请教关于doxycyline-inducible system在in vivo# Biology - 生物学
M*C
1 楼
就要下offer了，可是刚注意到车库的地面上有一条长裂缝，最宽的地方裂缝大概有半
厘米。不知道这样是不是个大问题？会不会说明房子内部的地板下也有裂缝呢？
请有经验的大侠帮忙。多谢了！
厘米。不知道这样是不是个大问题？会不会说明房子内部的地板下也有裂缝呢？
请有经验的大侠帮忙。多谢了！
m*d
2 楼
用pTRIPZ lentivirus建立起来的细胞系，稳定表达某doxycycline-inducible shRNA。
在in vitro测试phenotype很稳定
现在要把细胞在tet-off的状态打到裸鼠体内，等tumor长起来，再开始给doxycycline
以及相应的treatment。现在的问题是，doxy该怎么给，文献上很多都用doxycycline
drinking water，可我听说doxycycline可能会precipitate，很难控制老鼠喝进去的量
；还有人用doxycycline的食物，但似乎也不大好控制doxy的量。
不知是否有人用过oral gavage，似乎这样可以准确地定量doxy，隔天通过gavage给
doxy不知是否可行？
请问版哪位曾在in vivo试过pTRIPZ这个系统，它的doxy-inducible knockdown
efficiency和leakiness不知道还不好
谢谢
在in vitro测试phenotype很稳定
现在要把细胞在tet-off的状态打到裸鼠体内，等tumor长起来，再开始给doxycycline
以及相应的treatment。现在的问题是，doxy该怎么给，文献上很多都用doxycycline
drinking water，可我听说doxycycline可能会precipitate，很难控制老鼠喝进去的量
；还有人用doxycycline的食物，但似乎也不大好控制doxy的量。
不知是否有人用过oral gavage，似乎这样可以准确地定量doxy，隔天通过gavage给
doxy不知是否可行？
请问版哪位曾在in vivo试过pTRIPZ这个系统，它的doxy-inducible knockdown
efficiency和leakiness不知道还不好
谢谢
t*3
3 楼
绝大多数车库下面不是地下室吧？由车库水泥地板下面的泥土下沉造成的。
i*n
4 楼
我以前用dox-containing water,浓度没那么高，不会沉淀。（水里加点糖，老鼠可能
不喜欢喝dox水）
现在我们把dox做到food里面。
灌胃对小鼠伤害太大。
doxycycline
【在 m**********d 的大作中提到】
: 用pTRIPZ lentivirus建立起来的细胞系，稳定表达某doxycycline-inducible shRNA。
: 在in vitro测试phenotype很稳定
: 现在要把细胞在tet-off的状态打到裸鼠体内，等tumor长起来，再开始给doxycycline
: 以及相应的treatment。现在的问题是，doxy该怎么给，文献上很多都用doxycycline
: drinking water，可我听说doxycycline可能会precipitate，很难控制老鼠喝进去的量
: ；还有人用doxycycline的食物，但似乎也不大好控制doxy的量。
: 不知是否有人用过oral gavage，似乎这样可以准确地定量doxy，隔天通过gavage给
: doxy不知是否可行？
: 请问版哪位曾在in vivo试过pTRIPZ这个系统，它的doxy-inducible knockdown
: efficiency和leakiness不知道还不好
不喜欢喝dox水）
现在我们把dox做到food里面。
灌胃对小鼠伤害太大。
doxycycline
【在 m**********d 的大作中提到】
: 用pTRIPZ lentivirus建立起来的细胞系，稳定表达某doxycycline-inducible shRNA。
: 在in vitro测试phenotype很稳定
: 现在要把细胞在tet-off的状态打到裸鼠体内，等tumor长起来，再开始给doxycycline
: 以及相应的treatment。现在的问题是，doxy该怎么给，文献上很多都用doxycycline
: drinking water，可我听说doxycycline可能会precipitate，很难控制老鼠喝进去的量
: ；还有人用doxycycline的食物，但似乎也不大好控制doxy的量。
: 不知是否有人用过oral gavage，似乎这样可以准确地定量doxy，隔天通过gavage给
: doxy不知是否可行？
: 请问版哪位曾在in vivo试过pTRIPZ这个系统，它的doxy-inducible knockdown
: efficiency和leakiness不知道还不好
M*C
5 楼
车库下面没有地下室。那这是不是说房子里面的地板下也有可能泥土下沉？会是说地基
有问题吗？
完全没概念。
【在 t***3 的大作中提到】
: 绝大多数车库下面不是地下室吧？由车库水泥地板下面的泥土下沉造成的。
有问题吗？
完全没概念。
【在 t***3 的大作中提到】
: 绝大多数车库下面不是地下室吧？由车库水泥地板下面的泥土下沉造成的。
z*t
6 楼
我也用的是pTRIPZ，In-vivo用的是水加Dox。配方如下：
0.5gDox溶于23mL 50% 蔗糖溶液中，注入230mL（8OZ)袋装水中。终浓度：Dox，2mg/mL
，蔗糖，5%。水上盖锡箔纸避光，一周一换。
用qPCR可以检测到RFP表达，说明此浓度可用。
试过注射和灌胃。灌胃伤害太大，腹腔注射好像导致了腹水，原因不明。也试过食物（
找别人借的），老鼠不太爱吃，不过效果不错，也可以诱导RFP表达，只是太贵，好像
一买就是一个大包装，我用不了那么多，后来就一直用水了。
0.5gDox溶于23mL 50% 蔗糖溶液中，注入230mL（8OZ)袋装水中。终浓度：Dox，2mg/mL
，蔗糖，5%。水上盖锡箔纸避光，一周一换。
用qPCR可以检测到RFP表达，说明此浓度可用。
试过注射和灌胃。灌胃伤害太大，腹腔注射好像导致了腹水，原因不明。也试过食物（
找别人借的），老鼠不太爱吃，不过效果不错，也可以诱导RFP表达，只是太贵，好像
一买就是一个大包装，我用不了那么多，后来就一直用水了。
t*3
7 楼
建地下室的地基会比较花功夫，比如打桩，灌水泥，铺石子，装排水管。房子的重量压
在地下室上。如果地下室地面没有下沉，地下室地面和墙没有大的裂缝，就没啥大问题。
车库的水泥地下面也铺有石子，但一般功夫没有地下室地基做的足。有点裂缝用水泥补
一下就可以了。下沉很严重的话就得把水泥地掀开重新垫底。光是车库水泥地
裂缝不代表房子下沉。
在地下室上。如果地下室地面没有下沉，地下室地面和墙没有大的裂缝，就没啥大问题。
车库的水泥地下面也铺有石子，但一般功夫没有地下室地基做的足。有点裂缝用水泥补
一下就可以了。下沉很严重的话就得把水泥地掀开重新垫底。光是车库水泥地
裂缝不代表房子下沉。
b*8
8 楼
楼主，请问你用pTRIPZ lentivirus建立起来的细胞系是怎么操作的？
细胞染毒后稀释传代加药挑单克隆？还是只是加药筛选后pool所有的存活细胞？
细胞染毒后稀释传代加药挑单克隆？还是只是加药筛选后pool所有的存活细胞？
M*C
9 楼
我们这儿的房子没有地下室，车库是直接连着房子的，所以看到大裂缝有点儿怕怕，不
知道还该不该买这个房子。
题。
【在 t***3 的大作中提到】
: 建地下室的地基会比较花功夫，比如打桩，灌水泥，铺石子，装排水管。房子的重量压
: 在地下室上。如果地下室地面没有下沉，地下室地面和墙没有大的裂缝，就没啥大问题。
: 车库的水泥地下面也铺有石子，但一般功夫没有地下室地基做的足。有点裂缝用水泥补
: 一下就可以了。下沉很严重的话就得把水泥地掀开重新垫底。光是车库水泥地
: 裂缝不代表房子下沉。
知道还该不该买这个房子。
题。
【在 t***3 的大作中提到】
: 建地下室的地基会比较花功夫，比如打桩，灌水泥，铺石子，装排水管。房子的重量压
: 在地下室上。如果地下室地面没有下沉，地下室地面和墙没有大的裂缝，就没啥大问题。
: 车库的水泥地下面也铺有石子，但一般功夫没有地下室地基做的足。有点裂缝用水泥补
: 一下就可以了。下沉很严重的话就得把水泥地掀开重新垫底。光是车库水泥地
: 裂缝不代表房子下沉。
m*d
10 楼
多谢楼上几位的热心回复！
我所用的细胞已经带有一个puromycin resistant的luciferase construct了，因此在
病毒infection之后没有办法再用puromycin筛选，幸好pTRIPZ vector有RFP，我用FASC
sorting拿到的细胞pool
【在 b**********8 的大作中提到】
: 楼主，请问你用pTRIPZ lentivirus建立起来的细胞系是怎么操作的？
: 细胞染毒后稀释传代加药挑单克隆？还是只是加药筛选后pool所有的存活细胞？
我所用的细胞已经带有一个puromycin resistant的luciferase construct了，因此在
病毒infection之后没有办法再用puromycin筛选，幸好pTRIPZ vector有RFP，我用FASC
sorting拿到的细胞pool
【在 b**********8 的大作中提到】
: 楼主，请问你用pTRIPZ lentivirus建立起来的细胞系是怎么操作的？
: 细胞染毒后稀释传代加药挑单克隆？还是只是加药筛选后pool所有的存活细胞？
t*3
11 楼
没地下室啊，那一定请inspector仔细看看房子地基。不然不放心。
不知道还该不该买这个房子。
【在 M**C 的大作中提到】
: 我们这儿的房子没有地下室，车库是直接连着房子的，所以看到大裂缝有点儿怕怕，不
: 知道还该不该买这个房子。
:
: 题。
不知道还该不该买这个房子。
【在 M**C 的大作中提到】
: 我们这儿的房子没有地下室，车库是直接连着房子的，所以看到大裂缝有点儿怕怕，不
: 知道还该不该买这个房子。
:
: 题。
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