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site-directed mutagenesis用13 kb的plasmid能成吗？

site-directed mutagenesis用13 kb的plasmid能成吗？# Biology - 生物学

p*e2011-09-15 07:09

1 楼

all of us are not easy for gc and sometimes have emotions.
so I blocked dreamer321 and manbeing for 1 days as warning.
sorry dude.both of you are important to eb23. but rule is rule

s*12011-09-15 07:09

2 楼

翻译：Susanne Ching
来自：http://www.elle.com.hk/astrology/susan_miller
【白羊座】
太阳、天王星、火星、金星和新月五大幸运星正由摩羯座转移到双鱼座，并准备在10日
进入白羊座，令众人留意到你的存在；你掌控大局的能力会大增，旁人都纷纷向你寻求
方向和动力。太阳和木星的完美合奏，令你在４月的首三个星期恋爱运大顺；当金星和
火星在6日相遇，你将散发无可抗拒的魅力。记得事业上需脚踏实地，火星在19日前都
会送上你想要的能量，所以最好在10日前做好准备功课，等待时机，一击即中。25日的
满月蚀令你将注意力放到财务上，可能有机会找到新的收入来源，但需要检查一切细节
。
【金牛座】
单身的金牛座如想找伴侣，4月可能要等一等了。虽然你的守护星金星在6日和火星连结
，但星宿的叛逆面却向你发出隐秘的能量，所以本月要避免冒险。事实上，你找寻新伴
侣的希望在4月会受阻。虽然恋爱不顺，但只要将心情转向寻求个人的满足，之后仍有
机会找到快乐的。25日的满月蚀，最亲密的关係走到决裂边缘，逼你正视双方的深层感
受；你可能会和他告别，但要相信这决定对你们都好。尚未有约会对象的，宜将心神放
于事业上，有可能找新的工作伙伴，或者和现时拍档分道扬镳。无论你的状况如何，都
谨记火星在20日进入金牛座后，会开始两年的新周期，那时宇宙的能量对你的眷顾将少
之又少。
【双子座】
你的４月将会是轻鬆、有趣和极具诱惑性的。金星和火星在6日的相遇极其精采，你的
一位友人将担任红娘或替你找寻事业机会的角色。新月罕有地为你送上社交的能量，事
情在10日将会变得更好；你可能会和旧相识重会，找到事业上的新盟友，或者是享受家
庭以外的好时光。23日，你的守护星水星和木星形成优美的角度，这天无论任何事情都
会朝对你有利的方向发展。25日的满月蚀能量稍有改变，你极可能需要关注健康状况，
而星宿的力量会支持你度过考验。财政稍见紧绌，你最好预留后备资金，应付突如其来
的医疗费用。
【巨蟹座】
众星在白羊座齐集，显示你将得到一个需要认真考虑的工作机会，藉10日新月的能量，
你可轻易地为未来最少一年的事业订定计划。火星在本月扮演领导的角色，给你极具影
响力的能量。金星向你移近，显示你的意念将获得支持，如果伙伴和你不能达成共识，
你大可独自进行计划，将会得到胜利。最终，你将会发现自己已晋身在一个重要的新职
位上。25日的满月蚀对你尤其重要，它引领你的恋爱和社交；如果你正在约会，将不断
收到消息，令你对约会对象感觉混乱，你需要在月尾的周末立即採取行动，记得清空这
几天的日程，保留精力处理突发问题。
【狮子座】
4月你极有可能受新的旅游地点吸引，最佳旅游日是10日。如果你不打算外游，生活重
心将会是学习和扩阔眼界，你所学的将有利于事业。由于火星进入你的名誉宫，你的事
业发展会如火如荼；25日的满月蚀则会点亮你的家庭和房产宫。你可能因工作需要搬家
，或者家裡有大事等你决定。28日，你的守护星太阳对抗土星，接近25日，所有隐藏的
事情逐一浮面，可能需要在短时间内下众多决定，所以当天不要安排任何日程。
【处女座】
四大星宿云集在你掌管他人金钱的宫位，加上10日的新月，令你在4月的首三个星期都
集中处理财务问题。你正在事业上的强劲周期，水星在20日和天才之星天王星相连，令
这天成为你的最佳脑震盪日。23日，水星和木星连繫，为你在办公室带来一股正面的能
量。注意在25日前要完成一切重要的事，当满月蚀在天蝎座出现时，你会收到一个好消
息，可能是和长期合作伙伴、姊妹或女亲戚有关的，或者是一次浪漫的探访。你将会收
到大量资讯，有些可能令你感到意外，必须小心处理。
【天秤座】
太阳、金星、火星、天王星，以及10日的新月齐集在白羊座，对你不利。要扭转运气，
你大可和别人合作处理计划，挑选精力充沛和具领袖魅力的人作为合作伙伴，便可将星
宿支持他人的力量收为己用。如果你有长期合作的伙伴，整个4月裡，他将会在你的生
活上佔有非常重要的位置；无论是你的个人决定，抑或是你俩的共识，都将对你产生长
远的影响。25日的满月蚀，令你和他人的对话全集中于财务事宜。土星移向月蚀的轨迹
，无论你等待的是加薪、税单或者其他帐务问题，都应保持务实的态度，答案会在月蚀
的一星期内出现。
【天蝎座】
众星齐集在白羊座，朝你的第六宫进发，令你本已忙碌的工作更百上加斤。新企划有可
能令你在行内声名鹊起。由于第六宫同时管理你的健康，暗示你需要平静心神，应付繁
忙的工作。接近月底，25日的满月蚀也会令你的日子不好过，你需要以最佳状态面对一
切。土星步近，好些突如其来的事有助你事业更上层楼，或者你需要就未来的伙伴问题
下决定。这情况同样出现在友谊和爱情上，而你也必须面对，不应逃避。借助冥王星和
众星的力量，加上太阳处于上佳角度，你到月底会变得更坚强。
【射手座】
五大星宿进入了你的恋爱宫，你的4月浪漫不断，6日是你的最佳恋爱日。如果你在这日
结识到新对象，他将会是你梦寐以求的：刺激、爱冒险、充满幽默感。如果你已经很久
没有约会，这天将是你重踏情场的好日子。要留意冥王星不怀好意，当你约会时，勿过
度花费。25日的满月蚀带来重大的事业改变，由于月亮出现在你的幕后宫位，显示过往
你所学到的，将会无用武之地，同时对你找外快的收入来源也有影响。对于部分射手座
来说，这次的满月可能会带来医疗问题，假如这不是发生在你的身上，则会和一位女亲
友有关，你最好预留时间处理。
【摩羯座】
你将会有大量紧急处理的问题：家居、房产及家庭，特别在10日的新月之后将会更为显
著，由于你手持有利五大星座齐集白羊座，显示一切将会全速进行。金星和火星在6日
热情地相遇，你将会充满创意，而最浪漫的时刻则会在家中出现。月底，你会将注意力
重新集中在朋友身上。25日的满月蚀进入了你的交友宫，你会手持所有的答案，虽然土
星在虎视眈眈，准备给你生命的教训，但不用担心，无论发生何事，火星和冥王星都会
带给你明智的解决办法。你肯定会遇到挑战，但要冷静应对，下月将会是你期待已久的
浪漫月份。
【水瓶座】
踏入4月，你会开展非常重要的对话及商议一个重要企划，令你的事业进入新阶段。五
大星宿（包括10日的新月）进入白羊座，引领你的沟通和创作能力，随着企划的进展，
你将会领导许多人。金星在你的旅游宫和火星在6日相遇，显示这个周末你极有可能旅
游，而这将会是一个浪漫之旅。20日，你将会收到一位家庭成员的坏消息；25日的满月
蚀将一切都浮现出来，你将会感到压力增加。加上土星步近，令事态发展更严重，所以
你极有可能收到连串坏消息。犹幸土星有利稳定，令你在这个事业的重要时刻不致情况
太坏。
【双鱼座】
4月开始，你的注意力将集中在现金流、收入或者是其他财政事宜上。五大星宿齐集在
白羊座，在管理你财政的宫位，令一股强大的力量成形，有助你增加收入。20日，你在
一项有关个人或事业的计划中注入创意，虽然不是为了金钱而做，但这次的经验将有助
你开拓视野。25日的满月蚀进入天蝎座，接近土星，预期这将会带来少许麻烦，而你也
会感到日常责任变得更具压迫性。犹幸海王星在附近支持你，令你得以专注和精力充沛
，无惧土星在28日挑战太阳，注意不要给自己太大压力。

p*e2011-09-15 07:09

3 楼

最近网上报道，好莱坞大片《355》，就是由《X战警》导演西蒙·金博格将执导的谍
战片，原定范冰冰出演。现在有消息称，章子怡将代替范冰冰参演这样的作品。这是落
实冰冰出事了吗？
不过国际章本来就是走国际路线的，出现国际大片很正常，只不过替代冰冰出演，这么
好的资源冰冰错过了，再进军国际影坛估计要艰辛一些。不过祸不单行，最近网上爆料
大黑牛李晨摘到婚戒，疑似分手了，不知道是不是真事，还是吃瓜群众为了博眼球报道
的八卦消息。
不过娱乐圈的事情本来就不好说，不过感觉范爷和黑牛还是很般配的。

r*y2011-09-15 07:09

4 楼

是不是plasmid太长了，还是最好先到TA vector里再克隆到 gateway？

a*x2011-09-15 07:09

5 楼

说国语！

【在 p***e 的大作中提到】

: all of us are not easy for gc and sometimes have emotions.
: so I blocked dreamer321 and manbeing for 1 days as warning.
: sorry dude.both of you are important to eb23. but rule is rule

s*a2011-09-15 07:09

6 楼

娱乐圈本来就是这样，只有利益没有感情的。

s*s2011-09-15 07:09

7 楼

No problem if using Strategene site-directed mutagenesis kit.
Pick up couple of clones to confirm the protein expression or do sequencing.

【在 r******y 的大作中提到】

: 是不是plasmid太长了，还是最好先到TA vector里再克隆到 gateway？

p*e2011-09-15 07:09

8 楼

can't input chinese

【在 a***x 的大作中提到】

: 说国语！

r*y2011-09-15 07:09

9 楼

谢谢，是用的quickchange II，annealing 13 min，但是没有colony....

sequencing.

【在 s**s 的大作中提到】

: No problem if using Strategene site-directed mutagenesis kit.
: Pick up couple of clones to confirm the protein expression or do sequencing.

g*w2011-09-15 07:09

10 楼

what is PA?

s*s2011-09-15 07:09

11 楼

Increasing the amount of template to 150 ng might be helpful.
Increasing the annealing time to 15 min.
Also the quality of competent cells are important.
Good luck!

【在 r******y 的大作中提到】

: 谢谢，是用的quickchange II，annealing 13 min，但是没有colony....
:
: sequencing.

m*l2011-09-15 07:09

12 楼

personal attack,
baozi

【在 g*******w 的大作中提到】

: what is PA?

r*y2011-09-15 07:09

13 楼

thanks! it suggests 10 ng so i thought more might supress te reaction. will
try again! will give u baozi if i got colonies. :)

【在 s**s 的大作中提到】

: Increasing the amount of template to 150 ng might be helpful.
: Increasing the annealing time to 15 min.
: Also the quality of competent cells are important.
: Good luck!

c*l2011-09-15 07:09

14 楼

宾夕法尼亚

【在 g*******w 的大作中提到】

: what is PA?

f*u2011-09-15 07:09

15 楼

recombineering可能更好

【在 r******y 的大作中提到】

: 是不是plasmid太长了，还是最好先到TA vector里再克隆到 gateway？

a*x2011-09-15 07:09

16 楼

no way

【在 p***e 的大作中提到】

: can't input chinese

i*n2011-09-15 07:09

17 楼

我觉得他们俩是因为太无聊了，
太闲了，
一个胆小的害怕倒退，
一个不切实际的空想，
有那么多空，干嘛不去支持3012呢？

r*f2011-09-15 07:09

18 楼

害怕倒退的还是个已经交了485的。。。。。

【在 i********n 的大作中提到】

: 我觉得他们俩是因为太无聊了，
: 太闲了，
: 一个胆小的害怕倒退，
: 一个不切实际的空想，
: 有那么多空，干嘛不去支持3012呢？

m*t2011-09-15 07:09

19 楼

好像有个什么firefox得script可以不显示某些ID得帖子，那位还记得？

【在 p***e 的大作中提到】

: all of us are not easy for gc and sometimes have emotions.
: so I blocked dreamer321 and manbeing for 1 days as warning.
: sorry dude.both of you are important to eb23. but rule is rule

B*g2011-09-15 07:09

20 楼

云计算呀云计算
http://ime.baidu.com/online.html
http://pinyin.sogou.com/cloud/

【在 p***e 的大作中提到】

: can't input chinese