w*r
2 楼
玻璃和刀片的位置要调好，
调好了切出来就是平直的，不会卷。
下刀的速度也要干脆利索。
无它，只能自己慢慢摸索
调好了切出来就是平直的，不会卷。
下刀的速度也要干脆利索。
无它，只能自己慢慢摸索
w*n
3 楼
你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致
然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的，
【在 w****l 的大作中提到】
: 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
: 厚度10um左右
然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的，
【在 w****l 的大作中提到】
: 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
: 厚度10um左右
w*n
4 楼
你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致
然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的，
【在 w****l 的大作中提到】
: 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
: 厚度10um左右
然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的，
【在 w****l 的大作中提到】
: 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
: 厚度10um左右
w*l
5 楼
我用的是0度角，就是会翘起来
【在 w********r 的大作中提到】
: 玻璃和刀片的位置要调好，
: 调好了切出来就是平直的，不会卷。
: 下刀的速度也要干脆利索。
: 无它，只能自己慢慢摸索
【在 w********r 的大作中提到】
: 玻璃和刀片的位置要调好，
: 调好了切出来就是平直的，不会卷。
: 下刀的速度也要干脆利索。
: 无它，只能自己慢慢摸索
w*l
6 楼
就是载玻片粘的时候特别容易出摺，tissue和oct粘的速度不一致
还有就是tissue从oct里面脱出来，然后翘起来，特别容易出摺
【在 w*********n 的大作中提到】
: 你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致
: 然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的，
还有就是tissue从oct里面脱出来，然后翘起来，特别容易出摺
【在 w*********n 的大作中提到】
: 你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致
: 然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的，
D*a
7 楼
试试放液体里面，IHC or 染色完了再放玻璃里。这样IHC的效果还好。
具体液体不知
具体液体不知
w*l
8 楼
这种float染色，小的tissue都没问题，譬如spinal cord，brain不太好处理，太大了
容易破，上完substrate之后干的时候也容易出摺，染色倒是很深，而且sample太多，
float的工作量太大，时间也不好控制，还是粘在片子上容易，
我试过30um的下来放PBS里，然后在干片，倒是不出摺了，就是工作量太大，一次染色
一般做20多只老鼠，每个老鼠都取7－8个section，处理不过来
总之就是直接粘片子能不出摺是最好最快的
容易破，上完substrate之后干的时候也容易出摺，染色倒是很深，而且sample太多，
float的工作量太大，时间也不好控制，还是粘在片子上容易，
我试过30um的下来放PBS里，然后在干片，倒是不出摺了，就是工作量太大，一次染色
一般做20多只老鼠，每个老鼠都取7－8个section，处理不过来
总之就是直接粘片子能不出摺是最好最快的
h*y
9 楼
冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
entane的温度要控制好，用小块干冰测试一下（要求没有气泡出来）。
这种方法冻的组织，做全脑的cross section，saggital section，从7-40 um都做过，
效果很好。既能做免疫染色，也能做in situ。
另外一个tip是不要直接用室温的玻璃片去贴切下来的片子。你可以把一个小刷子和玻璃
片预先放在切片机中，让它的温度平衡到和样本一样的温度，这样即使片子有皱褶，你
也可以用刷子把片子展平。
切好的片子保存在-80C，用的时候取出来，在室温下放30-60分钟先，完全干燥后再开始
做实验，片子贴的很牢，不会担心掉下来。
【在 w****l 的大作中提到】
: 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
: 厚度10um左右
冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
entane的温度要控制好，用小块干冰测试一下（要求没有气泡出来）。
这种方法冻的组织，做全脑的cross section，saggital section，从7-40 um都做过，
效果很好。既能做免疫染色，也能做in situ。
另外一个tip是不要直接用室温的玻璃片去贴切下来的片子。你可以把一个小刷子和玻璃
片预先放在切片机中，让它的温度平衡到和样本一样的温度，这样即使片子有皱褶，你
也可以用刷子把片子展平。
切好的片子保存在-80C，用的时候取出来，在室温下放30-60分钟先，完全干燥后再开始
做实验，片子贴的很牢，不会担心掉下来。
【在 w****l 的大作中提到】
: 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
: 厚度10um左右
s*r
10 楼
有没有用RNAse later之类的溶液灌注老鼠的，
这样的话RNA会不会保存的好一点，in situ
容易一点。
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
这样的话RNA会不会保存的好一点，in situ
容易一点。
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
w*l
11 楼
我用methylbutane其他的和你一样，我试过冷片子放上放tissue，弄好了是没褶，
有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
我染色的结果也都很好，就是有褶
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
我染色的结果也都很好，就是有褶
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
h*y
12 楼
Methylbutane就是isopentane啊。呵呵
【在 w****l 的大作中提到】
: 我用methylbutane其他的和你一样，我试过冷片子放上放tissue，弄好了是没褶，
: 有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
: 我染色的结果也都很好，就是有褶
:
: PF
: Isop
: 做好
: 子，
: Isop
【在 w****l 的大作中提到】
: 我用methylbutane其他的和你一样，我试过冷片子放上放tissue，弄好了是没褶，
: 有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
: 我染色的结果也都很好，就是有褶
:
: PF
: Isop
: 做好
: 子，
: Isop
w*l
13 楼
土了，你这么一说我好像记得那个瓶上也有个iso什么的
【在 h******y 的大作中提到】
: Methylbutane就是isopentane啊。呵呵
【在 h******y 的大作中提到】
: Methylbutane就是isopentane啊。呵呵
s*r
14 楼
这儿有个网址，希望能有参考，
http://pathologyinnovations.com/frozen_section_technique.htm
也有视频
www.youtube.com/watch?v=QEPMRAzBfEg
【在 w****l 的大作中提到】
: 我用methylbutane其他的和你一样，我试过冷片子放上放tissue，弄好了是没褶，
: 有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
: 我染色的结果也都很好，就是有褶
:
: PF
: Isop
: 做好
: 子，
: Isop
http://pathologyinnovations.com/frozen_section_technique.htm
也有视频
www.youtube.com/watch?v=QEPMRAzBfEg
【在 w****l 的大作中提到】
: 我用methylbutane其他的和你一样，我试过冷片子放上放tissue，弄好了是没褶，
: 有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
: 我染色的结果也都很好，就是有褶
:
: PF
: Isop
: 做好
: 子，
: Isop
h*y
15 楼
忘了说了，用小刷子把片子展平以后，把你的手指在片子后面放一小会，让片子稍稍化
一点，就粘上了。而且保证没有褶。
【在 w****l 的大作中提到】
: 我用methylbutane其他的和你一样，我试过冷片子放上放tissue，弄好了是没褶，
: 有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
: 我染色的结果也都很好，就是有褶
:
: PF
: Isop
: 做好
: 子，
: Isop
一点，就粘上了。而且保证没有褶。
【在 w****l 的大作中提到】
: 我用methylbutane其他的和你一样，我试过冷片子放上放tissue，弄好了是没褶，
: 有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
: 我染色的结果也都很好，就是有褶
:
: PF
: Isop
: 做好
: 子，
: Isop
w*l
16 楼
下回试一下这个trick
【在 h******y 的大作中提到】
: 忘了说了，用小刷子把片子展平以后，把你的手指在片子后面放一小会，让片子稍稍化
: 一点，就粘上了。而且保证没有褶。
【在 h******y 的大作中提到】
: 忘了说了，用小刷子把片子展平以后，把你的手指在片子后面放一小会，让片子稍稍化
: 一点，就粘上了。而且保证没有褶。
w*l
17 楼
如果一张片子上要粘好几片tissue呢
【在 h******y 的大作中提到】
: 忘了说了，用小刷子把片子展平以后，把你的手指在片子后面放一小会，让片子稍稍化
: 一点，就粘上了。而且保证没有褶。
【在 h******y 的大作中提到】
: 忘了说了，用小刷子把片子展平以后，把你的手指在片子后面放一小会，让片子稍稍化
: 一点，就粘上了。而且保证没有褶。
w*l
18 楼
还有cryostat上有两个温度
一个是OC,一个CT，我现在一个是-20，一个-25
那个是你说的温度
【在 h******y 的大作中提到】
: 忘了说了，用小刷子把片子展平以后，把你的手指在片子后面放一小会，让片子稍稍化
: 一点，就粘上了。而且保证没有褶。
一个是OC,一个CT，我现在一个是-20，一个-25
那个是你说的温度
【在 h******y 的大作中提到】
: 忘了说了，用小刷子把片子展平以后，把你的手指在片子后面放一小会，让片子稍稍化
: 一点，就粘上了。而且保证没有褶。
w*l
19 楼
我粘片子手法和这个视频里一样的，但还是会出褶
【在 s******r 的大作中提到】
: 这儿有个网址，希望能有参考，
: http://pathologyinnovations.com/frozen_section_technique.htm
: 也有视频
: www.youtube.com/watch?v=QEPMRAzBfEg
【在 s******r 的大作中提到】
: 这儿有个网址，希望能有参考，
: http://pathologyinnovations.com/frozen_section_technique.htm
: 也有视频
: www.youtube.com/watch?v=QEPMRAzBfEg
h*y
20 楼
贴好一个再放下一张。
【在 w****l 的大作中提到】
: 如果一张片子上要粘好几片tissue呢
【在 w****l 的大作中提到】
: 如果一张片子上要粘好几片tissue呢
h*y
21 楼
这你得看看你的Cryostat的manual。我指的是标本的温度。
【在 w****l 的大作中提到】
: 还有cryostat上有两个温度
: 一个是OC,一个CT，我现在一个是-20，一个-25
: 那个是你说的温度
【在 w****l 的大作中提到】
: 还有cryostat上有两个温度
: 一个是OC,一个CT，我现在一个是-20，一个-25
: 那个是你说的温度
w*l
22 楼
是不是就是粘着样品的那个小圆台子的温度
【在 h******y 的大作中提到】
: 这你得看看你的Cryostat的manual。我指的是标本的温度。
【在 h******y 的大作中提到】
: 这你得看看你的Cryostat的manual。我指的是标本的温度。
w*l
23 楼
另外flash frozen的tissue,譬如人的spinal cord的切片有什么讲究
为了切方便，我又把它冻到oct了，在tissue没化的时候硬的冻得
【在 h******y 的大作中提到】
: 这你得看看你的Cryostat的manual。我指的是标本的温度。
为了切方便，我又把它冻到oct了，在tissue没化的时候硬的冻得
【在 h******y 的大作中提到】
: 这你得看看你的Cryostat的manual。我指的是标本的温度。
h*y
24 楼
没错
【在 w****l 的大作中提到】
: 是不是就是粘着样品的那个小圆台子的温度
【在 w****l 的大作中提到】
: 是不是就是粘着样品的那个小圆台子的温度
h*y
25 楼
我没切过人的组织。
但是我不建议把冻好的组织再冻到OCT里。OCT的温度是室温，如果你把冻好的组织放在
OCT中，样本外围接触OCT的一圈会发生一个解冻再复冻的过程，这个过程中样本中的水
重新结晶，对组织形态破坏很大。
【在 w****l 的大作中提到】
: 另外flash frozen的tissue,譬如人的spinal cord的切片有什么讲究
: 为了切方便，我又把它冻到oct了，在tissue没化的时候硬的冻得
但是我不建议把冻好的组织再冻到OCT里。OCT的温度是室温，如果你把冻好的组织放在
OCT中，样本外围接触OCT的一圈会发生一个解冻再复冻的过程，这个过程中样本中的水
重新结晶，对组织形态破坏很大。
【在 w****l 的大作中提到】
: 另外flash frozen的tissue,譬如人的spinal cord的切片有什么讲究
: 为了切方便，我又把它冻到oct了，在tissue没化的时候硬的冻得
w*l
26 楼
那像这种情况怎么弄，没有oct的花不太好切啊
【在 h******y 的大作中提到】
: 我没切过人的组织。
: 但是我不建议把冻好的组织再冻到OCT里。OCT的温度是室温，如果你把冻好的组织放在
: OCT中，样本外围接触OCT的一圈会发生一个解冻再复冻的过程，这个过程中样本中的水
: 重新结晶，对组织形态破坏很大。
【在 h******y 的大作中提到】
: 我没切过人的组织。
: 但是我不建议把冻好的组织再冻到OCT里。OCT的温度是室温，如果你把冻好的组织放在
: OCT中，样本外围接触OCT的一圈会发生一个解冻再复冻的过程，这个过程中样本中的水
: 重新结晶，对组织形态破坏很大。
h*y
27 楼
可以用一点OCT把你的样本站在那个Stage上。
【在 w****l 的大作中提到】
: 那像这种情况怎么弄，没有oct的花不太好切啊
【在 w****l 的大作中提到】
: 那像这种情况怎么弄，没有oct的花不太好切啊
D*a
28 楼
我们是泡了蔗糖还要泡加了gelatine的蔗糖，然后包埋是用gelatine和蔗糖包埋，再冻
。有了gelatine之后，－20就软了，－25才能切。不知道是不是更均一一些。
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
。有了gelatine之后，－20就软了，－25才能切。不知道是不是更均一一些。
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
l*1
29 楼
Mark.
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
w*l
30 楼
譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
厚度10um左右
厚度10um左右
w*r
31 楼
玻璃和刀片的位置要调好，
调好了切出来就是平直的，不会卷。
下刀的速度也要干脆利索。
无它，只能自己慢慢摸索
调好了切出来就是平直的，不会卷。
下刀的速度也要干脆利索。
无它，只能自己慢慢摸索
w*n
32 楼
你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致
然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的，
【在 w****l 的大作中提到】
: 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
: 厚度10um左右
然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的，
【在 w****l 的大作中提到】
: 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
: 厚度10um左右
w*n
33 楼
你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致
然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的，
【在 w****l 的大作中提到】
: 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
: 厚度10um左右
然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的，
【在 w****l 的大作中提到】
: 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
: 厚度10um左右
w*l
34 楼
我用的是0度角，就是会翘起来
【在 w********r 的大作中提到】
: 玻璃和刀片的位置要调好，
: 调好了切出来就是平直的，不会卷。
: 下刀的速度也要干脆利索。
: 无它，只能自己慢慢摸索
【在 w********r 的大作中提到】
: 玻璃和刀片的位置要调好，
: 调好了切出来就是平直的，不会卷。
: 下刀的速度也要干脆利索。
: 无它，只能自己慢慢摸索
w*l
35 楼
就是载玻片粘的时候特别容易出摺，tissue和oct粘的速度不一致
还有就是tissue从oct里面脱出来，然后翘起来，特别容易出摺
【在 w*********n 的大作中提到】
: 你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致
: 然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的，
还有就是tissue从oct里面脱出来，然后翘起来，特别容易出摺
【在 w*********n 的大作中提到】
: 你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致
: 然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的，
D*a
36 楼
试试放液体里面，IHC or 染色完了再放玻璃里。这样IHC的效果还好。
具体液体不知
具体液体不知
w*l
37 楼
这种float染色，小的tissue都没问题，譬如spinal cord，brain不太好处理，太大了
容易破，上完substrate之后干的时候也容易出摺，染色倒是很深，而且sample太多，
float的工作量太大，时间也不好控制，还是粘在片子上容易，
我试过30um的下来放PBS里，然后在干片，倒是不出摺了，就是工作量太大，一次染色
一般做20多只老鼠，每个老鼠都取7－8个section，处理不过来
总之就是直接粘片子能不出摺是最好最快的
容易破，上完substrate之后干的时候也容易出摺，染色倒是很深，而且sample太多，
float的工作量太大，时间也不好控制，还是粘在片子上容易，
我试过30um的下来放PBS里，然后在干片，倒是不出摺了，就是工作量太大，一次染色
一般做20多只老鼠，每个老鼠都取7－8个section，处理不过来
总之就是直接粘片子能不出摺是最好最快的
h*y
38 楼
冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
entane的温度要控制好，用小块干冰测试一下（要求没有气泡出来）。
这种方法冻的组织，做全脑的cross section，saggital section，从7-40 um都做过，
效果很好。既能做免疫染色，也能做in situ。
另外一个tip是不要直接用室温的玻璃片去贴切下来的片子。你可以把一个小刷子和玻璃
片预先放在切片机中，让它的温度平衡到和样本一样的温度，这样即使片子有皱褶，你
也可以用刷子把片子展平。
切好的片子保存在-80C，用的时候取出来，在室温下放30-60分钟先，完全干燥后再开始
做实验，片子贴的很牢，不会担心掉下来。
【在 w****l 的大作中提到】
: 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
: 厚度10um左右
冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
entane的温度要控制好，用小块干冰测试一下（要求没有气泡出来）。
这种方法冻的组织，做全脑的cross section，saggital section，从7-40 um都做过，
效果很好。既能做免疫染色，也能做in situ。
另外一个tip是不要直接用室温的玻璃片去贴切下来的片子。你可以把一个小刷子和玻璃
片预先放在切片机中，让它的温度平衡到和样本一样的温度，这样即使片子有皱褶，你
也可以用刷子把片子展平。
切好的片子保存在-80C，用的时候取出来，在室温下放30-60分钟先，完全干燥后再开始
做实验，片子贴的很牢，不会担心掉下来。
【在 w****l 的大作中提到】
: 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
: 厚度10um左右
s*r
39 楼
有没有用RNAse later之类的溶液灌注老鼠的，
这样的话RNA会不会保存的好一点，in situ
容易一点。
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
这样的话RNA会不会保存的好一点，in situ
容易一点。
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
w*l
40 楼
我用methylbutane其他的和你一样，我试过冷片子放上放tissue，弄好了是没褶，
有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
我染色的结果也都很好，就是有褶
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
我染色的结果也都很好，就是有褶
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
h*y
41 楼
Methylbutane就是isopentane啊。呵呵
【在 w****l 的大作中提到】
: 我用methylbutane其他的和你一样，我试过冷片子放上放tissue，弄好了是没褶，
: 有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
: 我染色的结果也都很好，就是有褶
:
: PF
: Isop
: 做好
: 子，
: Isop
【在 w****l 的大作中提到】
: 我用methylbutane其他的和你一样，我试过冷片子放上放tissue，弄好了是没褶，
: 有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
: 我染色的结果也都很好，就是有褶
:
: PF
: Isop
: 做好
: 子，
: Isop
w*l
42 楼
土了，你这么一说我好像记得那个瓶上也有个iso什么的
【在 h******y 的大作中提到】
: Methylbutane就是isopentane啊。呵呵
【在 h******y 的大作中提到】
: Methylbutane就是isopentane啊。呵呵
s*r
43 楼
这儿有个网址，希望能有参考，
http://pathologyinnovations.com/frozen_section_technique.htm
也有视频
www.youtube.com/watch?v=QEPMRAzBfEg
【在 w****l 的大作中提到】
: 我用methylbutane其他的和你一样，我试过冷片子放上放tissue，弄好了是没褶，
: 有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
: 我染色的结果也都很好，就是有褶
:
: PF
: Isop
: 做好
: 子，
: Isop
http://pathologyinnovations.com/frozen_section_technique.htm
也有视频
www.youtube.com/watch?v=QEPMRAzBfEg
【在 w****l 的大作中提到】
: 我用methylbutane其他的和你一样，我试过冷片子放上放tissue，弄好了是没褶，
: 有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
: 我染色的结果也都很好，就是有褶
:
: PF
: Isop
: 做好
: 子，
: Isop
h*y
44 楼
忘了说了，用小刷子把片子展平以后，把你的手指在片子后面放一小会，让片子稍稍化
一点，就粘上了。而且保证没有褶。
【在 w****l 的大作中提到】
: 我用methylbutane其他的和你一样，我试过冷片子放上放tissue，弄好了是没褶，
: 有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
: 我染色的结果也都很好，就是有褶
:
: PF
: Isop
: 做好
: 子，
: Isop
一点，就粘上了。而且保证没有褶。
【在 w****l 的大作中提到】
: 我用methylbutane其他的和你一样，我试过冷片子放上放tissue，弄好了是没褶，
: 有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
: 我染色的结果也都很好，就是有褶
:
: PF
: Isop
: 做好
: 子，
: Isop
w*l
45 楼
下回试一下这个trick
【在 h******y 的大作中提到】
: 忘了说了，用小刷子把片子展平以后，把你的手指在片子后面放一小会，让片子稍稍化
: 一点，就粘上了。而且保证没有褶。
【在 h******y 的大作中提到】
: 忘了说了，用小刷子把片子展平以后，把你的手指在片子后面放一小会，让片子稍稍化
: 一点，就粘上了。而且保证没有褶。
w*l
46 楼
如果一张片子上要粘好几片tissue呢
【在 h******y 的大作中提到】
: 忘了说了，用小刷子把片子展平以后，把你的手指在片子后面放一小会，让片子稍稍化
: 一点，就粘上了。而且保证没有褶。
【在 h******y 的大作中提到】
: 忘了说了，用小刷子把片子展平以后，把你的手指在片子后面放一小会，让片子稍稍化
: 一点，就粘上了。而且保证没有褶。
w*l
47 楼
还有cryostat上有两个温度
一个是OC,一个CT，我现在一个是-20，一个-25
那个是你说的温度
【在 h******y 的大作中提到】
: 忘了说了，用小刷子把片子展平以后，把你的手指在片子后面放一小会，让片子稍稍化
: 一点，就粘上了。而且保证没有褶。
一个是OC,一个CT，我现在一个是-20，一个-25
那个是你说的温度
【在 h******y 的大作中提到】
: 忘了说了，用小刷子把片子展平以后，把你的手指在片子后面放一小会，让片子稍稍化
: 一点，就粘上了。而且保证没有褶。
w*l
48 楼
我粘片子手法和这个视频里一样的，但还是会出褶
【在 s******r 的大作中提到】
: 这儿有个网址，希望能有参考，
: http://pathologyinnovations.com/frozen_section_technique.htm
: 也有视频
: www.youtube.com/watch?v=QEPMRAzBfEg
【在 s******r 的大作中提到】
: 这儿有个网址，希望能有参考，
: http://pathologyinnovations.com/frozen_section_technique.htm
: 也有视频
: www.youtube.com/watch?v=QEPMRAzBfEg
h*y
49 楼
贴好一个再放下一张。
【在 w****l 的大作中提到】
: 如果一张片子上要粘好几片tissue呢
【在 w****l 的大作中提到】
: 如果一张片子上要粘好几片tissue呢
h*y
50 楼
这你得看看你的Cryostat的manual。我指的是标本的温度。
【在 w****l 的大作中提到】
: 还有cryostat上有两个温度
: 一个是OC,一个CT，我现在一个是-20，一个-25
: 那个是你说的温度
【在 w****l 的大作中提到】
: 还有cryostat上有两个温度
: 一个是OC,一个CT，我现在一个是-20，一个-25
: 那个是你说的温度
w*l
51 楼
是不是就是粘着样品的那个小圆台子的温度
【在 h******y 的大作中提到】
: 这你得看看你的Cryostat的manual。我指的是标本的温度。
【在 h******y 的大作中提到】
: 这你得看看你的Cryostat的manual。我指的是标本的温度。
w*l
52 楼
另外flash frozen的tissue,譬如人的spinal cord的切片有什么讲究
为了切方便，我又把它冻到oct了，在tissue没化的时候硬的冻得
【在 h******y 的大作中提到】
: 这你得看看你的Cryostat的manual。我指的是标本的温度。
为了切方便，我又把它冻到oct了，在tissue没化的时候硬的冻得
【在 h******y 的大作中提到】
: 这你得看看你的Cryostat的manual。我指的是标本的温度。
h*y
53 楼
没错
【在 w****l 的大作中提到】
: 是不是就是粘着样品的那个小圆台子的温度
【在 w****l 的大作中提到】
: 是不是就是粘着样品的那个小圆台子的温度
h*y
54 楼
我没切过人的组织。
但是我不建议把冻好的组织再冻到OCT里。OCT的温度是室温，如果你把冻好的组织放在
OCT中，样本外围接触OCT的一圈会发生一个解冻再复冻的过程，这个过程中样本中的水
重新结晶，对组织形态破坏很大。
【在 w****l 的大作中提到】
: 另外flash frozen的tissue,譬如人的spinal cord的切片有什么讲究
: 为了切方便，我又把它冻到oct了，在tissue没化的时候硬的冻得
但是我不建议把冻好的组织再冻到OCT里。OCT的温度是室温，如果你把冻好的组织放在
OCT中，样本外围接触OCT的一圈会发生一个解冻再复冻的过程，这个过程中样本中的水
重新结晶，对组织形态破坏很大。
【在 w****l 的大作中提到】
: 另外flash frozen的tissue,譬如人的spinal cord的切片有什么讲究
: 为了切方便，我又把它冻到oct了，在tissue没化的时候硬的冻得
w*l
55 楼
那像这种情况怎么弄，没有oct的花不太好切啊
【在 h******y 的大作中提到】
: 我没切过人的组织。
: 但是我不建议把冻好的组织再冻到OCT里。OCT的温度是室温，如果你把冻好的组织放在
: OCT中，样本外围接触OCT的一圈会发生一个解冻再复冻的过程，这个过程中样本中的水
: 重新结晶，对组织形态破坏很大。
【在 h******y 的大作中提到】
: 我没切过人的组织。
: 但是我不建议把冻好的组织再冻到OCT里。OCT的温度是室温，如果你把冻好的组织放在
: OCT中，样本外围接触OCT的一圈会发生一个解冻再复冻的过程，这个过程中样本中的水
: 重新结晶，对组织形态破坏很大。
h*y
56 楼
可以用一点OCT把你的样本站在那个Stage上。
【在 w****l 的大作中提到】
: 那像这种情况怎么弄，没有oct的花不太好切啊
【在 w****l 的大作中提到】
: 那像这种情况怎么弄，没有oct的花不太好切啊
D*a
57 楼
我们是泡了蔗糖还要泡加了gelatine的蔗糖，然后包埋是用gelatine和蔗糖包埋，再冻
。有了gelatine之后，－20就软了，－25才能切。不知道是不是更均一一些。
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
。有了gelatine之后，－20就软了，－25才能切。不知道是不是更均一一些。
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
l*1
58 楼
Mark.
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
B*s
59 楼
是用的粘附载玻片吗？
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