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请教一个关于actin和H2O2的问题
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J*7
2
是有两个结尾?
大神最后的怪笑是指他真的人格分裂了?
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o*n
3
以前装了CM7,玩了一段时间用WebOS doctor删掉。现在重新装了CM9,发现以前装的
apps什么的全在, 而且不能播放youtube或者flash。请问有什么高招? 谢谢!
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a*1
4
最近正在搞这个,
把actin, GSH, H2O2混一块儿,跑western, anti-actin, 结果除了actin自身的条带还
有一个分子量小一些的条带;
只把actin和GSH混一块儿就只有一条正常的带;
一直没想出个合理的解释,请问版上的大家有何高见哇~
多谢
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x*u
5
所有人被射杀那个是姐夫的幻想,其实奸细已经被发现,第二个才是真正结局
最后怪笑是Allen,很有可能最后两集都是Allen...
个人猜测,不代表任何官方解释哈

【在 J********7 的大作中提到】
: 是有两个结尾?
: 大神最后的怪笑是指他真的人格分裂了?

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K*o
6
先一键删除了CM9,然后用webos自带的security erase,然后用WebOS doctor重刷,然
后重装CM9?
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S*s
7
既然你做这么specific的实验,想必你在做protein S-glutathiolation的研究
可能的解释就是
GSH+GSH(+H2O2)->GSSG
Actin+GSSG->Actin-SSH
但有两个问题
1)你跑了Western,正常情况应该加了DTT,不应该看到modified actin
加DTT多煮煮,看看是否还在
另外,可以coincubate with IAA or IAM,do IEF,you should get more information
2) 一般来说band should go upshift, 但你看到了downshift,所以不敢肯定
这种情况时有发生
If it is really S-glutathiolation, you should go in vivo.
1)Check whether this modification happens under physiological and
pathological or drug treatment conditions.
2)Whether it is functional
Good luck.

【在 a******1 的大作中提到】
: 最近正在搞这个,
: 把actin, GSH, H2O2混一块儿,跑western, anti-actin, 结果除了actin自身的条带还
: 有一个分子量小一些的条带;
: 只把actin和GSH混一块儿就只有一条正常的带;
: 一直没想出个合理的解释,请问版上的大家有何高见哇~
: 多谢

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s*n
8
有传言可能会拍续集,所以留个悬念,后面可以随需要发挥,想怎么编就怎么演绎下去
。个人观点。
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S*s
9
make sure you are using recombinant protein not cell lysate.
Otherwise it is too complicate

【在 a******1 的大作中提到】
: 最近正在搞这个,
: 把actin, GSH, H2O2混一块儿,跑western, anti-actin, 结果除了actin自身的条带还
: 有一个分子量小一些的条带;
: 只把actin和GSH混一块儿就只有一条正常的带;
: 一直没想出个合理的解释,请问版上的大家有何高见哇~
: 多谢

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b*8
10
薄成功把自己杀人案洗白了
薄知道自己被吊打招供杀人是个定时炸弹
于是趁这次事件主动捅出来
并成功嫁祸他人
于是把自己彻底洗白
实际上上次垒球场杀人以后,事后薄早就找机会把尸体处理掉了,但难免会留下些蛛丝
马迹
结果蔺大傻瓜中了薄的奸计,画蛇添足伪造了现场,把真正线索都掩盖了
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a*1
11
最近正在搞这个,
把actin, GSH, H2O2混一块儿,跑western, anti-actin, 结果除了actin自身的条带还
有一个分子量小一些的条带;
只把actin和GSH混一块儿就只有一条正常的带;
一直没想出个合理的解释,请问版上的大家有何高见哇~
多谢
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S*s
12
既然你做这么specific的实验,想必你在做protein S-glutathiolation的研究
可能的解释就是
GSH+GSH(+H2O2)->GSSG
Actin+GSSG->Actin-SSH
但有两个问题
1)你跑了Western,正常情况应该加了DTT,不应该看到modified actin
加DTT多煮煮,看看是否还在
另外,可以coincubate with IAA or IAM,do IEF,you should get more information
2) 一般来说band should go upshift, 但你看到了downshift,所以不敢肯定
这种情况时有发生
If it is really S-glutathiolation, you should go in vivo.
1)Check whether this modification happens under physiological and
pathological or drug treatment conditions.
2)Whether it is functional
Good luck.

【在 a******1 的大作中提到】
: 最近正在搞这个,
: 把actin, GSH, H2O2混一块儿,跑western, anti-actin, 结果除了actin自身的条带还
: 有一个分子量小一些的条带;
: 只把actin和GSH混一块儿就只有一条正常的带;
: 一直没想出个合理的解释,请问版上的大家有何高见哇~
: 多谢

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S*s
13
make sure you are using recombinant protein not cell lysate.
Otherwise it is too complicate

【在 a******1 的大作中提到】
: 最近正在搞这个,
: 把actin, GSH, H2O2混一块儿,跑western, anti-actin, 结果除了actin自身的条带还
: 有一个分子量小一些的条带;
: 只把actin和GSH混一块儿就只有一条正常的带;
: 一直没想出个合理的解释,请问版上的大家有何高见哇~
: 多谢

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s*y
14
Summerwinds说的有道理,但是鉴于那个band size 变小,我再补充一个可能性,
就是actin oxidized。这种情况下是可能会跑得更快的(因为构型变了)

information

【在 S*********s 的大作中提到】
: 既然你做这么specific的实验,想必你在做protein S-glutathiolation的研究
: 可能的解释就是
: GSH+GSH(+H2O2)->GSSG
: Actin+GSSG->Actin-SSH
: 但有两个问题
: 1)你跑了Western,正常情况应该加了DTT,不应该看到modified actin
: 加DTT多煮煮,看看是否还在
: 另外,可以coincubate with IAA or IAM,do IEF,you should get more information
: 2) 一般来说band should go upshift, 但你看到了downshift,所以不敢肯定
: 这种情况时有发生

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a*1
15
是啊,刚开始做这个,好多都不懂,
我的loading buffer里加了b-ME,92C煮了8分钟; 其中有dtt的sample的确分子量小
的那条band变少了。
贴了个western图:左边是actin(1ug)+gsh(500uM)+h2o2(500uM) 在25ul反应体系,上
样量是1/2, 右边是在此基础上再加了10mM DTT的western 结果 ,anti-actin, 从上
至下第一条band是actin的大小(42kD),小的大概27,28kD
如果是upshift就好明白多了哇,这是第二次出现这种情况
IEF没怎么接触过,先做点homework去.
多谢

information

【在 S*********s 的大作中提到】
: 既然你做这么specific的实验,想必你在做protein S-glutathiolation的研究
: 可能的解释就是
: GSH+GSH(+H2O2)->GSSG
: Actin+GSSG->Actin-SSH
: 但有两个问题
: 1)你跑了Western,正常情况应该加了DTT,不应该看到modified actin
: 加DTT多煮煮,看看是否还在
: 另外,可以coincubate with IAA or IAM,do IEF,you should get more information
: 2) 一般来说band should go upshift, 但你看到了downshift,所以不敢肯定
: 这种情况时有发生

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a*1
16
actin 是从Cytoskeleton买的

【在 S*********s 的大作中提到】
: make sure you are using recombinant protein not cell lysate.
: Otherwise it is too complicate

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a*1
17
in vivo 的actin s-glutathionylation 不是早被证实了的么,以前也用cell lysate
做过了

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【在 S*********s 的大作中提到】
: 既然你做这么specific的实验,想必你在做protein S-glutathiolation的研究
: 可能的解释就是
: GSH+GSH(+H2O2)->GSSG
: Actin+GSSG->Actin-SSH
: 但有两个问题
: 1)你跑了Western,正常情况应该加了DTT,不应该看到modified actin
: 加DTT多煮煮,看看是否还在
: 另外,可以coincubate with IAA or IAM,do IEF,you should get more information
: 2) 一般来说band should go upshift, 但你看到了downshift,所以不敢肯定
: 这种情况时有发生

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S*s
18
还有sunnyday说的这种可能性。
可以直接用买GSSG,sigma就有,in vitro incubate,可以exclue or confirm this
possibility.
另外,你的western band强度不一样啊,in vitro做assay,应当非常一致才对。

【在 s******y 的大作中提到】
: Summerwinds说的有道理,但是鉴于那个band size 变小,我再补充一个可能性,
: 就是actin oxidized。这种情况下是可能会跑得更快的(因为构型变了)
:
: information

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a*1
19


【在 S*********s 的大作中提到】
: 还有sunnyday说的这种可能性。
: 可以直接用买GSSG,sigma就有,in vitro incubate,可以exclue or confirm this
: possibility.
: 另外,你的western band强度不一样啊,in vitro做assay,应当非常一致才对。

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