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大家做gene　targeting阳性率多少啊？

大家做gene　targeting阳性率多少啊？# Biology - 生物学

s*a2012-11-08 08:11

1 楼

我用PCR阳性率有２５％，估计最后southern大多是假阳性吧。
PS：我的上游引物在homologous　arm外，下游引物在insert。
大家最后southern阳性率多少呢？我看有筛５００个才１个的。像我就挑了２００多是
不是很可能１个都没有呢。

y*j2012-11-08 08:11

2 楼

有可能。

s*a2012-11-08 08:11

3 楼

看来只能烧高香了

【在 y***j 的大作中提到】

: 有可能。

H*N2012-11-08 08:11

4 楼

Depending on the gene, it can be as high as 50%, or as low as <1%.

d*d2012-11-08 08:11

5 楼

我上一次knockin 做PCR筛选，居然用错了引物（本来应该用external pair的，实际用
了internal pair),到第二轮筛选的时候才意识到第一轮筛选的错误。当时以为这下完
了，要被老板骂死了。幸运的是就这样筛选出来的“假阳性”居然到后来发现都是“真
阳性”，可见这次targeting的整合率要接近100%。我想整合率高低很大程度上取决于
targeting construct的好坏吧。

【在 s******a 的大作中提到】

: 我用PCR阳性率有２５％，估计最后southern大多是假阳性吧。
: PS：我的上游引物在homologous　arm外，下游引物在insert。
: 大家最后southern阳性率多少呢？我看有筛５００个才１个的。像我就挑了２００多是
: 不是很可能１个都没有呢。

s*a2012-11-08 08:11

6 楼

运气真好

【在 d****d 的大作中提到】

: 我上一次knockin 做PCR筛选，居然用错了引物（本来应该用external pair的，实际用
: 了internal pair),到第二轮筛选的时候才意识到第一轮筛选的错误。当时以为这下完
: 了，要被老板骂死了。幸运的是就这样筛选出来的“假阳性”居然到后来发现都是“真
: 阳性”，可见这次targeting的整合率要接近100%。我想整合率高低很大程度上取决于
: targeting construct的好坏吧。