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Ask help: 实验方案验证CreERT2的功能

Ask help: 实验方案验证CreERT2的功能# Biology - 生物学

T*m2012-11-06 08:11

1 楼

今年5区的春天来得迟，所以我在4月20日才育黄瓜苗。到了5月20日，春季蔬菜收获之
后，我在地里混进了一些鸡粪作基肥，然后将黄瓜苗移到地里。移苗之后，在黄瓜苗的
周围盖了一些草屑，以防止被雨水溅起的泥土弄脏了叶子，将叶子表面的气孔堵起来，
影响光合作用。
过了4-5天，黄瓜苗在地里应该已经生根了，接下来就用很稀释的Miracle-Gro溶液浇了
两次苗。在我6月初回国之前，在土面又盖了一层草屑，再在上面稀稀拉拉地撒了一些
12-12-12复合肥。
这星期下了两场雷雨，只见那黄瓜发疯似地长叶，发疯似的结瓜！
哎，5区什么都好，就是黄瓜长得太疯了，这一点真的很不好！

C*22012-11-06 08:11

2 楼

Hey, i have aseveral questions to ask for help.
I want to knockin CreERT2 to specific locus, southern blotting suggested
that the ES clones are targeted correctly. But i am not sure if the CreERT2
is functional or not, therefore, i want to detect the function in vitro ES
based assay. My designed experiments is:
1) Electro-transfection of loxp-CMV Driven GFP-loxp plasmid to ES, the
transfected ES cells are split to 2 dish, one dish is treated with 4-OH,
another dish is conrol.
2) Prepare lentivirus based loxp-CMV Driven GFP-loxp construction,then
infect ES, sort out gfp cells, then treated with or without 4-OHT, count GFP
cells number.
Someone in lab told me that 4-OHT induce CreERT2 to translocate to nucleus.
then, my first design is wrong.Because electro-transfection doesn't transfer
plasmid to nucleus, then, it doesn't work, nonsense. I try to find detail
mechanism of 4-OHT, BUT i can't reliable source.
Also, CMV promoter is nearly silenced in ES cell in theroy. But i can sort
out GFP expressing cells,then eliminate lif to activate/strengthen CMV
promoter, Is it right?
Thanks!

a*o2012-11-06 08:11

3 楼

我的妈呀，为了给你消灾，看来需要给我们邮寄些了，我出我的label。
：））））））

m*52012-11-06 08:11

4 楼

1, It really depends on whether your inserted location should be activated
in undifferentiated mES cells. If not, you have to either make embryoid body
differentiation or take a leap of faith waiting for your mice.
2, CMV promoter does activate in undifferentiated mES cells, it is only
inactivated after several rounds of proliferation and differentiation.
However, CAGGS promoter is much safer, you could easily find one on Addgene
3,!!!! And, whatever kind of transfection methods you use, whenever you have
transient expression, the plasmids ARE introduced into nuclear. Only within
nuclear cells have transcription machinery. So your design wasn't wrong in
the firstplace.

CreERT2
GFP

【在 C***2 的大作中提到】

: Hey, i have aseveral questions to ask for help.
: I want to knockin CreERT2 to specific locus, southern blotting suggested
: that the ES clones are targeted correctly. But i am not sure if the CreERT2
: is functional or not, therefore, i want to detect the function in vitro ES
: based assay. My designed experiments is:
: 1) Electro-transfection of loxp-CMV Driven GFP-loxp plasmid to ES, the
: transfected ES cells are split to 2 dish, one dish is treated with 4-OH,
: another dish is conrol.
: 2) Prepare lentivirus based loxp-CMV Driven GFP-loxp construction,then
: infect ES, sort out gfp cells, then treated with or without 4-OHT, count GFP

Q*62012-11-06 08:11

5 楼

都是老黄瓜啦。

C*22012-11-06 08:11

6 楼

Thank you for your reply.
The locus i knockin Cre is expressed in ES with low level. PI want to make
sure whether the inserted Cre work functionally or not before blastocyst
injection.
I recalled that i ever electrotransfer pEGFPN3 to ES, indeed i observed
sporadic GFP. So, i decide to use CMV-Loxp-gfp-Loxp to confirm the
construction.
I feel shame on the third point, how can i make this type of mistakes.

body
Addgene
have
within
in

【在 m******5 的大作中提到】

: 1, It really depends on whether your inserted location should be activated
: in undifferentiated mES cells. If not, you have to either make embryoid body
: differentiation or take a leap of faith waiting for your mice.
: 2, CMV promoter does activate in undifferentiated mES cells, it is only
: inactivated after several rounds of proliferation and differentiation.
: However, CAGGS promoter is much safer, you could easily find one on Addgene
: 3,!!!! And, whatever kind of transfection methods you use, whenever you have
: transient expression, the plasmids ARE introduced into nuclear. Only within
: nuclear cells have transcription machinery. So your design wasn't wrong in
: the firstplace.

p*y2012-11-06 08:11

7 楼

亲你那竹竿哪里来的。太疯狂了

m*52012-11-06 08:11

8 楼

Glad it helps,you are very welcome!

【在 C***2 的大作中提到】

: Thank you for your reply.
: The locus i knockin Cre is expressed in ES with low level. PI want to make
: sure whether the inserted Cre work functionally or not before blastocyst
: injection.
: I recalled that i ever electrotransfer pEGFPN3 to ES, indeed i observed
: sporadic GFP. So, i decide to use CMV-Loxp-gfp-Loxp to confirm the
: construction.
: I feel shame on the third point, how can i make this type of mistakes.
:
: body

l*z2012-11-06 08:11

9 楼

啊呀，真不少啊！
我家老太太最喜欢买你这样的黄瓜了。　为啥？因为又老又弯，卖的便宜，北京农贸市
场都论堆卖，一块钱一堆！！！

【在 T*******m 的大作中提到】

: 今年5区的春天来得迟，所以我在4月20日才育黄瓜苗。到了5月20日，春季蔬菜收获之
: 后，我在地里混进了一些鸡粪作基肥，然后将黄瓜苗移到地里。移苗之后，在黄瓜苗的
: 周围盖了一些草屑，以防止被雨水溅起的泥土弄脏了叶子，将叶子表面的气孔堵起来，
: 影响光合作用。
: 过了4-5天，黄瓜苗在地里应该已经生根了，接下来就用很稀释的Miracle-Gro溶液浇了
: 两次苗。在我6月初回国之前，在土面又盖了一层草屑，再在上面稀稀拉拉地撒了一些
: 12-12-12复合肥。
: 这星期下了两场雷雨，只见那黄瓜发疯似地长叶，发疯似的结瓜！
: 哎，5区什么都好，就是黄瓜长得太疯了，这一点真的很不好！

T*m2012-11-06 08:11

10 楼

哈哈，我把黄瓜晒成干，再寄给你。

【在 a*******o 的大作中提到】

: 我的妈呀，为了给你消灾，看来需要给我们邮寄些了，我出我的label。
: ：））））））

T*m2012-11-06 08:11

11 楼

那是很嫩的东北旱黄瓜，版上很多人看见会淌口水的。

【在 Q**6 的大作中提到】

: 都是老黄瓜啦。

T*m2012-11-06 08:11

12 楼

竹竿是从Lowes买的。

【在 p*****y 的大作中提到】

: 亲你那竹竿哪里来的。太疯狂了

T*m2012-11-06 08:11

13 楼

弯的黄瓜味道很好的！你这么说，是嫉妒了吧？

市场都论堆卖，一块钱一堆！！！

【在 l****z 的大作中提到】

: 啊呀，真不少啊！
: 我家老太太最喜欢买你这样的黄瓜了。　为啥？因为又老又弯，卖的便宜，北京农贸市
: 场都论堆卖，一块钱一堆！！！

l*z2012-11-06 08:11

14 楼

季度你弯黄瓜？
好心劝你在小四回来之前删贴，不然会被她笑话一辈子的。
给你看看盆栽的标志旱黄瓜

【在 T*******m 的大作中提到】

: 弯的黄瓜味道很好的！你这么说，是嫉妒了吧？
:
: 市场都论堆卖，一块钱一堆！！！

T*m2012-11-06 08:11

15 楼

小四敢笑我？
你得旱黄瓜很直！第二张照片非常漂亮，用你脚架了吗？

【在 l****z 的大作中提到】

: 季度你弯黄瓜？
: 好心劝你在小四回来之前删贴，不然会被她笑话一辈子的。
: 给你看看盆栽的标志旱黄瓜

l*z2012-11-06 08:11

16 楼

小四怕的人还没出世那！
水足了黄瓜自然是直的。　谢谢夸奖，没时间上脚架，大家都等着吃拿。

【在 T*******m 的大作中提到】

: 小四敢笑我？
: 你得旱黄瓜很直！第二张照片非常漂亮，用你脚架了吗？

T*m2012-11-06 08:11

17 楼

我老四都不怕，还怕小四？小四现在在网上的话，我劈头盖脸地骂她一通！

【在 l****z 的大作中提到】

: 小四怕的人还没出世那！
: 水足了黄瓜自然是直的。　谢谢夸奖，没时间上脚架，大家都等着吃拿。

l*z2012-11-06 08:11

18 楼

聪明啊，前提为假，命题永远为真，呵呵

【在 T*******m 的大作中提到】

: 我老四都不怕，还怕小四？小四现在在网上的话，我劈头盖脸地骂她一通！

m*62012-11-06 08:11

19 楼

游老师在寓教于乐啊，原来高产的黄瓜是这样出来的。
还好今年没有种，附近的农民种太多来不及吃，也送了我一些。
明天要不再厚脸皮去要一些，呵呵。。

w*r2012-11-06 08:11

20 楼

你邮寄给我，我帮你解决

y*82012-11-06 08:11

21 楼

看标题两个告急，三个惊叹号，还以为5区的黄瓜会盖满整个乾隆年制的桌子了。
原来不过就是1小筐弯弯的老黄瓜而已，只能炖排骨汤了，两顿就可以消费掉。

今年5区的春天来得迟，所以我在4月20日才育黄瓜苗。到了5月20日，春季蔬菜收获之
后，我在地里混进了一些鸡粪作基肥，然后将黄瓜苗移到地里。移苗之后，在黄瓜苗的

【在 T*******m 的大作中提到】

t*g2012-11-06 08:11

22 楼

万能的鸡粪！明年春天我也买点吧，就是太贵了。

y*82012-11-06 08:11

23 楼

啧啧，这个才是旱黄瓜春秋绿宝的标准像哪。
种旱黄瓜的，都要以豆豆妈家的这个标志为追求。

季度你弯黄瓜？
好心劝你在小四回来之前删贴，不然会被她笑话一辈子的。

【在 l****z 的大作中提到】

: 季度你弯黄瓜？
: 好心劝你在小四回来之前删贴，不然会被她笑话一辈子的。
: 给你看看盆栽的标志旱黄瓜

m*h2012-11-06 08:11

24 楼

5区的黄瓜现在能长成这样真不错。我周围认识的农民们都没有吃上黄瓜呢，我的算比
较好的，可黄瓜们都还是小崽子，要等几天才能吃到

l*12012-11-06 08:11

25 楼

羡慕版主家黄瓜多的吃不完！看看这里查到的产生异形瓜的原因：
在果实发育期间，遇到不良的环境条件，往往产牛尖嘴、大肚、蜂腰等畸形瓜。其
原因如下。
弯曲瓜：弯曲瓜形状如月牙。这是在育苗过程中，特别是花芽分化到开花这一阶段
，温度，水分和营养不足，而形成弯曲的小子房，长大后就发育成弯曲瓜。在黄瓜果实
肥大期，肥料供应不足、土壤干旱，也容易产生弯曲瓜。所以在育苗期要为花芽分化创
造良好条件。在果实肥大期要加强管理，不缺肥，缺水，就能防止弯曲瓜的产生。
大肚瓜：由于黄瓜受精不完全，只是中部到尖端受精。受精的部分肥大的快，未受
精部分生长缓慢而形成大肚瓜。后期放松田问管理，使植株生长衰弱．也容易形成大肚
瓜。土壤中缺钾、也是形成大肚瓜的原冈。因此，对于单性结实差需要授粉的黄瓜品种
，要防止受精不完全，可采用人工授粉和棚内养蜂等方法。在结瓜盛期到后期，应加强
水、肥管理，并结合钾肥根外追肥，就可以防止产生大肚瓜。
尖嘴瓜：是由于受精不良产生的。大棚内连续高温，土壤干旱缺水、是产生尖嘴瓜
的重要原因。肥水管理不善，植株生长衰弱也容易产生尖嘴瓜。所以，保护地栽培如果
超过30汇，就应立即通风，防止温度过高。进入结瓜期后，要始终保
持土壤湿润，并加强肥水管理，只要植株生长健壮，尖嘴瓜是可以防止的。
蜂腰瓜：是因大棚长期高温干燥，植株生长势弱，土壤缺钾产生。只要注意加强水
，肥管理就可以防止出现蜂腰瓜。
瘦肩瓜：瘦肩瓜是黄瓜果实梗短，肩部瘦长的瓜。这是由于夜间温度长时间过低、
或营养过剩而产生的。只要把大棚内温度保持l0℃以上，并加强水肥管理，很快就恢复
正常。
苦味瓜：苦味瓜是由果实中产生一种苦瓜素的物质而形成的。一般在果梗和果肩的
部位容易出现苦味。苦味是品种的遗传性决定的，但也受栽培条件的影响。如氮素过多
，水分不足、低温、光照不足，缺乏肥料和后期植株衰竭等，都会导致生理代谢失调而
产生这种物质，致使黄瓜出现苦味。大棚春季栽培时常因地温低或气温过高，使植株体
内水分失调而出现苦味。

L*A2012-11-06 08:11

26 楼

我是根弯黄瓜
－小游
我是根弯黄瓜，别把我看不起，
小游阿姨从早到晚，冒着风雨。
忙呀忙呀忙呀忙呀，费了多少力，
我来得不容易呀诶不呀诶，
不容易。
有一个名ID把我看不起，
天天摘起菜来又挑又捡。
把呀我呀扔在地上，
又把我喂鸡。
他不爱惜我呀呵我呀呵
真生气。
你要是好乖乖要把我爱惜，
天天摘起菜来不挑也不捡。
不丢一根瓜不把我扔在地，
小游阿姨喜呀哈哈喜呀哈哈，
喜欢你。
我是根弯黄瓜，别把我看不起。
小游阿姨从早到晚冒着风雨。
忙呀忙呀忙呀忙呀，
费了多少力
我来得不容易呀诶不呀诶，
不容易。

p*y2012-11-06 08:11

27 楼

我也知道哦

【在 l****z 的大作中提到】

: 啊呀，真不少啊！
: 我家老太太最喜欢买你这样的黄瓜了。　为啥？因为又老又弯，卖的便宜，北京农贸市
: 场都论堆卖，一块钱一堆！！！

p*y2012-11-06 08:11

28 楼

3.99一根？你大致100根以上妈呀光竹竿就400多块有钱人

【在 T*******m 的大作中提到】

: 竹竿是从Lowes买的。

L*A2012-11-06 08:11

29 楼

真标致。

【在 l****z 的大作中提到】

: 季度你弯黄瓜？
: 好心劝你在小四回来之前删贴，不然会被她笑话一辈子的。
: 给你看看盆栽的标志旱黄瓜

D*12012-11-06 08:11

30 楼

BSO地大，初步估计种了至少30根黄瓜，风调雨顺的年份，可以供一个班的同学天天吃
到吐
不知道黄瓜吃多了会变成啥

【在 T*******m 的大作中提到】

D*12012-11-06 08:11

31 楼

一块钱一堆，那时现在，以前更便宜
记得在国内时有一次打麻将输得精光，兜里只剩3毛钱，就是买了一大堆老黄瓜啃了两天

【在 l****z 的大作中提到】

: 啊呀，真不少啊！
: 我家老太太最喜欢买你这样的黄瓜了。　为啥？因为又老又弯，卖的便宜，北京农贸市
: 场都论堆卖，一块钱一堆！！！

D*12012-11-06 08:11

32 楼

建议游斑竹好好读一下游子转贴的文章。。。LOL

【在 l*****1 的大作中提到】

: 羡慕版主家黄瓜多的吃不完！看看这里查到的产生异形瓜的原因：
: 在果实发育期间，遇到不良的环境条件，往往产牛尖嘴、大肚、蜂腰等畸形瓜。其
: 原因如下。
: 弯曲瓜：弯曲瓜形状如月牙。这是在育苗过程中，特别是花芽分化到开花这一阶段
: ，温度，水分和营养不足，而形成弯曲的小子房，长大后就发育成弯曲瓜。在黄瓜果实
: 肥大期，肥料供应不足、土壤干旱，也容易产生弯曲瓜。所以在育苗期要为花芽分化创
: 造良好条件。在果实肥大期要加强管理，不缺肥，缺水，就能防止弯曲瓜的产生。
: 大肚瓜：由于黄瓜受精不完全，只是中部到尖端受精。受精的部分肥大的快，未受
: 精部分生长缓慢而形成大肚瓜。后期放松田问管理，使植株生长衰弱．也容易形成大肚
: 瓜。土壤中缺钾、也是形成大肚瓜的原冈。因此，对于单性结实差需要授粉的黄瓜品种

D*12012-11-06 08:11

33 楼

这才像是黄瓜嘛
BTW，那个桌子是哪个朝代的古董，看起来很有些年纪？

【在 l****z 的大作中提到】

: 季度你弯黄瓜？
: 好心劝你在小四回来之前删贴，不然会被她笑话一辈子的。
: 给你看看盆栽的标志旱黄瓜

D*12012-11-06 08:11

34 楼

替小四记到本子上

【在 T*******m 的大作中提到】

: 我老四都不怕，还怕小四？小四现在在网上的话，我劈头盖脸地骂她一通！

D*12012-11-06 08:11

35 楼

小裴也先知先觉，我没说看不起弯黄瓜吧？弯黄瓜也是黄瓜，顶多不拿出来BSO就是了
LOL

【在 L****A 的大作中提到】

: 我是根弯黄瓜
: －小游
: 我是根弯黄瓜，别把我看不起，
: 小游阿姨从早到晚，冒着风雨。
: 忙呀忙呀忙呀忙呀，费了多少力，
: 我来得不容易呀诶不呀诶，
: 不容易。
: 有一个名ID把我看不起，
: 天天摘起菜来又挑又捡。
: 把呀我呀扔在地上，

c*p2012-11-06 08:11

36 楼

lol
豆妈你们那里也太栽人了，这样的我们那里都死乞白赖的白送

【在 l****z 的大作中提到】

: 啊呀，真不少啊！
: 我家老太太最喜欢买你这样的黄瓜了。　为啥？因为又老又弯，卖的便宜，北京农贸市
: 场都论堆卖，一块钱一堆！！！

D*12012-11-06 08:11

37 楼

还是杯子Ｖ５！

【在 c***p 的大作中提到】

: lol
: 豆妈你们那里也太栽人了，这样的我们那里都死乞白赖的白送

l*z2012-11-06 08:11

38 楼

真的呀？　那我妈可就乐死了。　老人家和游大一个论点：“长的不好看怎么了，吃起
来是一样的”　ｌｏｌ

【在 c***p 的大作中提到】

: lol
: 豆妈你们那里也太栽人了，这样的我们那里都死乞白赖的白送

l*z2012-11-06 08:11

39 楼

ＢＳＯ您年纪大？

两天

【在 D*******1 的大作中提到】

: 一块钱一堆，那时现在，以前更便宜
: 记得在国内时有一次打麻将输得精光，兜里只剩3毛钱，就是买了一大堆老黄瓜啃了两天

l*z2012-11-06 08:11

40 楼

好像是乾隆年代的吧
我还是把照片撤了吧，这一比较，　版大要恨死我了

【在 D*******1 的大作中提到】

: 这才像是黄瓜嘛
: BTW，那个桌子是哪个朝代的古董，看起来很有些年纪？

g*52012-11-06 08:11

41 楼

老天, 种那么多!
你不会不知道弯黄瓜吃多了就像吃多了空心菜一样吧?
杨桃乾的一样有效吗?
LOL.

c*x2012-11-06 08:11

42 楼

黄瓜弯了我以为是它的位置决定，有东西挡着就长弯了，悬挂的就直的。
鸡粪在店里很便宜啊，2块多一袋。

n*y2012-11-06 08:11

43 楼

哇噻这黄瓜太诱人了！卖不？

C*g2012-11-06 08:11

44 楼

黄瓜虽然好吃，但不能多吃。
吃多了之后，会“瓜瓜”的叫。
这就是为什么在黄瓜上市季节，总能听到田野里“瓜瓜”声不绝于耳。
前车之鉴啊游士！

【在 T*******m 的大作中提到】

b*12012-11-06 08:11

45 楼

黄瓜马上爬到顶了，怎办？

m*32012-11-06 08:11

46 楼

流口水了,我种了6颗这样的黄瓜,就一颗比较壮,其它叶子都有点黄.而且它们都是开花,
还没吃上一条.

f*s2012-11-06 08:11

47 楼

区长为了拍照显示一次性收获多，大概没有每天摘一些，结果好多黄瓜成半老不老了，
可惜

【在 T*******m 的大作中提到】

T*m2012-11-06 08:11

48 楼

小四在潜水的，看到我要骂她，就不敢出来了。

【在 l****z 的大作中提到】

: 聪明啊，前提为假，命题永远为真，呵呵

T*m2012-11-06 08:11

49 楼

你连黄瓜都没种？可惜了！老师批评一下。

【在 m**6 的大作中提到】

: 游老师在寓教于乐啊，原来高产的黄瓜是这样出来的。
: 还好今年没有种，附近的农民种太多来不及吃，也送了我一些。
: 明天要不再厚脸皮去要一些，呵呵。。

T*m2012-11-06 08:11

50 楼

两顿就可以消费掉？胃口这么大？像那个。。。？

【在 y*****8 的大作中提到】

: 看标题两个告急，三个惊叹号，还以为5区的黄瓜会盖满整个乾隆年制的桌子了。
: 原来不过就是1小筐弯弯的老黄瓜而已，只能炖排骨汤了，两顿就可以消费掉。
:
: 今年5区的春天来得迟，所以我在4月20日才育黄瓜苗。到了5月20日，春季蔬菜收获之
: 后，我在地里混进了一些鸡粪作基肥，然后将黄瓜苗移到地里。移苗之后，在黄瓜苗的

T*m2012-11-06 08:11

51 楼

鸡粪不贵吧？我们这里$8可买25磅。

【在 t**********g 的大作中提到】

: 万能的鸡粪！明年春天我也买点吧，就是太贵了。

T*m2012-11-06 08:11

52 楼

有小崽子了得的话，这个星期就能吃到了。

比较好的，可黄瓜们都还是小崽子，要等几天才能吃到

【在 m***h 的大作中提到】

: 5区的黄瓜现在能长成这样真不错。我周围认识的农民们都没有吃上黄瓜呢，我的算比
: 较好的，可黄瓜们都还是小崽子，要等几天才能吃到

T*m2012-11-06 08:11

53 楼

哇，长篇科普！请你整理一下，单独发表，可以吗？

【在 l*****1 的大作中提到】

T*m2012-11-06 08:11

54 楼

哪要3.99一根？你去的是富人区的Lowes吧？

【在 p*****y 的大作中提到】

: 3.99一根？你大致100根以上妈呀光竹竿就400多块有钱人

T*m2012-11-06 08:11

55 楼

没有20棵，大概20棵吧。
黄瓜吃多了人有劲，可来这里PK！

吃到吐

【在 D*******1 的大作中提到】

: BSO地大，初步估计种了至少30根黄瓜，风调雨顺的年份，可以供一个班的同学天天吃
: 到吐
: 不知道黄瓜吃多了会变成啥

T*m2012-11-06 08:11

56 楼

那麻烦你再记一次。小四现在在网上的话，我劈头盖脸地骂她三通！

【在 D*******1 的大作中提到】

: 替小四记到本子上

T*m2012-11-06 08:11

57 楼

哈哈哈！

【在 c***p 的大作中提到】

: lol
: 豆妈你们那里也太栽人了，这样的我们那里都死乞白赖的白送

T*m2012-11-06 08:11

58 楼

那不是和我的桌子一个年代？

【在 l****z 的大作中提到】

: 好像是乾隆年代的吧
: 我还是把照片撤了吧，这一比较，　版大要恨死我了

T*m2012-11-06 08:11

59 楼

黄瓜吃多了不怕，我有杨梅干留着呢！

【在 g******5 的大作中提到】

: 老天, 种那么多!
: 你不会不知道弯黄瓜吃多了就像吃多了空心菜一样吧?
: 杨桃乾的一样有效吗?
: LOL.

T*m2012-11-06 08:11

60 楼

你讲的太好了！喜欢听！这条线上其他人都是在吃醋！

【在 c******x 的大作中提到】

: 黄瓜弯了我以为是它的位置决定，有东西挡着就长弯了，悬挂的就直的。
: 鸡粪在店里很便宜啊，2块多一袋。

T*m2012-11-06 08:11

61 楼

谢谢！送一些黄瓜给朋友，从没卖过。

【在 n***y 的大作中提到】

: 哇噻这黄瓜太诱人了！卖不？

T*m2012-11-06 08:11

62 楼

黄瓜吃多了之后，会“瓜瓜”的叫，那是你当版主的时代。现在已经不一样了，呵呵。

【在 C*********g 的大作中提到】

: 黄瓜虽然好吃，但不能多吃。
: 吃多了之后，会“瓜瓜”的叫。
: 这就是为什么在黄瓜上市季节，总能听到田野里“瓜瓜”声不绝于耳。
: 前车之鉴啊游士！

T*m2012-11-06 08:11

63 楼

它自己会下来的。

【在 b*****1 的大作中提到】

: 黄瓜马上爬到顶了，怎办？

T*m2012-11-06 08:11

64 楼

估计是肥料不足。

花,还没吃上一条.

【在 m*****3 的大作中提到】

: 流口水了,我种了6颗这样的黄瓜,就一颗比较壮,其它叶子都有点黄.而且它们都是开花,
: 还没吃上一条.

T*m2012-11-06 08:11

65 楼

瞧你的眼神！那是东北旱黄瓜！

，可惜

【在 f******s 的大作中提到】

: 区长为了拍照显示一次性收获多，大概没有每天摘一些，结果好多黄瓜成半老不老了，
: 可惜

j*p2012-11-06 08:11

66 楼

这黄瓜占地面积太大了，我开始怀疑我的地是不是不够大了。
wuwu

l*z2012-11-06 08:11

67 楼

啥意思？一头雾水，完全听不懂。。。

【在 T*******m 的大作中提到】

: 没有20棵，大概20棵吧。
: 黄瓜吃多了人有劲，可来这里PK！
:
: 吃到吐

l*z2012-11-06 08:11

68 楼

错了错了，是康熙年的

【在 T*******m 的大作中提到】

: 那不是和我的桌子一个年代？

s*02012-11-06 08:11

69 楼

求吃黄瓜

y*82012-11-06 08:11

70 楼

像那个。。。什么？吞吞吐吐的。
黄瓜做汤不经烧啊，三根只能做出一碗而已。

两顿就可以消费掉？胃口这么大？像那个。。。？

【在 T*******m 的大作中提到】

: 两顿就可以消费掉？胃口这么大？像那个。。。？

T*m2012-11-06 08:11

71 楼

黄瓜要搭架子，所以占地不是太多。

【在 j******p 的大作中提到】

: 这黄瓜占地面积太大了，我开始怀疑我的地是不是不够大了。
: wuwu

T*m2012-11-06 08:11

72 楼

笔误，应该是“没有30棵，大概20棵吧。”

【在 l****z 的大作中提到】

: 啥意思？一头雾水，完全听不懂。。。

T*m2012-11-06 08:11

73 楼

不对吧？我看是21世纪的吧？

【在 l****z 的大作中提到】

: 错了错了，是康熙年的

T*m2012-11-06 08:11

74 楼

这些黄瓜都给你了！

【在 s**********0 的大作中提到】

: 求吃黄瓜

T*m2012-11-06 08:11

75 楼

赞德州人的胃口！哈哈。

【在 y*****8 的大作中提到】

: 像那个。。。什么？吞吞吐吐的。
: 黄瓜做汤不经烧啊，三根只能做出一碗而已。
:
: 两顿就可以消费掉？胃口这么大？像那个。。。？

y*82012-11-06 08:11

76 楼

我也想吃。

【在 T*******m 的大作中提到】

: 这些黄瓜都给你了！

y*82012-11-06 08:11

77 楼

什么德州人，是正宗的中国人，写中国字，说中国话，吃中国饭的。

赞德州人的胃口！哈哈。

【在 T*******m 的大作中提到】

: 赞德州人的胃口！哈哈。

N*D2012-11-06 08:11

78 楼

静静义正辞严地批驳了数典忘祖的言行！表扬！

【在 y*****8 的大作中提到】

: 什么德州人，是正宗的中国人，写中国字，说中国话，吃中国饭的。
:
: 赞德州人的胃口！哈哈。