c*k
2 楼
小柯作品, 歌挺好听的
电影虽然豆瓣上评分比较低 但还是蛮好玩的 很多大腕儿
电影虽然豆瓣上评分比较低 但还是蛮好玩的 很多大腕儿
t*y
3 楼
m*n
4 楼
forward的那个有90+,其中有大约60bp的尾巴;下游那个就是一般的20+左右的引物
,从质粒上面p大约1.5k的片段,因为从来没有用过长引物做pcr,所以不知道要怎么样
优化。万一搞了半天出不了,老板又要有意见了,所以先来打听一下~~~谢谢~~
,从质粒上面p大约1.5k的片段,因为从来没有用过长引物做pcr,所以不知道要怎么样
优化。万一搞了半天出不了,老板又要有意见了,所以先来打听一下~~~谢谢~~
w*w
6 楼
稳稳的幸福,这个要求有点高,呵呵~~
e*k
7 楼
嗯,已经有一个,两个有啥用呢?
N2
8 楼
primers:
Forward primer: the matched part should be 30-35mer, tm~65C,
Reverse primer: should be >30-35er, could be 40-55mer if you don't have a
tail, the long the better, matched base pairs have tm around 65.
cycles:
using phusion polymerase, add 5% DMSO(2.5ul/50ul), annealing temperature>=
68C.
For the long primer pcr, the main problem is the primer dimer and the second
structure of the primer. So you need a long matched length to give space to
increase the annealing temperature and break any primers' complementary and
structure, but still have a good annealing.
good luck.
Forward primer: the matched part should be 30-35mer, tm~65C,
Reverse primer: should be >30-35er, could be 40-55mer if you don't have a
tail, the long the better, matched base pairs have tm around 65.
cycles:
using phusion polymerase, add 5% DMSO(2.5ul/50ul), annealing temperature>=
68C.
For the long primer pcr, the main problem is the primer dimer and the second
structure of the primer. So you need a long matched length to give space to
increase the annealing temperature and break any primers' complementary and
structure, but still have a good annealing.
good luck.
z*n
10 楼
这是原唱吧,好像只有右耳有声音呀。。。
y*n
11 楼
unlocked的么?可以用于AT&T prepaid或者Tmobile prepaid么?Verizon呢?
【在 t*******y 的大作中提到】
: http://slickdeals.net/forums/showthread.php?t=3624390
: Optimus V 卖52
【在 t*******y 的大作中提到】
: http://slickdeals.net/forums/showthread.php?t=3624390
: Optimus V 卖52
j*x
12 楼
拿质粒作模板,而且还只有1.5kb,基本上闭着眼也能扩增出来的,呵呵。直接2-step
PCR,不用退火,变性后直接72度延伸,可以有效减少引物二聚体的影响。前提是引物
Tm值均高于72度(这个应该不难)
PCR,不用退火,变性后直接72度延伸,可以有效减少引物二聚体的影响。前提是引物
Tm值均高于72度(这个应该不难)
p*i
13 楼
If it is not deep then dont worry. It will come out by itself.
m*n
15 楼
这么多,好感动啊,谢啦~~~
second
to
and
【在 N2 的大作中提到】
: primers:
: Forward primer: the matched part should be 30-35mer, tm~65C,
: Reverse primer: should be >30-35er, could be 40-55mer if you don't have a
: tail, the long the better, matched base pairs have tm around 65.
: cycles:
: using phusion polymerase, add 5% DMSO(2.5ul/50ul), annealing temperature>=
: 68C.
: For the long primer pcr, the main problem is the primer dimer and the second
: structure of the primer. So you need a long matched length to give space to
: increase the annealing temperature and break any primers' complementary and
second
to
and
【在 N2 的大作中提到】
: primers:
: Forward primer: the matched part should be 30-35mer, tm~65C,
: Reverse primer: should be >30-35er, could be 40-55mer if you don't have a
: tail, the long the better, matched base pairs have tm around 65.
: cycles:
: using phusion polymerase, add 5% DMSO(2.5ul/50ul), annealing temperature>=
: 68C.
: For the long primer pcr, the main problem is the primer dimer and the second
: structure of the primer. So you need a long matched length to give space to
: increase the annealing temperature and break any primers' complementary and
V*8
19 楼
这个我想我很有经验回答。
我儿一岁左右光脚在家里走路也扎了个不知道是什么东西,摸着有点硬硬的,但是看他
走路依旧,也没有痛的表现,就没有怎么样。后来拖了一个多月,那东西既没有自己出
来,也没有恶化,我不放心就带他去看了儿医,又被转介到医院看。医生还给他照了X
光。结果什么也看不出来。
当时医生让我自己选,他说X光只能照出玻璃等异物,如果是木屑是照不出来的。我可
以1)随他去。2)全身麻醉把脚底板隔一个小口子看看。他说如果是木屑有可能以后身
体会自己消化掉。。
我选了1.后来就没有了,可能自己消化掉了或者出来了。
我儿一岁左右光脚在家里走路也扎了个不知道是什么东西,摸着有点硬硬的,但是看他
走路依旧,也没有痛的表现,就没有怎么样。后来拖了一个多月,那东西既没有自己出
来,也没有恶化,我不放心就带他去看了儿医,又被转介到医院看。医生还给他照了X
光。结果什么也看不出来。
当时医生让我自己选,他说X光只能照出玻璃等异物,如果是木屑是照不出来的。我可
以1)随他去。2)全身麻醉把脚底板隔一个小口子看看。他说如果是木屑有可能以后身
体会自己消化掉。。
我选了1.后来就没有了,可能自己消化掉了或者出来了。
l*a
20 楼
CDMA, 制式。
h*e
21 楼
这个应该不难,没啥特别的 就按照平常PCR的方法试试 就能扩出来
p*c
23 楼
有同学知道怎么换电话么?收到之后给他们打电话就行?原来电话自动deactive?
谢谢
谢谢
L*t
24 楼
以前做PCR扩不出来就往里面加DMSO,从3%开始往上加到10%一般都能做出来,比退火温度梯度什么的有效多了。文献里说加甜菜碱也可以不过没用过。
W*7
30 楼
放心闭着眼睛做吧,、
我当时做的120多的引物,也就是闭着眼睛做的,一点问题都没有。。
我当时做的120多的引物,也就是闭着眼睛做的,一点问题都没有。。
w*4
31 楼
真的会自己消失吗?木头会被身体消化掉?很神奇的说。
我也只是猜着是木头刺,没有硬物只是小口子的话不会硬硬的。问他他又说不疼。好奇
怪,我觉得要是
我手上扎刺,肯定一直疼。
你说起光脚走路,我也担心我家这个,playground都是碎木头的,穿crocs鞋还是有被
扎的可能的,
以后还是穿运动鞋算了。看老美的孩子很多光着脚丫到处乱跑,难道都是铁脚掌。。。
X
【在 V*****8 的大作中提到】
: 这个我想我很有经验回答。
: 我儿一岁左右光脚在家里走路也扎了个不知道是什么东西,摸着有点硬硬的,但是看他
: 走路依旧,也没有痛的表现,就没有怎么样。后来拖了一个多月,那东西既没有自己出
: 来,也没有恶化,我不放心就带他去看了儿医,又被转介到医院看。医生还给他照了X
: 光。结果什么也看不出来。
: 当时医生让我自己选,他说X光只能照出玻璃等异物,如果是木屑是照不出来的。我可
: 以1)随他去。2)全身麻醉把脚底板隔一个小口子看看。他说如果是木屑有可能以后身
: 体会自己消化掉。。
: 我选了1.后来就没有了,可能自己消化掉了或者出来了。
我也只是猜着是木头刺,没有硬物只是小口子的话不会硬硬的。问他他又说不疼。好奇
怪,我觉得要是
我手上扎刺,肯定一直疼。
你说起光脚走路,我也担心我家这个,playground都是碎木头的,穿crocs鞋还是有被
扎的可能的,
以后还是穿运动鞋算了。看老美的孩子很多光着脚丫到处乱跑,难道都是铁脚掌。。。
X
【在 V*****8 的大作中提到】
: 这个我想我很有经验回答。
: 我儿一岁左右光脚在家里走路也扎了个不知道是什么东西,摸着有点硬硬的,但是看他
: 走路依旧,也没有痛的表现,就没有怎么样。后来拖了一个多月,那东西既没有自己出
: 来,也没有恶化,我不放心就带他去看了儿医,又被转介到医院看。医生还给他照了X
: 光。结果什么也看不出来。
: 当时医生让我自己选,他说X光只能照出玻璃等异物,如果是木屑是照不出来的。我可
: 以1)随他去。2)全身麻醉把脚底板隔一个小口子看看。他说如果是木屑有可能以后身
: 体会自己消化掉。。
: 我选了1.后来就没有了,可能自己消化掉了或者出来了。
C*e
33 楼
没什么问题
就是订的引物要当心
这么长
要不你要求PAGE纯化
要不自己PAGE纯化
不然等你拿到clone结果在引物的部分有错或者短了什么的就要哭了
就是订的引物要当心
这么长
要不你要求PAGE纯化
要不自己PAGE纯化
不然等你拿到clone结果在引物的部分有错或者短了什么的就要哭了
z*i
34 楼
不弄出来碰到就会疼.还是挑出来好.我给儿子挑过好几次刺儿了. 有时候会露一点在外
面,用镊子夹出来就可以.有时候需要用针挑开,会有点疼. 我用一点可卡因油膏抹在上
面,会有点麻醉作用,然后把刺挑出来. 可卡因油膏在walgreens有卖的,治痔疮用的.
【在 w*****4 的大作中提到】
: 真的会自己消失吗?木头会被身体消化掉?很神奇的说。
: 我也只是猜着是木头刺,没有硬物只是小口子的话不会硬硬的。问他他又说不疼。好奇
: 怪,我觉得要是
: 我手上扎刺,肯定一直疼。
: 你说起光脚走路,我也担心我家这个,playground都是碎木头的,穿crocs鞋还是有被
: 扎的可能的,
: 以后还是穿运动鞋算了。看老美的孩子很多光着脚丫到处乱跑,难道都是铁脚掌。。。
:
: X
面,用镊子夹出来就可以.有时候需要用针挑开,会有点疼. 我用一点可卡因油膏抹在上
面,会有点麻醉作用,然后把刺挑出来. 可卡因油膏在walgreens有卖的,治痔疮用的.
【在 w*****4 的大作中提到】
: 真的会自己消失吗?木头会被身体消化掉?很神奇的说。
: 我也只是猜着是木头刺,没有硬物只是小口子的话不会硬硬的。问他他又说不疼。好奇
: 怪,我觉得要是
: 我手上扎刺,肯定一直疼。
: 你说起光脚走路,我也担心我家这个,playground都是碎木头的,穿crocs鞋还是有被
: 扎的可能的,
: 以后还是穿运动鞋算了。看老美的孩子很多光着脚丫到处乱跑,难道都是铁脚掌。。。
:
: X
w*4
43 楼
update一下:昨天洗澡发现他的手指竟然像起皮一样,皮掉了,啥都没了。真的有些神
奇,我明明摸着硬硬的,不像单纯割破个小口子,研究了半天,竟然自己就没了,真相
也不得而知。
奇,我明明摸着硬硬的,不像单纯割破个小口子,研究了半天,竟然自己就没了,真相
也不得而知。
w*a
45 楼
不要怕做
管他结果,先做一遍,看看结果,就是个pcr,花不了多少时间和精力还有钱
然后网上查查
很快经验就会积累起来
管他结果,先做一遍,看看结果,就是个pcr,花不了多少时间和精力还有钱
然后网上查查
很快经验就会积累起来
q*8
48 楼
LS说的没错,做实验就是试这个试那个,要是怕结果不好就不敢做的话那就不是做实验
了。
SERIALCLONER可以预测初始和后期的ANNEALING TEMPERATURE。大不了你前面5个循环用
低温,后面调高温。
不过我的建议是你把60+的FORWARD PRIMER分成3个不就做出来了。每次就加20个BP,我
一直在做 一点问题都没有
了。
SERIALCLONER可以预测初始和后期的ANNEALING TEMPERATURE。大不了你前面5个循环用
低温,后面调高温。
不过我的建议是你把60+的FORWARD PRIMER分成3个不就做出来了。每次就加20个BP,我
一直在做 一点问题都没有
y*n
54 楼
找到了:
http://virginmobileusa.custhelp.com/app/answers/detail/a_id/915
Virgin Mobile accounts can expire
Your account will expire if:
A) Pay by the minute plan accounts will expire if you go more than 150 days
without Topping-Up at least $20 or $15 if you select the Auto Top-Up option
- OR - you go more than 105 days from your last Top-Up of less than $20 .
B) Monthly Plan accounts will expire if you go 120 days without fixing it or
otherwise paying your monthly charge.
Don't let either of these happen to you! If your account expires, you'll
lose your phone number and any money left in your account.
【在 t*******y 的大作中提到】
: 现在不一定可以私自改25,以前是可以的。
: 如果你帐号里一直有钱,号码就会保留下去,不然就不知道了。
http://virginmobileusa.custhelp.com/app/answers/detail/a_id/915
Virgin Mobile accounts can expire
Your account will expire if:
A) Pay by the minute plan accounts will expire if you go more than 150 days
without Topping-Up at least $20 or $15 if you select the Auto Top-Up option
- OR - you go more than 105 days from your last Top-Up of less than $20 .
B) Monthly Plan accounts will expire if you go 120 days without fixing it or
otherwise paying your monthly charge.
Don't let either of these happen to you! If your account expires, you'll
lose your phone number and any money left in your account.
【在 t*******y 的大作中提到】
: 现在不一定可以私自改25,以前是可以的。
: 如果你帐号里一直有钱,号码就会保留下去,不然就不知道了。
t*y
57 楼
看你什么Plan了,Beyond Talk是一个月35块,但没合同
http://www.virginmobileusa.com/cell-phone-plans/beyond-talk-pla
【在 r****t 的大作中提到】
: virgin 是没有月费的吧?我有个号,手机太烂已经放了一年了。
http://www.virginmobileusa.com/cell-phone-plans/beyond-talk-pla
【在 r****t 的大作中提到】
: virgin 是没有月费的吧?我有个号,手机太烂已经放了一年了。
p*n
58 楼
25的已经没有了,确定。
r*t
59 楼
就是 pay as you go 这样的,我记得是 10c/min, 自动每三个月充值一次。
【在 t*******y 的大作中提到】
: 看你什么Plan了,Beyond Talk是一个月35块,但没合同
: http://www.virginmobileusa.com/cell-phone-plans/beyond-talk-pla
【在 t*******y 的大作中提到】
: 看你什么Plan了,Beyond Talk是一个月35块,但没合同
: http://www.virginmobileusa.com/cell-phone-plans/beyond-talk-pla
O*X
60 楼
请问这些prepaid的phone也可以用分钟的plan吧?
另外monthly prepaid 和 contract有什么差别?
另外monthly prepaid 和 contract有什么差别?
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