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请教一个酶动力学的问题
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请教一个酶动力学的问题# Biology - 生物学
L*t
1
有一个醛缩酶在体内的反应如下
X ----> Y + Z
具体反应机制暂时不明,但应该是ping-pong mechanism
文献中测活的方式体系是再加一种酶把Z转换成可以显色的产物,但是我发现实际上Y甚
至X也参与第二步反应,也就是说这是个Dirty System,尝试过用数学方法分析但是数
据本身的可重复性也很差,可能是因为底物X的纯度不够,总之是一团糟。
还有一种测活方法就是利用逆反应:
Z + Y ----> X
X也可以转化成可显色的产物,试验的结果很不错,重复了几次都差不多。但是得出的
数据和另一个反应方向依然无法统一。问题是我要怎么说服老板相信只有这个方向上的
数据是可信的?一个可逆反应,两个方向上的Kcat是一样的吗?
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x*2
2
ping-pong mechanism不是要有两个底物的么?
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a*x
3
不是很清楚你的设计,正向kcat时,饱和底物是X?逆向kcat饱和底物是?
可逆反应的kcat两个方向当然不同,因为Gibbs free energy不同
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L*t
4
两个方向上饱和底物都是Y,而且Y过量的话感觉有Substrate Inhibition
kcat的问题我想清楚了,谢谢!

【在 a*****x 的大作中提到】
: 不是很清楚你的设计,正向kcat时,饱和底物是X?逆向kcat饱和底物是?
: 可逆反应的kcat两个方向当然不同,因为Gibbs free energy不同

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p*u
5
关于 Y的浓度 你一般的酶动力学都是考虑到他的初始速度,摸索一个合适的浓度,合
适的时间段内做动力学应该没问题。
至于你说的 文献中测活的方式体系是再加一种酶把Z转换成可以显色的产物
这个反应应该非常快,这一步应该一般不考虑。但是你说 你发现 Y X 也参与,那你老
板还敢用吗?而且那个文献的测活方法也不适合你这个系统吧。
其实X的浓度挺关键的,它的数值应该直接关系到你数学分析中用到的数据。
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