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坑爹的冰冻切片！！！

坑爹的冰冻切片！！！# Biology - 生物学

a*a2012-02-10 08:02

1 楼

1 西芹炒笋干肉皮
笋干要泡水里至少两天,直到变软,隔夜要换水
切成笋片
肉皮是超市里买的油炸肉皮,炒之前1个小时泡水就好,切片
顺序是,先炒笋干,再放肉皮,最后快起锅的时候放入西芹,简单炒炒,加盐,鸡精,少许糖
2 海米丝瓜
丝瓜是自家院子里新鲜采摘的
辅助材料:虾米和葱花
3 花枝豆角
花枝切半容易入味,豆角是菜园里新鲜采摘的,呵呵
Thanks for watching! :)

K*g2012-02-10 08:02

2 楼

刚刚amazon电话面试了，非常糟糕。题目很简单，又死在边界问题上。
在一个数组中找到第二大的非重复的数。要求当场coding，在一个边界问题上缠了差不
多半个小时。肯定是死定了。上次facebook也是这样子的，死在一个边界问题上。
最有意思的是，两个面试的人都是美国人，都叫Ben .

p*d2012-02-10 08:02

3 楼

这乳腺的冰冻切片文章里面天天见啊，自己怎么就做不出来呢！那么多的fat，怎么切
都碎碎碎啊！！！！气死我了，有木有，有木有！！！！！

d*32012-02-10 08:02

4 楼

好味啊，这些都是广东菜哦

b*t2012-02-10 08:02

5 楼

ben...

【在 K******g 的大作中提到】

: 刚刚amazon电话面试了，非常糟糕。题目很简单，又死在边界问题上。
: 在一个数组中找到第二大的非重复的数。要求当场coding，在一个边界问题上缠了差不
: 多半个小时。肯定是死定了。上次facebook也是这样子的，死在一个边界问题上。
: 最有意思的是，两个面试的人都是美国人，都叫Ben .

M*n2012-02-10 08:02

6 楼

一定要cryo吗？
parafin 可以吗？
那个容易切。

【在 p******d 的大作中提到】

: 这乳腺的冰冻切片文章里面天天见啊，自己怎么就做不出来呢！那么多的fat，怎么切
: 都碎碎碎啊！！！！气死我了，有木有，有木有！！！！！

p*y2012-02-10 08:02

7 楼

赞丝瓜和豆角

g*n2012-02-10 08:02

8 楼

电话面试怎么当场coding？

【在 K******g 的大作中提到】

p*d2012-02-10 08:02

9 楼

想看YFP啊。做YFP的paraffin的staining不work啊！！！前两天还上来问来着的。忒悲
催了！！！

O*a2012-02-10 08:02

10 楼

我要来替广东菜正名：这些绝对不是广东菜，随便你说是福建还是哪里的都好，不是广
东的... - -b

K*g2012-02-10 08:02

11 楼

我现在对coding有一种恐惧感，其实都是很简单的问题，平时的话很快就做出来了。
他后面问我的问题，我全都答出来了。
好郁闷啊。。。不过平时经常出bug，都是靠调试后才改正的，但是这种当场coding，
我基本就碰到了死结。。。

【在 g****n 的大作中提到】

: 电话面试怎么当场coding？

M*n2012-02-10 08:02

12 楼

GFP antibody should work on YFP

【在 p******d 的大作中提到】

: 想看YFP啊。做YFP的paraffin的staining不work啊！！！前两天还上来问来着的。忒悲
: 催了！！！

a*a2012-02-10 08:02

13 楼

的确不是广东菜, 第一个是江西菜
后面两个是四面八方菜 :p

【在 O*****a 的大作中提到】

: 我要来替广东菜正名：这些绝对不是广东菜，随便你说是福建还是哪里的都好，不是广
: 东的... - -b

s*l2012-02-10 08:02

14 楼

很多方法
读code
用gtalk google document共享 email 。。。

【在 g****n 的大作中提到】

: 电话面试怎么当场coding？

p*d2012-02-10 08:02

15 楼

试了两个，一个clontech的JL-8，一个molecular probe的不记得号了。都不行啊。

R*s2012-02-10 08:02

16 楼

不错啊，赞自家种的菜。。。

【在 a****a 的大作中提到】

: 1 西芹炒笋干肉皮
: 笋干要泡水里至少两天,直到变软,隔夜要换水
: 切成笋片
: 肉皮是超市里买的油炸肉皮,炒之前1个小时泡水就好,切片
: 顺序是,先炒笋干,再放肉皮,最后快起锅的时候放入西芹,简单炒炒,加盐,鸡精,少许糖
: 2 海米丝瓜
: 丝瓜是自家院子里新鲜采摘的
: 辅助材料:虾米和葱花
: 3 花枝豆角
: 花枝切半容易入味,豆角是菜园里新鲜采摘的,呵呵

P*b2012-02-10 08:02

17 楼

这个题不是遍历吗？没啥下标的问题。

【在 K******g 的大作中提到】

p*d2012-02-10 08:02

18 楼

我也觉得挺奇怪的，这个YFP应该也蛮多人用的，版上也有人推荐了JL-8，咋我做出来
就都是背景呢，阳性和阴性的没啥差别，就坏死的组织在在那里闪闪发光。

a*a2012-02-10 08:02

19 楼

谢变叔 :)

【在 R*****s 的大作中提到】

: 不错啊，赞自家种的菜。。。

m*g2012-02-10 08:02

20 楼

是呀
这个可以用笨办法遍历2遍如何？

M*s2012-02-10 08:02

21 楼

说说你是咋固定包埋切片的尼
俺们帮你看看

B*e2012-02-10 08:02

22 楼

看着都很清爽啊

【在 a****a 的大作中提到】

: 谢变叔 :)

P*l2012-02-10 08:02

23 楼

pass 1. remove all duplicated numbers. o(n)
pass 2. find the second largest one. o(n)
you can combine them to one round, but still o(n)

n*w2012-02-10 08:02

24 楼

YFP不知道，但是我们用的prefer fixative会kill GFP signal。

B*e2012-02-10 08:02

25 楼

到底如何分辨是还是不是广东菜啊？
还有，广东这么大，不是还有潮州，客家神马的也独自成一个小菜系吗？
那些都算广义广东菜么？

【在 O*****a 的大作中提到】

: 我要来替广东菜正名：这些绝对不是广东菜，随便你说是福建还是哪里的都好，不是广
: 东的... - -b

g*n2012-02-10 08:02

26 楼

怎么在O(n)时间 remove all duplicated numbers？

【在 P********l 的大作中提到】

: pass 1. remove all duplicated numbers. o(n)
: pass 2. find the second largest one. o(n)
: you can combine them to one round, but still o(n)

c*r2012-02-10 08:02

27 楼

vibrotome行不？

B*e2012-02-10 08:02

28 楼

新时代的厨男/娘。。。自家菜地。。。必须的。。。

【在 R*****s 的大作中提到】

: 不错啊，赞自家种的菜。。。

Z*Z2012-02-10 08:02

29 楼

想了一下，这好像是最简洁的方法了。如果不remove duplicate，那么就必须keep所有
见过的unique的数（不能只keep两个最大的）

【在 P********l 的大作中提到】

: pass 1. remove all duplicated numbers. o(n)
: pass 2. find the second largest one. o(n)
: you can combine them to one round, but still o(n)

M*n2012-02-10 08:02

30 楼

i think you should send your samples to a core to get the sections.
it is not worth wasting your time.

v*u2012-02-10 08:02

31 楼

美味啊，想蹭饭

【在 a****a 的大作中提到】

Z*Z2012-02-10 08:02

32 楼

用hashtable记录见过的元素

【在 g****n 的大作中提到】

: 怎么在O(n)时间 remove all duplicated numbers？

w*j2012-02-10 08:02

33 楼

这么多人没一个说到点子上。。。
乳房fat多类似脂肪
而脂肪不能用石蜡切片只能冰冻
你觉得碎了/不好切是因为温度还不够低
脂肪要-30度！！其他组织一般-15就够了！

O*a2012-02-10 08:02

34 楼

grin
潮州菜可以算粤菜系
但是楼主的这些绝对不是粤菜系，她自己不是都说了，江西的
至于如何分辨，你吃过饺子总能分辨饺子和馄饨的区别吧？吃过韭菜总能知道韭菜和葱
花的区别吧？
当然如果一直吧馄饨当饺子包把饺子当馄饨包结果出来号称是饺子也是馄饨的，那就不
知道是什么了

【在 B********e 的大作中提到】

:
: 新时代的厨男/娘。。。自家菜地。。。必须的。。。

P*b2012-02-10 08:02

35 楼

遍历一遍就可以吧。重复的元素不考虑就行了

【在 m*****g 的大作中提到】

: 是呀
: 这个可以用笨办法遍历2遍如何？

p*d2012-02-10 08:02

36 楼

在家带一天娃，晚上上来有这么多热心人啊。我是把组织切小块，paraformaldehyde固
定，尝试过30min-2h，切片都会碎。固定pbs洗，然后30%sucrose 4度shaking过夜，第
二天组织仍然是浮在上面的。然后OCT干冰上包埋切片。我没有做到30度，试过最低是
19度就没有再下降。
这么说我是温度不够低？高手看看，还有没有啥别的技巧啵？

B*e2012-02-10 08:02

37 楼

你说的方法只能是根据曾经吃过某道粤菜，所以知道这道菜是粤菜。
但是并不能用此来检验木有吃过的菜是或者不是粤菜吧？

【在 O*****a 的大作中提到】

: grin
: 潮州菜可以算粤菜系
: 但是楼主的这些绝对不是粤菜系，她自己不是都说了，江西的
: 至于如何分辨，你吃过饺子总能分辨饺子和馄饨的区别吧？吃过韭菜总能知道韭菜和葱
: 花的区别吧？
: 当然如果一直吧馄饨当饺子包把饺子当馄饨包结果出来号称是饺子也是馄饨的，那就不
: 知道是什么了

m*g2012-02-10 08:02

38 楼

是呀
只要最大和第二大的话，搞一个只有两个数的heap，然后从头到尾走一遍

p*d2012-02-10 08:02

39 楼

希望能切出来，这样我做confocal就有望了，呜呜呜。问了一个做脂肪的实验室，居然
说是脂肪太难做冰冻，所以整个实验室都放弃做这个了。据说还是专门做脂肪很牛滴实
验室，晕死。

O*a2012-02-10 08:02

40 楼

我说的不仅仅是吃过没吃过吧？不是还说了有做法么？
而且裁决是不是可以从配料和卖相上看，之所以用饺子馄饨、韭菜葱花来比喻给你听。
再有，在楼主自己说是江西菜的前提下，你是想说你认为它们是粤菜？你的论据又在哪
里？

【在 B********e 的大作中提到】

:
: 你说的方法只能是根据曾经吃过某道粤菜，所以知道这道菜是粤菜。
: 但是并不能用此来检验木有吃过的菜是或者不是粤菜吧？

l*c2012-02-10 08:02

41 楼

The hashtable is very confusing.
If the hashtable is not provided by the system, how to implement an
hashtable for non-fixed range integers.
people often mentioned hashtable, I really suspect we will use hashtable in
everyday coding.
if no-hashing method, we cannot remove duplicate elements in an array in O(n)

【在 Z*****Z 的大作中提到】

: 用hashtable记录见过的元素

w*j2012-02-10 08:02

42 楼

你脱水干吗呢。。。这又不是brain
脂肪不需要脱水因为它全是lipid啊没有意义
新鲜组织直接-30度
冻1-2h
然后直接切
风干后直接染色

l*z2012-02-10 08:02

43 楼

自家的菜园。。。。真好！

s*i2012-02-10 08:02

44 楼

第二大非重复的数是什么意思?
1 2 3 3 4 4 应该返回几？1还是2？

【在 K******g 的大作中提到】

w*j2012-02-10 08:02

45 楼

你脱水干吗呢。。。这又不是brain
脂肪不需要脱水因为它全是lipid啊没有意义
新鲜组织直接-30度
冻1-2h
然后直接切
风干后直接染色

B*e2012-02-10 08:02

46 楼

你说他们不是粤菜是在楼主说了是江西菜之前。
我问你根据什么说不是粤菜也是在我看到楼主说是江西菜之前。
我并不知道这些是或者不是粤菜。我没有论点和论据。
希望你搞清楚一点，我并不是要判定楼主这些菜是或者不是粤菜。
我想知道的是你的判定是根据什么标准。
以后不同场合看到有某些菜，我如何能大致判断出那道菜是或者不是粤菜。
据我粗浅所知，有一道叫“节瓜粉丝虾米”的，是广东很家常的菜。
跟楼主的海米丝瓜就挺像的。
当然，楼主的菜里面木有粉丝，用的也不是节瓜。
但是按照你上面所说的风格和卖相，就是那么回事儿。

【在 O*****a 的大作中提到】

: 我说的不仅仅是吃过没吃过吧？不是还说了有做法么？
: 而且裁决是不是可以从配料和卖相上看，之所以用饺子馄饨、韭菜葱花来比喻给你听。
: 再有，在楼主自己说是江西菜的前提下，你是想说你认为它们是粤菜？你的论据又在哪
: 里？

l*c2012-02-10 08:02

47 楼

when a duplicate is encountered, how to process?
I guess it is an nlogn problem

【在 m*****g 的大作中提到】

: 是呀
: 只要最大和第二大的话，搞一个只有两个数的heap，然后从头到尾走一遍

M*n2012-02-10 08:02

48 楼

细胞不需要cryo-protection吗?
是不是可以直接放液氮，或者是干冰里面冻？

【在 w***j 的大作中提到】

: 你脱水干吗呢。。。这又不是brain
: 脂肪不需要脱水因为它全是lipid啊没有意义
: 新鲜组织直接-30度
: 冻1-2h
: 然后直接切
: 风干后直接染色

O*a2012-02-10 08:02

49 楼

你如何能判断那道菜是或者不是粤菜... - -b 你觉得呢？你如何能大致判断汉堡不是
肉夹馍？还是说我需要告诉你面包和馍的区别？口感？做法？品种？卖相？你自己举例
的节瓜丝瓜和我说的饺子馄饨的例子有什么本质上的不同吗？我能够教你的也就是你自
己说的，再怎么“是那么回事”也不是...
多吃多学多看多做应该就不会存在这种问题了吧... 还是说非得把德国蹄膀说成是中国
蹄膀？
OVER//回复完毕

【在 B********e 的大作中提到】

:
: 你说他们不是粤菜是在楼主说了是江西菜之前。
: 我问你根据什么说不是粤菜也是在我看到楼主说是江西菜之前。
: 我并不知道这些是或者不是粤菜。我没有论点和论据。
: 希望你搞清楚一点，我并不是要判定楼主这些菜是或者不是粤菜。
: 我想知道的是你的判定是根据什么标准。
: 以后不同场合看到有某些菜，我如何能大致判断出那道菜是或者不是粤菜。
: 据我粗浅所知，有一道叫“节瓜粉丝虾米”的，是广东很家常的菜。
: 跟楼主的海米丝瓜就挺像的。
: 当然，楼主的菜里面木有粉丝，用的也不是节瓜。

s*s2012-02-10 08:02

50 楼

既然是第二大数，弄两个variable存当前最大和当前第二大就是了，
从左到右一遍就ok了。
tricky case估计也就是所有的数都一样，不存在第二大。
其他应该没有什么边界case了吧。

p*d2012-02-10 08:02

51 楼

可是形成冰晶什么的不会影响乳腺导管的细胞结构吗？

【在 w***j 的大作中提到】

: 你脱水干吗呢。。。这又不是brain
: 脂肪不需要脱水因为它全是lipid啊没有意义
: 新鲜组织直接-30度
: 冻1-2h
: 然后直接切
: 风干后直接染色

k*n2012-02-10 08:02

52 楼

if a problem says "second" largest, its concern won't be only O(xxx),
you must indicate exact complexity.

【在 P********l 的大作中提到】

: pass 1. remove all duplicated numbers. o(n)
: pass 2. find the second largest one. o(n)
: you can combine them to one round, but still o(n)

p*d2012-02-10 08:02

53 楼

同问。

【在 M*****n 的大作中提到】

: 细胞不需要cryo-protection吗?
: 是不是可以直接放液氮，或者是干冰里面冻？

k*n2012-02-10 08:02

54 楼

why not?

【在 Z*****Z 的大作中提到】

: 想了一下，这好像是最简洁的方法了。如果不remove duplicate，那么就必须keep所有
: 见过的unique的数（不能只keep两个最大的）

p*d2012-02-10 08:02

55 楼

今天我把原来冻的block切了一下，-30度马马虎虎可以切出40micrometer的片子，组织
边缘还是有一些碎掉的迹象，手够快可以在碎的更厉害前贴到片上。乳腺导管结构当然
比较厚，估计做confocal是可以了。但是贴片时候慌慌张张的，老是有气泡。不过已经
很大的进步了，看到了点点希望。

Z*Z2012-02-10 08:02

56 楼

比如只keep当前两个最大的，100和99，在向后扫描的过程中又遇到了100，怎么办？

【在 k*n 的大作中提到】

: why not?

M*s2012-02-10 08:02

57 楼

直接用OCT干冰包埋，差不多-19度切，厚度可以到5-7微米，不行的话15微米也行，air
-dry，4%PFA固定15-30分钟，过水或PBS,水性封片剂或甘油封片，去看荧光

k*n2012-02-10 08:02

58 楼

当然扔掉100啊，有相同的就扔掉，不同的才keep。。。

【在 Z*****Z 的大作中提到】

: 比如只keep当前两个最大的，100和99，在向后扫描的过程中又遇到了100，怎么办？

S*92012-02-10 08:02

59 楼

我切mouse brain从来就是直接OCT干冰包埋，— 20切，厚度 8微米， air dry，4%
PFA固定 5-10分钟，PBS清洗，然后开始染色

k*n2012-02-10 08:02

60 楼

check(int a[2], int x) {
if (x>a[0]) { a[1] = a[0]; a[0] = x; }
else if (x==a[0]) { return; }
else if (x>a[1]) { a[1] = x; }
}
不就完了么。。。

【在 k*n 的大作中提到】

: 当然扔掉100啊，有相同的就扔掉，不同的才keep。。。

v*a2012-02-10 08:02

61 楼

OCT干冰包埋有什么特别的注意事项吗？我冰冻切片一般都是直接把组织扔液氮，然后-
20度切（OCT用在组织底部稍微固定一下）。不知道这样和OCT包埋了的组织，切起来有
什么不一样吗？

【在 S******9 的大作中提到】

: 我切mouse brain从来就是直接OCT干冰包埋，— 20切，厚度 8微米， air dry，4%
: PFA固定 5-10分钟，PBS清洗，然后开始染色

Z*Z2012-02-10 08:02

62 楼

你为什么只检查是不是和a【0】重复而不检查是不是和a【1】重复？

【在 k*n 的大作中提到】

: check(int a[2], int x) {
: if (x>a[0]) { a[1] = a[0]; a[0] = x; }
: else if (x==a[0]) { return; }
: else if (x>a[1]) { a[1] = x; }
: }
: 不就完了么。。。

p*d2012-02-10 08:02

63 楼

请问这个protocol是针对乳腺的吗？难道sucrose脱水反倒造成组织碎裂？

air

【在 M******s 的大作中提到】

: 直接用OCT干冰包埋，差不多-19度切，厚度可以到5-7微米，不行的话15微米也行，air
: -dry，4%PFA固定15-30分钟，过水或PBS,水性封片剂或甘油封片，去看荧光

k*n2012-02-10 08:02

64 楼

反正是要丢掉啊。。。

【在 Z*****Z 的大作中提到】

: 你为什么只检查是不是和a【0】重复而不检查是不是和a【1】重复？

M*s2012-02-10 08:02

65 楼

这个和组织致密度（结缔组织多少），组织含水量，组织脂质体含量都有关系，都是相
对的，并没有一个固定的方法，有时候换一种固定液，就需要过糖了，糖溶液并不是为
了脱水，而是为了改变组织冰点，但同时也会改变组织渗透压，这样化冻时候有些组织
细胞结构就会被破坏，组织结构当然也就被破坏了，直接冻，切片，是因为组织液渗透
压接近生理，当然组织不会被破坏，但缺点是后期染色效果差，你的是gfp or yfp当然
没这个问题。
另外，别人的protocol未必适合你，我能做出来，也许你的组织就不work，所以你要去
试，先用不重要的tissue试一下，然后再用到正式实验里。

l*c2012-02-10 08:02

66 楼

for 9 1 8 7 2 7 8 9 the return value should be 1, what's the return of your
function?
there is no one time scan algorithm

【在 k*n 的大作中提到】

: check(int a[2], int x) {
: if (x>a[0]) { a[1] = a[0]; a[0] = x; }
: else if (x==a[0]) { return; }
: else if (x>a[1]) { a[1] = x; }
: }
: 不就完了么。。。

M*s2012-02-10 08:02

67 楼

后-
OCT就是三个作用，1是支持组织，好切，好mount，2是冻组织比较容易懂均匀，因为导
热均匀，3是环境温度差别大时能保护组织。你这样冻和切肯定是比较小的组织，没有问
题啊，我平常都是用水包埋，比较费刀片但染的质量好，但你要没有经验最好别干，因
为万一组织化掉就麻烦了。

【在 v***a 的大作中提到】

: OCT干冰包埋有什么特别的注意事项吗？我冰冻切片一般都是直接把组织扔液氮，然后-
: 20度切（OCT用在组织底部稍微固定一下）。不知道这样和OCT包埋了的组织，切起来有
: 什么不一样吗？

r*o2012-02-10 08:02

68 楼

3啊

【在 s*****i 的大作中提到】

: 第二大非重复的数是什么意思?
: 1 2 3 3 4 4 应该返回几？1还是2？

v*a2012-02-10 08:02

69 楼

谢谢！还有用水包埋一说？

有问

【在 M******s 的大作中提到】

:
: 后-
: OCT就是三个作用，1是支持组织，好切，好mount，2是冻组织比较容易懂均匀，因为导
: 热均匀，3是环境温度差别大时能保护组织。你这样冻和切肯定是比较小的组织，没有问
: 题啊，我平常都是用水包埋，比较费刀片但染的质量好，但你要没有经验最好别干，因
: 为万一组织化掉就麻烦了。

l*c2012-02-10 08:02

70 楼

you did not read it carefully, the answer should be 1

【在 r****o 的大作中提到】

: 3啊

M*s2012-02-10 08:02

71 楼

有啊，不然有OCT以前，冰冻切片技术已经有了，不用水用什么？很多老技术的改进，
有一部分是操作程序的简化，但是质量未必有传统技术好，就是一个平衡而已。

【在 v***a 的大作中提到】

: 谢谢！还有用水包埋一说？
:
: 有问

k*n2012-02-10 08:02

72 楼

what？

your

【在 l******c 的大作中提到】

: for 9 1 8 7 2 7 8 9 the return value should be 1, what's the return of your
: function?
: there is no one time scan algorithm

a*s2012-02-10 08:02

73 楼

如果已经4%PFA perfuse过的tissue不需要在fix了吧

air

【在 M******s 的大作中提到】

r*o2012-02-10 08:02

74 楼

不好意思，我理解得不一样.

【在 l******c 的大作中提到】

: you did not read it carefully, the answer should be 1

M*s2012-02-10 08:02

75 楼

pfa灌过得组织一定要过糖，绝不能直接冻，否则你的组织切出来全是末子，这个一定要注意。
这个程序大致是灌注》PFA固定》过糖》冰冻包埋》切片
所以你的组织还是需要固定的

【在 a******s 的大作中提到】

: 如果已经4%PFA perfuse过的tissue不需要在fix了吧
:
: air

l*c2012-02-10 08:02

76 楼

this is not a simle question to return the second largest value, the
condition is unique, not dupilcate.
for 9 1 8 7 2 7 8 9, the answer is 1, 2 might also make sense. but both are
not so easy to find.

【在 r****o 的大作中提到】

: 不好意思，我理解得不一样.

M*s2012-02-10 08:02

77 楼

谢包子，
关于脱片的问题，很多人都有这个问题，fisher的superfrost一般来讲是没有问题，但
质量不是很稳定，不同批号差异挺大的，有时候会掉得一张不剩，尤其是蓝盒的问题非
常多，白盒的要好一些。我们现在都用自己的产品，基本不会有这种问题 https://www
.hitobiotec.com/product_info.php/hito-super-safe-slide-100-place-
slide-box-p
-50? 如果愿意，你可以试一试。另外你可以试着切薄片，15微米左右，一般来讲薄片要好一些
关于脂肪滴的问题，以前有人要看脂肪或脂质体，所以脂肪必须留在原位，我给出的
protocol是针对这个目的的，现在想想你不是看脂肪，所以可以换个方法试试。（都是
不固定组织）
方法1
直接用OCT干冰包埋，切片，air dry, xylene 5min, 100% Ethanol 3min x2, 95%
Ethanol 3min x2,70%Ethanol 3min x2,D-water 1min x3,PBS 1min,水性封片剂或
甘油
封片，去看荧光
这个protocol好处是组织结构保留的很好，没有用到PFA之类的固定液，即使以后用抗
体染，也会效果很好因为没有交联(cross-link),gfp之类荧光或许会弱一些，但比石蜡
方法要好很多。缺点就是脂肪脱掉，因此不适用于脂肪代谢有关的实验。
方法2
直接用OCT干冰包埋，切片，air dry, 直接进冷丙酮5min，D-water 1min，PBS 1min,
水性封片剂或甘油封片，去看荧光（关于冷丙酮，你可以放到密封或盖紧的瓶里在-20
度冰箱降温30min，然后拿出来在hood里倒进染色缸用，千万不要在冰箱里开放降温，
挥发的丙酮如果遇到冰箱启动的电火花会爆炸，这个是很重要的安全操作要求）
这个方法好处是可以保留大部分脂肪，而且胞浆蛋白免疫活性保留非常好，缺点也明显
，就是因为固定机制是脱水固定，所以切片不能很好地长期保留。
你可以都试一试，有问题我们再讨论。

【在 p******d 的大作中提到】

: 这乳腺的冰冻切片文章里面天天见啊，自己怎么就做不出来呢！那么多的fat，怎么切
: 都碎碎碎啊！！！！气死我了，有木有，有木有！！！！！

i*r2012-02-10 08:02

78 楼

A one pass solution:
The loop invariant is that variable contains the largest element
or none; variable contains the 2nd largest element or none.
int A[n];
const int NONE = -999999999; // sentinel
int largest = NONE;
int largest_2 = NONE;
for (int i = 0; i < n; i++)
if (A[i] < largest && A[i] > largest_2)
largest_2 = A[i];
else if (A[i] > largest){
largest_2 = largest;
largest = A[i];
}
if (largest_2 == NONE )
cout

p*d2012-02-10 08:02

79 楼

太谢谢了！我会去试试看再上来更新！

k*n2012-02-10 08:02

80 楼

我也发现了，很奇怪的理解方式
就好像一个班级考试排名，要求并列第一名和并列第二名可以理解
求所有单独成绩的第二名，这个表达起来都很怪。。。

【在 r****o 的大作中提到】

: 不好意思，我理解得不一样.

z*82012-02-10 08:02

81 楼

mark

l*c2012-02-10 08:02

82 楼

在一个数组中找到第二大的非重复的数, it's quite clear
9 1 7 8 2 7 8 9
第一大的非重复的数 is 2, 第二大的非重复的数 is 1

【在 k*n 的大作中提到】

: 我也发现了，很奇怪的理解方式
: 就好像一个班级考试排名，要求并列第一名和并列第二名可以理解
: 求所有单独成绩的第二名，这个表达起来都很怪。。。

m*M2012-02-10 08:02

83 楼

Agree with this depending on my experience

air

【在 M******s 的大作中提到】

Z*Z2012-02-10 08:02

84 楼

totally aglee

【在 l******c 的大作中提到】

: 在一个数组中找到第二大的非重复的数, it's quite clear
: 9 1 7 8 2 7 8 9
: 第一大的非重复的数 is 2, 第二大的非重复的数 is 1

r*o2012-02-10 08:02

85 楼

如果A[]={3 2 2 1}，这个程序好像会返回2。

【在 i**r 的大作中提到】

: A one pass solution:
: The loop invariant is that variable contains the largest element
: or none; variable contains the 2nd largest element or none.
: int A[n];
: const int NONE = -999999999; // sentinel
: int largest = NONE;
: int largest_2 = NONE;
: for (int i = 0; i < n; i++)
: if (A[i] < largest && A[i] > largest_2)
: largest_2 = A[i];

r*o2012-02-10 08:02

86 楼

我也这么觉得，先照他们的理解吧。

【在 k*n 的大作中提到】

P*b2012-02-10 08:02

87 楼

如果是这样，排个序吧。
有复杂度要求吗？

【在 l******c 的大作中提到】

: 在一个数组中找到第二大的非重复的数, it's quite clear
: 9 1 7 8 2 7 8 9
: 第一大的非重复的数 is 2, 第二大的非重复的数 is 1

k*n2012-02-10 08:02

88 楼

这个和我写得那一段是一回事，但是程序风格真是太差了。。。

【在 r****o 的大作中提到】

: 如果A[]={3 2 2 1}，这个程序好像会返回2。

i*r2012-02-10 08:02

89 楼

Exactly. The program outputs the second largest distinct number.
That's my understanding of the problem.

【在 r****o 的大作中提到】

: 如果A[]={3 2 2 1}，这个程序好像会返回2。