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问个TOPO TA cloning的问题 诡异！
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问个TOPO TA cloning的问题 诡异！# Biology - 生物学
r*y
1 楼
我用的是NEB Phusion HF MM做的PCR 然后直接用去TA cloning了 后来一看这种应该是
blunt end 可是我竟然得到很多克隆 提了质粒送去测序也正确 可是理论上应该连接不
上才对啊 因为没有那个A 谁能解释一下这是咋回事儿？难道是因为我的gene最后一个
是A？@@
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r*y
2 楼
也不对 那个A也不是overhanging的。。。

【在 r******y 的大作中提到】
: 我用的是NEB Phusion HF MM做的PCR 然后直接用去TA cloning了 后来一看这种应该是
: blunt end 可是我竟然得到很多克隆 提了质粒送去测序也正确 可是理论上应该连接不
: 上才对啊 因为没有那个A 谁能解释一下这是咋回事儿？难道是因为我的gene最后一个
: 是A？@@
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n*w
3 楼
你的topo kit 应该是可以插blunt的吧，不用加A
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j*l
4 楼
如果测序结果显示PCR产物3‘端的确多出一个A的话，那只能说明你用的酶本来就可以
在PCR末端多加一个A，虽然它的产物大部分都是blunt end的。
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b*r
5 楼
本来就没有绝对的吧，没有overhang只是说大大降低效率，还是有连得上的
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