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问个关于bradford protein assay的问题

问个关于bradford protein assay的问题# Biology - 生物学

C*s2011-10-25 07:10

1 楼

莉娃。三季以来跳舞最棒的，小黑哥真是相当的惋惜。
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 1.0

F*22011-10-25 07:10

2 楼

在bradford protein assay中，先设置一个standard curve, 但是用作standard的蛋白
和需要测的蛋白不是一种蛋白。
那么，我设standard curve （不同蛋白浓度下的595nm Reading）时，浓度单位应该用
mol/L 还是mg/mL? (以便与sample蛋白的595值对比）
感觉应该用mol/L吧，因为sample蛋白和standard蛋白每mg中含的蛋白量不一样啊

M*s2011-10-25 07:10

3 楼

遗

r*e2011-10-25 07:10

4 楼

当然是mg/ml了，同样mol的大分子吸得多，所以和质量有关。

【在 F*******2 的大作中提到】

: 在bradford protein assay中，先设置一个standard curve, 但是用作standard的蛋白
: 和需要测的蛋白不是一种蛋白。
: 那么，我设standard curve （不同蛋白浓度下的595nm Reading）时，浓度单位应该用
: mol/L 还是mg/mL? (以便与sample蛋白的595值对比）
: 感觉应该用mol/L吧，因为sample蛋白和standard蛋白每mg中含的蛋白量不一样啊

l*k2011-10-25 07:10

5 楼

都可以的呀。

【在 F*******2 的大作中提到】

A*d2011-10-25 07:10

6 楼

质量，不是摩尔数。和氨基酸的量有关

Z*52011-10-25 07:10

7 楼

应该是质量。不过感觉bradford不怎么好用，还不如用BCA，买个kit，也不贵，很方
便。

t*x2011-10-25 07:10

8 楼

回lz:是质量
另问：能说说为啥bradford不如BCA好用么？俺觉得挺方便的啊，至少不像BCA要
incubate啊

【在 Z******5 的大作中提到】

: 应该是质量。不过感觉bradford不怎么好用，还不如用BCA，买个kit，也不贵，很方
: 便。

m*m2011-10-25 07:10

9 楼

bradford is not compatible with some common ingredients in lysis buffer,
such as 1% NP-40

F*p2011-10-25 07:10

10 楼

bradford is very unreliable. In many samples, variations between triplicates
are REALLY big.

f*n2011-10-25 07:10

11 楼

发信人: squirrabbit (松鼠兔), 信区: Biology
标题: 也问问bradford法测量蛋白浓度
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Oct 26 06:14:12 2011, 美东)
是每次都要做标准曲线吗？那也太麻烦了吧
我们实验室的做法：167ul的BioRad的bradford溶液加833ul水，混好加1ul稀释的样品
，用空白的样品调零，595nm测得的读数，每0.06算1ug／ul。读数最好不低于0.1，不
高于0.6, 高了就稀释样品。
这个误差是不是很大啊？一直对这个protocol不放心，不过大家都是这么测的。
发信人: squirrabbit (松鼠兔), 信区: Biology
标题: Re: 也问问bradford法测量蛋白浓度
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Oct 26 06:36:57 2011, 美东)
那做一次标准曲线是不是可以一直用啊？
我看biorad的instruction manual给出了bsa和IgG的标准曲线啊