是无形的魅力。。
: 为自己努力就为自己努力呗。
: 越想找男人越找不到，就算找到也未必找的好。
g*e
11 楼
突然想起自己还有台air 好像爱拍也不是很必要
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【在 g*********e 的大作中提到】
: 做飞机的时候 方便拿出来准备因特唯有。蛮好的
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【在 g*********e 的大作中提到】
: 做飞机的时候 方便拿出来准备因特唯有。蛮好的
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a*k
12 楼
买个含你需要的这个片段的BAC
异带，每一个和预期大小一致的。梯度也做了，
【在 d****i 的大作中提到】
: 要克隆一个promoter出来，但是从genomic DNA做模板怎么都PCR不出来，好几天非特异带，每一个和预期大小一致的。梯度也做了，
: Taq也换了。很郁闷啊！
: 有经验的指点一下！谢谢了！
异带，每一个和预期大小一致的。梯度也做了，
【在 d****i 的大作中提到】
: 要克隆一个promoter出来，但是从genomic DNA做模板怎么都PCR不出来，好几天非特异带，每一个和预期大小一致的。梯度也做了，
: Taq也换了。很郁闷啊！
: 有经验的指点一下！谢谢了！
l*c
13 楼
private new operator
than
【在 c***y 的大作中提到】
: how to enforce an object instance only be allocated on the stack rather than
: the heap at compile time?
: thanks a lot.
than
【在 c***y 的大作中提到】
: how to enforce an object instance only be allocated on the stack rather than
: the heap at compile time?
: thanks a lot.
k*s
14 楼
不要领那个钱，有纪录太难看了
j*n
15 楼
已经发信提醒
【在 i***i 的大作中提到】
: 受不了了。版主来封了这个标题党吧！
: 你都发了多少个内容只要「123」的帖子了？这是有多需要关注啊？
【在 i***i 的大作中提到】
: 受不了了。版主来封了这个标题党吧！
: 你都发了多少个内容只要「123」的帖子了？这是有多需要关注啊？
c*i
16 楼
（：道理当然是如此。
所以说纯粹是运气。
【在 C***1 的大作中提到】
: 99%的男人是视觉动物，首先被外表吸引，BIO天性如此。“打扮再差但有思想又性格好
: ”，没有男人有兴趣来了解你，有多少机会被“男人相中”？
所以说纯粹是运气。
【在 C***1 的大作中提到】
: 99%的男人是视觉动物，首先被外表吸引，BIO天性如此。“打扮再差但有思想又性格好
: ”，没有男人有兴趣来了解你，有多少机会被“男人相中”？
a*a
17 楼
换一下酶和pcr程序试试，好像kod fx不错
我们实验室的标准protocol是
每p一个cycle+20s，30cycle，能放出若干大片段。
常规pcr无论如何放不出来。
不过promoter确实比较难
我们实验室的标准protocol是
每p一个cycle+20s，30cycle，能放出若干大片段。
常规pcr无论如何放不出来。
不过promoter确实比较难
c*y
18 楼
what does this mean? this leads to failure of calling new operator?
【在 l******c 的大作中提到】
: private new operator
:
: than
【在 l******c 的大作中提到】
: private new operator
:
: than
d*0
19 楼
失业保险可以领
【在 k*********s 的大作中提到】
: 不要领那个钱，有纪录太难看了
【在 k*********s 的大作中提到】
: 不要领那个钱，有纪录太难看了
y*0
20 楼
这个运气其实可以改变的，好好捣拾捣拾比打扮的差等运气要容易多了。。
【在 c**i 的大作中提到】
: （：道理当然是如此。
: 所以说纯粹是运气。
【在 c**i 的大作中提到】
: （：道理当然是如此。
: 所以说纯粹是运气。
d*i
21 楼
非常感谢2位！
g*y
22 楼
i guess you can pre-allocate some memory in compile time, and then manage
that memory yourself (memory pool alloc/free), and then redefine the new
operator (class specific operator new)
【在 c***y 的大作中提到】
: what does this mean? this leads to failure of calling new operator?
that memory yourself (memory pool alloc/free), and then redefine the new
operator (class specific operator new)
【在 c***y 的大作中提到】
: what does this mean? this leads to failure of calling new operator?
k*s
23 楼
Wells Fargo background check就要我填这个表
包括本人或家属，近期领过失业金和食品券
【在 d*****0 的大作中提到】
: 失业保险可以领
包括本人或家属，近期领过失业金和食品券
【在 d*****0 的大作中提到】
: 失业保险可以领
c*i
24 楼
打扮漂亮容易有烂桃花。。
我最烦这种不喜欢的男的偏偏过来搭讪，比没人搭讪更麻烦的事，不清净。。
呵呵
【在 y********0 的大作中提到】
: 这个运气其实可以改变的，好好捣拾捣拾比打扮的差等运气要容易多了。。
我最烦这种不喜欢的男的偏偏过来搭讪，比没人搭讪更麻烦的事，不清净。。
呵呵
【在 y********0 的大作中提到】
: 这个运气其实可以改变的，好好捣拾捣拾比打扮的差等运气要容易多了。。
j*x
25 楼
promoter区的主要困难在于一般GC content都比较高，所以需要特殊的酶和buffer，这
个版上之前应该讨论过多次了，好几种候选。
BTW，转录起始位点上游1-2kb基本上就涵盖了绝大部分的TF binding sites了（当然特
例也有），所以一开始别太贪心，一上来就打算P个5kb什么的，那就没谱了。
此外，序列已知的话，直接合成序列也是一个办法，如果实在弄不出来
个版上之前应该讨论过多次了，好几种候选。
BTW，转录起始位点上游1-2kb基本上就涵盖了绝大部分的TF binding sites了（当然特
例也有），所以一开始别太贪心，一上来就打算P个5kb什么的，那就没谱了。
此外，序列已知的话，直接合成序列也是一个办法，如果实在弄不出来
B*t
26 楼
There are 3 memory storage types for c++ to allocate memory for an object.
1. stack memory for object inside a function.
2. static storage for namespace-scope objects and local static objects
3. heap storage for dynamically-allocated objects.
If the stack in you problem refers to the first type of memory storage,
there is only one method that you could do this, which is defining a
function, allocating memory for an object inside a function, and using it.
You cannot use it outside of a function.
【在 c***y 的大作中提到】
: how to enforce an object instance only be allocated on the stack rather than
: the heap at compile time?
: thanks a lot.
1. stack memory for object inside a function.
2. static storage for namespace-scope objects and local static objects
3. heap storage for dynamically-allocated objects.
If the stack in you problem refers to the first type of memory storage,
there is only one method that you could do this, which is defining a
function, allocating memory for an object inside a function, and using it.
You cannot use it outside of a function.
【在 c***y 的大作中提到】
: how to enforce an object instance only be allocated on the stack rather than
: the heap at compile time?
: thanks a lot.
y*0
27 楼
haha..mm长得漂亮，真好。。那也不能因为这个原因不捣拾 啊。。
【在 c**i 的大作中提到】
: 打扮漂亮容易有烂桃花。。
: 我最烦这种不喜欢的男的偏偏过来搭讪，比没人搭讪更麻烦的事，不清净。。
: 呵呵
【在 c**i 的大作中提到】
: 打扮漂亮容易有烂桃花。。
: 我最烦这种不喜欢的男的偏偏过来搭讪，比没人搭讪更麻烦的事，不清净。。
: 呵呵
t*z
28 楼
可以做nested PCR，先批出含有启动子的一段较宽的区域，然后把这个产物用作下一轮
的模板，来批出启动子本身。这样，就避免了启动子区域比较难批的困扰。
的模板，来批出启动子本身。这样，就避免了启动子区域比较难批的困扰。
f*4
29 楼
effective c++ & more effective c++上有讨论
如果禁止一个对象在stack上生成；把析构函数声明成私有函数
如果只想在heap上生成；构造函数声明成私有；同时提供虚拟构造函数（这里不是指
virtual constructor,而是指用factory patterns生成对象）
如果禁止一个对象在stack上生成；把析构函数声明成私有函数
如果只想在heap上生成；构造函数声明成私有；同时提供虚拟构造函数（这里不是指
virtual constructor,而是指用factory patterns生成对象）
c*i
30 楼
不漂亮吧
是打扮一下还过得去而已
【在 y********0 的大作中提到】
: haha..mm长得漂亮，真好。。那也不能因为这个原因不捣拾 啊。。
是打扮一下还过得去而已
【在 y********0 的大作中提到】
: haha..mm长得漂亮，真好。。那也不能因为这个原因不捣拾 啊。。
C*h
31 楼
先用几种restriction enzymes，把genomic DNA降解成小片断 (<100 kb)，
选择不降解你的promoter sequence的几种常用酶。
然后，用这个初步降解的genomic DNA作摸版，PCR你的promoter，
摸版的DNA量不要低于100 ng per reaction。
异带，每一个和预期大小一致的。梯度也做了，
【在 d****i 的大作中提到】
: 要克隆一个promoter出来，但是从genomic DNA做模板怎么都PCR不出来，好几天非特异带，每一个和预期大小一致的。梯度也做了，
: Taq也换了。很郁闷啊！
: 有经验的指点一下！谢谢了！
选择不降解你的promoter sequence的几种常用酶。
然后，用这个初步降解的genomic DNA作摸版，PCR你的promoter，
摸版的DNA量不要低于100 ng per reaction。
异带，每一个和预期大小一致的。梯度也做了，
【在 d****i 的大作中提到】
: 要克隆一个promoter出来，但是从genomic DNA做模板怎么都PCR不出来，好几天非特异带，每一个和预期大小一致的。梯度也做了，
: Taq也换了。很郁闷啊！
: 有经验的指点一下！谢谢了！
c*y
32 楼
what's your point?
we want to get an object instance on Stack, your methods are reverse?
【在 f****4 的大作中提到】
: effective c++ & more effective c++上有讨论
: 如果禁止一个对象在stack上生成；把析构函数声明成私有函数
: 如果只想在heap上生成；构造函数声明成私有；同时提供虚拟构造函数（这里不是指
: virtual constructor,而是指用factory patterns生成对象）
we want to get an object instance on Stack, your methods are reverse?
【在 f****4 的大作中提到】
: effective c++ & more effective c++上有讨论
: 如果禁止一个对象在stack上生成；把析构函数声明成私有函数
: 如果只想在heap上生成；构造函数声明成私有；同时提供虚拟构造函数（这里不是指
: virtual constructor,而是指用factory patterns生成对象）
t*9
33 楼
奔一个看看撒
【在 c**i 的大作中提到】
: 不漂亮吧
: 是打扮一下还过得去而已
【在 c**i 的大作中提到】
: 不漂亮吧
: 是打扮一下还过得去而已
d*i
34 楼
三位的办法都很好！学习了！非常感谢！
a*l
35 楼
To prohibit heap-based objects, we can declare operator new (and operator
delete) as private since it is called by the new operator.
delete) as private since it is called by the new operator.
c*i
36 楼
又来。。
看来叫我奔的呼声此起彼伏啊
不奔过意不去
我决定奔了
请去时尚守候
【在 t****9 的大作中提到】
: 奔一个看看撒
看来叫我奔的呼声此起彼伏啊
不奔过意不去
我决定奔了
请去时尚守候
【在 t****9 的大作中提到】
: 奔一个看看撒
l*9
37 楼
mark~ 不错不错~
t*9
38 楼
好滴
【在 c**i 的大作中提到】
: 又来。。
: 看来叫我奔的呼声此起彼伏啊
: 不奔过意不去
: 我决定奔了
: 请去时尚守候
【在 c**i 的大作中提到】
: 又来。。
: 看来叫我奔的呼声此起彼伏啊
: 不奔过意不去
: 我决定奔了
: 请去时尚守候
d*y
39 楼
不长的话 直接合成吧。
w*e
40 楼
酒香还怕巷子深。
不过，你丫是不是FASHION的托儿啊？
不过，你丫是不是FASHION的托儿啊？
f*e
41 楼
为啥不能打扮得再好，但有思想又性格好，脑中有料？：）
不是为了男人，自己看着自己不顺眼吗？有空写个文青文自己不也得意吗？
不是为了男人，自己看着自己不顺眼吗？有空写个文青文自己不也得意吗？
a*2
42 楼
恩，其实挺同意你的说法
【在 c**i 的大作中提到】
: 没必然联系吧。。
: 打扮得再好脑中长草，时间久了也是被男人踢掉的料；
: 打扮再差但有思想又性格好，迟早也有男人相中。
: 爱情的真谛其实不在于你拥有什么，完全是看个人运气啊。两个人的互相吸引，有时候
: ，也不是靠一些有形的物体，更多的是无形的魅力。。
: 为自己努力就为自己努力呗。
: 越想找男人越找不到，就算找到也未必找的好。
【在 c**i 的大作中提到】
: 没必然联系吧。。
: 打扮得再好脑中长草，时间久了也是被男人踢掉的料；
: 打扮再差但有思想又性格好，迟早也有男人相中。
: 爱情的真谛其实不在于你拥有什么，完全是看个人运气啊。两个人的互相吸引，有时候
: ，也不是靠一些有形的物体，更多的是无形的魅力。。
: 为自己努力就为自己努力呗。
: 越想找男人越找不到，就算找到也未必找的好。
T*8
43 楼
脑中有料和有思想都不是普通男人看重的
他们喜欢打扮好而且性格温柔的，没了。。再加上会做饭。。
不过“时间久了也是被男人踢掉的料”好像也有可能噢
他们喜欢打扮好而且性格温柔的，没了。。再加上会做饭。。
不过“时间久了也是被男人踢掉的料”好像也有可能噢
I*e
44 楼
这个道理是很practical的道理...根本不纯粹是运气.
【在 c**i 的大作中提到】
: （：道理当然是如此。
: 所以说纯粹是运气。
【在 c**i 的大作中提到】
: （：道理当然是如此。
: 所以说纯粹是运气。
L*m
45 楼
想吸引男人要靠打扮的，真的
l*y
46 楼
打扮是吸引男生的第一步，有思想有内涵是让男人学会真正地尊重和欣赏 ：D
s*e
47 楼
化妆品在脸上久了会让皮肤的质量越来越差。美女么化个淡妆不损害皮肤为前提。
f*e
48 楼
未必是化妆了，可能是穿衣打扮。
【在 s******e 的大作中提到】
: 化妆品在脸上久了会让皮肤的质量越来越差。美女么化个淡妆不损害皮肤为前提。
【在 s******e 的大作中提到】
: 化妆品在脸上久了会让皮肤的质量越来越差。美女么化个淡妆不损害皮肤为前提。
s*e
49 楼
素面朝天的女人应该很有勇气和自信的。锦上添花当然最好。翻没翻VERA WANG的网页
？每个女人都想要她的衣服。
【在 f*********e 的大作中提到】
: 未必是化妆了，可能是穿衣打扮。
？每个女人都想要她的衣服。
【在 f*********e 的大作中提到】
: 未必是化妆了，可能是穿衣打扮。
c*k
50 楼
内外兼修哈
w*u
51 楼
我以为你是人妖..
潜水员飘~
【在 c**i 的大作中提到】
: 打扮漂亮容易有烂桃花。。
: 我最烦这种不喜欢的男的偏偏过来搭讪，比没人搭讪更麻烦的事，不清净。。
: 呵呵
潜水员飘~
【在 c**i 的大作中提到】
: 打扮漂亮容易有烂桃花。。
: 我最烦这种不喜欢的男的偏偏过来搭讪，比没人搭讪更麻烦的事，不清净。。
: 呵呵
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