g*j
2 楼
正在构建一个质粒,挺简单,就是把这个质粒上的gfp换成同样大小的dsRed,质粒的骨
干不变。
连接,转化以后,有不少菌落。
第一天挑了4个菌落,长在LB里,amp浓度100ug/ml.结果只长了一个。试剂盒提质粒,
solution3 以后离心,结果上清非常浑浊,白色的东西离不下去。继续做,提完,跑胶
,没质粒。
第二天,又挑了4个菌落,长在LB里,amp浓度50ug/ml。4个都长了,试剂盒提质粒。同
样,solution3 以后离心,结果上清非常浑浊,白色的东西离不下去。继续做,提完,
跑胶,都有质粒。质粒大小和原质粒dimer 一样大。单切,跑胶,3个切不开,1个切开
后和原质粒单切大小一样。更加确定是形成dimer了。
问题一,为啥会形成dimer呢?
问题二,我是重新做连接,转化呢?还是把那个能切开的切一下,然后稀释,连接,再
转化呢?
干不变。
连接,转化以后,有不少菌落。
第一天挑了4个菌落,长在LB里,amp浓度100ug/ml.结果只长了一个。试剂盒提质粒,
solution3 以后离心,结果上清非常浑浊,白色的东西离不下去。继续做,提完,跑胶
,没质粒。
第二天,又挑了4个菌落,长在LB里,amp浓度50ug/ml。4个都长了,试剂盒提质粒。同
样,solution3 以后离心,结果上清非常浑浊,白色的东西离不下去。继续做,提完,
跑胶,都有质粒。质粒大小和原质粒dimer 一样大。单切,跑胶,3个切不开,1个切开
后和原质粒单切大小一样。更加确定是形成dimer了。
问题一,为啥会形成dimer呢?
问题二,我是重新做连接,转化呢?还是把那个能切开的切一下,然后稀释,连接,再
转化呢?
e*s
4 楼
觉得你提的更可能是Trash,不是你的目标质粒。
重新来吧。
【在 g***j 的大作中提到】
: 正在构建一个质粒,挺简单,就是把这个质粒上的gfp换成同样大小的dsRed,质粒的骨
: 干不变。
: 连接,转化以后,有不少菌落。
: 第一天挑了4个菌落,长在LB里,amp浓度100ug/ml.结果只长了一个。试剂盒提质粒,
: solution3 以后离心,结果上清非常浑浊,白色的东西离不下去。继续做,提完,跑胶
: ,没质粒。
: 第二天,又挑了4个菌落,长在LB里,amp浓度50ug/ml。4个都长了,试剂盒提质粒。同
: 样,solution3 以后离心,结果上清非常浑浊,白色的东西离不下去。继续做,提完,
: 跑胶,都有质粒。质粒大小和原质粒dimer 一样大。单切,跑胶,3个切不开,1个切开
: 后和原质粒单切大小一样。更加确定是形成dimer了。
重新来吧。
【在 g***j 的大作中提到】
: 正在构建一个质粒,挺简单,就是把这个质粒上的gfp换成同样大小的dsRed,质粒的骨
: 干不变。
: 连接,转化以后,有不少菌落。
: 第一天挑了4个菌落,长在LB里,amp浓度100ug/ml.结果只长了一个。试剂盒提质粒,
: solution3 以后离心,结果上清非常浑浊,白色的东西离不下去。继续做,提完,跑胶
: ,没质粒。
: 第二天,又挑了4个菌落,长在LB里,amp浓度50ug/ml。4个都长了,试剂盒提质粒。同
: 样,solution3 以后离心,结果上清非常浑浊,白色的东西离不下去。继续做,提完,
: 跑胶,都有质粒。质粒大小和原质粒dimer 一样大。单切,跑胶,3个切不开,1个切开
: 后和原质粒单切大小一样。更加确定是形成dimer了。
c*1
8 楼
怕怕,好形象哦,我最怕老巫婆了
l*z
9 楼
这叫我如何下口----这是我的手啊!!!(同学喊我是巫婆!!)
l*z
10 楼
獭獭,上次是不是你说,烤牛/羊排的时候团几个锡纸团进去?还是妖说的?
昨天试了一下,好主意!!谢谢你们呢!
奖励獭獭一个包子,嗖~~~~
昨天试了一下,好主意!!谢谢你们呢!
奖励獭獭一个包子,嗖~~~~
B*e
12 楼
卡哇伊涅~~~
相关阅读
寻中国抗体,蛋白质合成,细胞培养等供货或合作方青蒿素热中的冷思考·方舟子·黏多糖症紧急求助,有在BioMarin 公司的吗? (转载)老板停发工资后续,求教求推荐:PAGE gel box细胞(或个体)受到免疫刺激后,多久检测蛋白水平的变化?“我国自主研发的DNA测序仪”感慨一下,人生啊,倒霉的时候未必是坏事 (转载)毛主席发动的无产阶级文化大革命45年后终于获得美帝国的肯定咨询下microRNA profiling的收费ZZ 无论任何时候,身体始终是第一位的-耶鲁MIT中国数学天才猝死清华最年轻女教授颜宁发博文: 网络已死! (转载)Karel Svoboda具体是做什么的?请教一个博后老板funding的问题 (转载)大家看看我的这片文章咋办?求助,单酶切连接全部反向怎么办?急求!!!两家共享Bruce Beutler的诺贝尔奖?paper help为什么都说母乳喂养,孩子不容易的病。Nobel prize in medicine goes to...