玩 AKT 的牛人们请进! 也请脂代谢专家提建议!谢谢! - 未名空间MITBBS历史存档

国际科技财经博客移民网络热点娱乐民生时事公众号

Redian新闻

>未名空间

>Biology - 生物学

玩 AKT 的牛人们请进! 也请脂代谢专家提建议!谢谢!

玩 AKT 的牛人们请进! 也请脂代谢专家提建议!谢谢!# Biology - 生物学

s*g2012-09-12 07:09

1 楼

面对浩瀚的文献,哪位好心人能给我些提示或给个参考资料.(原谅我想偷懒)
最近我的对照组(癌细胞系)里没有p-AKT Ser473,但给了药物,72小时会有明显
apoptosis.在48小时的Western Blot显示:药物可以引起Dose-dependent p-AKT
Ser473 水平增加.
Dose-dependent p-AKT Ser473 水平增加和细胞凋亡有何联系?难道48小时的磷酸化是
有利于细胞生存的?还是有利于细胞凋亡的?
(药物是引起细胞胆固醇外流的)
谢谢!

s*g2012-09-12 07:09

2 楼

The integrity of cholesterol-enriched microdomains is essential for the
constitutive high activity of protein kinase B in tumour cells
PMID: 15494028
Cholesterol-depleting agent induces dephosphorylation of PKB/Akt in class I-
deficient B16BL6-8 and B16BL6-9 cells
咋和我的结果想反呢?也许我的癌细胞系原来就没有constitutive high activity of
AKT?

g*n2012-09-12 07:09

3 楼

换个角度考虑。p-AKT水平的增高是在那些存活的细胞里，而不是死亡的细胞里。

D*a2012-09-12 07:09

4 楼

PI3K-AKT不是proliferation通路吗，抑制apoptosis的啊

s*g2012-09-12 07:09

5 楼

是啊?所以我奇怪啊!

【在 D*a 的大作中提到】

: PI3K-AKT不是proliferation通路吗，抑制apoptosis的啊

s*g2012-09-12 07:09

6 楼

的确,48小时没有明显的细胞凋亡.要到72小时才有.但对照组没有p-AKT啊!
而且Western Blot收集死和活(both)的细胞啊.(对了,我的细胞是悬浮培养的不是贴壁
的,如果是贴壁,到是可能取的都是活细胞做Western Blot)

【在 g*****n 的大作中提到】

: 换个角度考虑。p-AKT水平的增高是在那些存活的细胞里，而不是死亡的细胞里。

D*a2012-09-12 07:09

7 楼

那你的癌细胞本来没有AKT正常吗？文献有说为什么吗？（不是做癌症的，不知道是不
是癌细胞都激活ATK）

【在 s*****g 的大作中提到】

: 的确,48小时没有明显的细胞凋亡.要到72小时才有.但对照组没有p-AKT啊!
: 而且Western Blot收集死和活(both)的细胞啊.(对了,我的细胞是悬浮培养的不是贴壁
: 的,如果是贴壁,到是可能取的都是活细胞做Western Blot)

s*l2012-09-12 07:09

8 楼

加个AKT inhibitor不就知道了吗

【在 s*****g 的大作中提到】

: 面对浩瀚的文献,哪位好心人能给我些提示或给个参考资料.(原谅我想偷懒)
: 最近我的对照组(癌细胞系)里没有p-AKT Ser473,但给了药物,72小时会有明显
: apoptosis.在48小时的Western Blot显示:药物可以引起Dose-dependent p-AKT
: Ser473 水平增加.
: Dose-dependent p-AKT Ser473 水平增加和细胞凋亡有何联系?难道48小时的磷酸化是
: 有利于细胞生存的?还是有利于细胞凋亡的?
: (药物是引起细胞胆固醇外流的)
: 谢谢!

l*y2012-09-12 07:09

9 楼

啥药？308 呢？
给药造成 AKT，ERK 啥的被 up-regulate 很正常啊。

【在 s*****g 的大作中提到】

g*n2012-09-12 07:09

10 楼

对照组没有p-AKT也好理解。增高p-AKT是细胞为了存活而抵抗药物的反应。对照组没有
药物（我猜），所以就没有这个反应。

s*g2012-09-12 07:09

11 楼

还没有测T308
为莫正常,为生存下去最后一搏?

【在 l***y 的大作中提到】

: 啥药？308 呢？
: 给药造成 AKT，ERK 啥的被 up-regulate 很正常啊。

s*g2012-09-12 07:09

12 楼

谢了,试试

【在 s****l 的大作中提到】

: 加个AKT inhibitor不就知道了吗

l*y2012-09-12 07:09

13 楼

对呀。有些像动物的 fight-or-flight response。这也是 tumor drug resistance 的
机制之一。

【在 s*****g 的大作中提到】

: 还没有测T308
: 为莫正常,为生存下去最后一搏?

S*s2012-09-12 07:09

14 楼

为什么要研究这个问题？

【在 s*****g 的大作中提到】

D*a2012-09-12 07:09

15 楼

搭车问一下有没有文献研究overactivate这条通路反而引起更严重的反应的机理的。不
一定是在癌细胞中，就是各种stress下的细胞survival。

【在 l***y 的大作中提到】

: 对呀。有些像动物的 fight-or-flight response。这也是 tumor drug resistance 的
: 机制之一。

s*g2012-09-12 07:09

16 楼

Dua,你很有眼光!

【在 D*a 的大作中提到】

: 搭车问一下有没有文献研究overactivate这条通路反而引起更严重的反应的机理的。不
: 一定是在癌细胞中，就是各种stress下的细胞survival。

s*g2012-09-12 07:09

17 楼

因为脂代谢(胆固醇流失)会破坏细胞膜的结构啊,而AKT接受信号有可能在接近膜的地方
啊...

【在 S*********s 的大作中提到】

: 为什么要研究这个问题？

l*y2012-09-12 07:09

18 楼

所以很感兴趣 308 有没有动静，和 473 谁先有的动静。

【在 s*****g 的大作中提到】

: 因为脂代谢(胆固醇流失)会破坏细胞膜的结构啊,而AKT接受信号有可能在接近膜的地方
: 啊...

l*y2012-09-12 07:09

19 楼

在做一条通路，hyp 是：药理是细胞在 drug treatment 的 challenge 下，错误地激
活了一条与 survival 相关的通路，最终反而导致 apoptosis。盼 paper 能被收。。。

【在 D*a 的大作中提到】

: 搭车问一下有没有文献研究overactivate这条通路反而引起更严重的反应的机理的。不
: 一定是在癌细胞中，就是各种stress下的细胞survival。

s*g2012-09-12 07:09

20 楼

完成了?希望能尽快拜读!
我也是有着类似想法..但就是找不到响应的文献.等你的文章了哦!能被收后第一个发给
我啊!谢谢!
这个AKT在我的药物里跟以往文献都满拧的.

。。

【在 l***y 的大作中提到】

: 在做一条通路，hyp 是：药理是细胞在 drug treatment 的 challenge 下，错误地激
: 活了一条与 survival 相关的通路，最终反而导致 apoptosis。盼 paper 能被收。。。

s*g2012-09-12 07:09

21 楼

好,做!!!!

【在 l***y 的大作中提到】

: 所以很感兴趣 308 有没有动静，和 473 谁先有的动静。

D*a2012-09-12 07:09

22 楼

收了之后也发一份给我啊～

。。

【在 l***y 的大作中提到】

l*y2012-09-12 07:09

23 楼

一定一定。
Tumor drug responses 中 ERK1/2 啥的被激活还是挺常见的。比如说手头这个数据，
给药后 5 分钟 ERK pT202 就达到峰值，AKT pT308 也出现峰值，而 AKT pS473 缓步
上升，要在 60 分钟时才达到峰值，同时 AKT pT308 出现第二次也是更高的峰值。而
细胞还是挂掉了。
对了，哪位知道除了 MEK 以外，还有谁能直接磷酸化 ERK1/2 T202/Y204 啊？我们的
数据表明 MEK1 pS217 没有动静，ERK 却发飙了。准备用 U0126 再 validate 一次。

【在 s*****g 的大作中提到】

: 完成了?希望能尽快拜读!
: 我也是有着类似想法..但就是找不到响应的文献.等你的文章了哦!能被收后第一个发给
: 我啊!谢谢!
: 这个AKT在我的药物里跟以往文献都满拧的.
:
: 。。

l*12012-09-12 07:09

24 楼

Please refer
Swedish Umeå Universitet. [2007] one PhD Dissertation
title:
Studies of phosphatidylinositol 3 kinase (PI3K) signaling pathway in
mammalian ovarian follicle activation and development
University dissertation from Umeå : Medicinsk kemi och biofysik
AUTHOR: Singareddy Rajareddy
KEYWORDS: oocyte; follicular development; P13K pathway; Medical Biochemistry
; medicinsk biokemi;
ABSTRACT: ignored and (iii) the overactivated follicles in p27-/- ovaries
are depleted in early adulthood, causing premature ovarian failure (POF). In
this thesis, we also provide genetic evidence that in mice with conditional
deletion of Pten a major negative regulator of PI3K in oocytes, the entire
pool of primordial follicles becomes activated, and subsequently all
activated follicles are depleted in young adulthood, causing POF.
full text PDF file free download link:
http://www.dissertations.se/dissertation/2d55c8e14a/
Re LZ
pls refer
Rajareddy S et al. (2007)
p27kip1 (cyclin-dependent kinase inhibitor 1B) controls ovarian development
by suppressing follicle endowment and activation and promoting follicle
atresia in mice.
Mol Endocrinol. 2007 21: 2189-202.
its pp2194 right column bottom:
>p27 and Foxo3a Suppress Primordial Follicle Activation
>Independently of Each Other. Recently, activation
of the oocyte PI3K pathway, including the
activation of Akt and suppression of Akt substrate
Foxo3a, has been suggested to be important for initiation
and further development of follicles (13, 18, 24).
Foxo3a is an Akt substrate that can be phosphorylated
and suppressed by Akt (25, 26).
link:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17565040

【在 D*a 的大作中提到】

: 搭车问一下有没有文献研究overactivate这条通路反而引起更严重的反应的机理的。不
: 一定是在癌细胞中，就是各种stress下的细胞survival。

D*a2012-09-12 07:09

25 楼

Merci!

Biochemistry

【在 l**********1 的大作中提到】

: Please refer
: Swedish Umeå Universitet. [2007] one PhD Dissertation
: title:
: Studies of phosphatidylinositol 3 kinase (PI3K) signaling pathway in
: mammalian ovarian follicle activation and development
: University dissertation from Umeå : Medicinsk kemi och biofysik
: AUTHOR: Singareddy Rajareddy
: KEYWORDS: oocyte; follicular development; P13K pathway; Medical Biochemistry
: ; medicinsk biokemi;
: ABSTRACT: ignored and (iii) the overactivated follicles in p27-/- ovaries

l*12012-09-12 07:09

26 楼

De rien
i just met below this 2012 new paper:
link:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22496911
its last author supper bull: Cordon-Cardo C.
then google get above Umea degree thesis
for him, Cordon-Cardo C.
please refer:
New techniques boost fight against prostate cancer
KATIE CHARLES
Wednesday, March 28, 2012
http://articles.nydailynews.com/2012-03-28/news/31251949_1_pros
his tube video:
http://www.youtube.com/watch?v=rl24zK1RS8M

【在 D*a 的大作中提到】

: Merci!
:
: Biochemistry

D*a2012-09-12 07:09

27 楼

居然叫iCre，小心回头被苹果告了哈哈

【在 l**********1 的大作中提到】

: De rien
: i just met below this 2012 new paper:
: link:
: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22496911
: its last author supper bull: Cordon-Cardo C.
: then google get above Umea degree thesis
: for him, Cordon-Cardo C.
: please refer:
: New techniques boost fight against prostate cancer
: KATIE CHARLES

s*g2012-09-12 07:09

28 楼

"细胞还是挂掉了"是在给药的24小时/48小时?我还真没有看过这么早的ERK/AKT/ERK.但
我在另一个药物里也见到ERK磷酸化的现象.通常我的药是在48小时时要了癌细胞的命的.
一般你用AKT 或 PI3K 或 ERK inhibitors 是那几种?哪些厂家的好?谢谢!
翘首以待您的大做文章横空出世!^-^

【在 l***y 的大作中提到】

: 一定一定。
: Tumor drug responses 中 ERK1/2 啥的被激活还是挺常见的。比如说手头这个数据，
: 给药后 5 分钟 ERK pT202 就达到峰值，AKT pT308 也出现峰值，而 AKT pS473 缓步
: 上升，要在 60 分钟时才达到峰值，同时 AKT pT308 出现第二次也是更高的峰值。而
: 细胞还是挂掉了。
: 对了，哪位知道除了 MEK 以外，还有谁能直接磷酸化 ERK1/2 T202/Y204 啊？我们的
: 数据表明 MEK1 pS217 没有动静，ERK 却发飙了。准备用 U0126 再 validate 一次。

s*g2012-09-12 07:09

29 楼

大牛人,心真好!
好人有好抱!

Biochemistry

【在 l**********1 的大作中提到】

s*g2012-09-12 07:09

30 楼

谢谢,最近做FOXO3啊,它不被AKT抑制,也正摸石头过河呢.

Biochemistry

【在 l**********1 的大作中提到】