d*r
2 楼
【此篇文章是由自动发信系统所张贴】
⊙ 博彩开启于：Sun Jul 11 17:23:47 2010 类别：多选
⊙ 主题：世界杯决赛对赌：荷兰vs西班牙
⊙ 博彩题目描述：
7／11 决赛：荷兰vs西班牙。
谁能夺取世界杯！！
【打对勾者正确选项】
√(1) 西班牙胜
(2) 荷兰胜
⊙ 博彩开启于：Sun Jul 11 17:23:47 2010 类别：多选
⊙ 主题：世界杯决赛对赌：荷兰vs西班牙
⊙ 博彩题目描述：
7／11 决赛：荷兰vs西班牙。
谁能夺取世界杯！！
【打对勾者正确选项】
√(1) 西班牙胜
(2) 荷兰胜
a*n
3 楼
已经有confirmation.
菜鸟求跟着大牛混。
菜鸟求跟着大牛混。
t*l
4 楼
做genetic screen找到一个transcription factor. 怎么证明这个TF是dimer
B*g
5 楼
你是大牛，我以后跟你混win8
【在 a******n 的大作中提到】
: 已经有confirmation.
: 菜鸟求跟着大牛混。
【在 a******n 的大作中提到】
: 已经有confirmation.
: 菜鸟求跟着大牛混。
C*e
6 楼
表达纯化然后gel filtration
m*d
7 楼
免费发win8吗，how to get invitation?
【在 a******n 的大作中提到】
: 已经有confirmation.
: 菜鸟求跟着大牛混。
【在 a******n 的大作中提到】
: 已经有confirmation.
: 菜鸟求跟着大牛混。
f*f
8 楼
方法很多：
一种是稳定的dimer，比如二硫键形成的dimer，SDS lysis buffer 也不能破坏，
Western blot会有两条带，刚好两倍差别。一定要确定的话可以IP后可以mass-spec
二假如SDS lysis buffer 会破坏，可以先IP后，sucrose gradient或是分子量层析，
至少有2个component
三，假如蛋白能纯化出来的，就更容易了。直接GST-protein过分子筛。
四，IP或pull down用外源蛋白可以沉淀下endogenous protein，说明可以形成dimer或
polymer
五，X-ray and structural determination确定dimer结构
【在 t**l 的大作中提到】
: 做genetic screen找到一个transcription factor. 怎么证明这个TF是dimer
一种是稳定的dimer，比如二硫键形成的dimer，SDS lysis buffer 也不能破坏，
Western blot会有两条带，刚好两倍差别。一定要确定的话可以IP后可以mass-spec
二假如SDS lysis buffer 会破坏，可以先IP后，sucrose gradient或是分子量层析，
至少有2个component
三，假如蛋白能纯化出来的，就更容易了。直接GST-protein过分子筛。
四，IP或pull down用外源蛋白可以沉淀下endogenous protein，说明可以形成dimer或
polymer
五，X-ray and structural determination确定dimer结构
【在 t**l 的大作中提到】
: 做genetic screen找到一个transcription factor. 怎么证明这个TF是dimer
a*n
9 楼
不知道发啥呀。
湾区的已经漫了
其他地方的google microsfot msdn event
【在 m*d 的大作中提到】
: 免费发win8吗，how to get invitation?
湾区的已经漫了
其他地方的google microsfot msdn event
【在 m*d 的大作中提到】
: 免费发win8吗，how to get invitation?
C*e
10 楼
为什么一定是“GST-protein过分子筛”？
B*e
11 楼
免费发beta 版
【在 m*d 的大作中提到】
: 免费发win8吗，how to get invitation?
【在 m*d 的大作中提到】
: 免费发win8吗，how to get invitation?
T*i
12 楼
理论上来说，做两个constructs，分别用两个不同的tag，＋／－ DNase，然后IP/
western。这能证明是dimer 或更大。如果需要证明不是trimer, tetramer，。。。就
是dimer，需要分子筛。
【在 t**l 的大作中提到】
: 做genetic screen找到一个transcription factor. 怎么证明这个TF是dimer
western。这能证明是dimer 或更大。如果需要证明不是trimer, tetramer，。。。就
是dimer，需要分子筛。
【在 t**l 的大作中提到】
: 做genetic screen找到一个transcription factor. 怎么证明这个TF是dimer
a*n
13 楼
以后可以转成正式版吗
【在 B*******e 的大作中提到】
: 免费发beta 版
【在 B*******e 的大作中提到】
: 免费发beta 版
f*f
14 楼
不用，只是gst为例，只要能纯化出来就行。
【在 C*******e 的大作中提到】
: 为什么一定是“GST-protein过分子筛”？
【在 C*******e 的大作中提到】
: 为什么一定是“GST-protein过分子筛”？
w*u
15 楼
结果会上一看，都是等着领免费电话的老头老太。一说windows,脸上一片迷惘，微软组
织者以头撞墙。
织者以头撞墙。
K*a
16 楼
GST自己不是会形成dimer吗？
【在 f*****f 的大作中提到】
: 不用，只是gst为例，只要能纯化出来就行。
【在 f*****f 的大作中提到】
: 不用，只是gst为例，只要能纯化出来就行。
a*n
17 楼
哈哈， 那我会写hello world岂不是成了其中牛人？
给我发个嘉奖？
【在 w***u 的大作中提到】
: 结果会上一看，都是等着领免费电话的老头老太。一说windows,脸上一片迷惘，微软组
: 织者以头撞墙。
给我发个嘉奖？
【在 w***u 的大作中提到】
: 结果会上一看，都是等着领免费电话的老头老太。一说windows,脸上一片迷惘，微软组
: 织者以头撞墙。
a*e
18 楼
你说得对
gst 可以induce target protein to form dimer
所以gst tag 不是一个非常好的手段
【在 K****a 的大作中提到】
: GST自己不是会形成dimer吗？
gst 可以induce target protein to form dimer
所以gst tag 不是一个非常好的手段
【在 K****a 的大作中提到】
: GST自己不是会形成dimer吗？
a*n
19 楼
现场老中也不少啊
看来都不上mitbbs.
看来都不上mitbbs.
t*l
20 楼
请问一下gel filtration 能给出什么定量的结果吗？ 能具体的说明哪块elute是多少
kd.
kd.
B*g
21 楼
午饭给的啥？
【在 a******n 的大作中提到】
: 现场老中也不少啊
: 看来都不上mitbbs.
【在 a******n 的大作中提到】
: 现场老中也不少啊
: 看来都不上mitbbs.
s*y
22 楼
有gel filtration的marker卖的
【在 t**l 的大作中提到】
: 请问一下gel filtration 能给出什么定量的结果吗？ 能具体的说明哪块elute是多少
: kd.
【在 t**l 的大作中提到】
: 请问一下gel filtration 能给出什么定量的结果吗？ 能具体的说明哪块elute是多少
: kd.
a*n
23 楼
早饭咖啡茶点心水果
snacks咖啡茶点心水果
午饭sanwich。 chips.
【在 B*****g 的大作中提到】
: 午饭给的啥？
snacks咖啡茶点心水果
午饭sanwich。 chips.
【在 B*****g 的大作中提到】
: 午饭给的啥？
p*e
24 楼
after purification, you cleave the GST off.
【在 t**l 的大作中提到】
: 做genetic screen找到一个transcription factor. 怎么证明这个TF是dimer
【在 t**l 的大作中提到】
: 做genetic screen找到一个transcription factor. 怎么证明这个TF是dimer
a*n
25 楼
啥也没有啊
别去了
别去了
y*n
26 楼
GST tag本身就会形成 dimer.
【在 f*****f 的大作中提到】
: 不用，只是gst为例，只要能纯化出来就行。
y*n
27 楼
找篇文章看看吧，看怎么确定分子量。一般加对照。
【在 t**l 的大作中提到】
: 请问一下gel filtration 能给出什么定量的结果吗？ 能具体的说明哪块elute是多少
: kd.
g*p
28 楼
这么多tag的例子你不举，偏偏举这个
gst is naturally a dimer
【在 f*****f 的大作中提到】
: 不用，只是gst为例，只要能纯化出来就行。
gst is naturally a dimer
【在 f*****f 的大作中提到】
: 不用，只是gst为例，只要能纯化出来就行。
t*2
29 楼
最直接有力的证据，也是最常用的方法就是跑变性和非变性胶。
g*p
30 楼
你可以用接近10种方法来证明
但是无偏的方法学还是纯化蛋白后用静态光散射和超速离心来鉴定
【在 t**l 的大作中提到】
: 做genetic screen找到一个transcription factor. 怎么证明这个TF是dimer
但是无偏的方法学还是纯化蛋白后用静态光散射和超速离心来鉴定
【在 t**l 的大作中提到】
: 做genetic screen找到一个transcription factor. 怎么证明这个TF是dimer
g*p
31 楼
X光测定可不能证明二体结构
最多可以说明其相关性
【在 f*****f 的大作中提到】
: 方法很多：
: 一种是稳定的dimer，比如二硫键形成的dimer，SDS lysis buffer 也不能破坏，
: Western blot会有两条带，刚好两倍差别。一定要确定的话可以IP后可以mass-spec
: 二假如SDS lysis buffer 会破坏，可以先IP后，sucrose gradient或是分子量层析，
: 至少有2个component
: 三，假如蛋白能纯化出来的，就更容易了。直接GST-protein过分子筛。
: 四，IP或pull down用外源蛋白可以沉淀下endogenous protein，说明可以形成dimer或
: polymer
: 五，X-ray and structural determination确定dimer结构
最多可以说明其相关性
【在 f*****f 的大作中提到】
: 方法很多：
: 一种是稳定的dimer，比如二硫键形成的dimer，SDS lysis buffer 也不能破坏，
: Western blot会有两条带，刚好两倍差别。一定要确定的话可以IP后可以mass-spec
: 二假如SDS lysis buffer 会破坏，可以先IP后，sucrose gradient或是分子量层析，
: 至少有2个component
: 三，假如蛋白能纯化出来的，就更容易了。直接GST-protein过分子筛。
: 四，IP或pull down用外源蛋白可以沉淀下endogenous protein，说明可以形成dimer或
: polymer
: 五，X-ray and structural determination确定dimer结构
b*s
32 楼
跟帖问一句。证明一个TF是dimer还是monomer有什么大的生物学意义吗？当然可能对TF
的function, mobility等有潜在的调控作用。但在我做的传统发育里，看到的大部分都
还是集中在TF的调控基因上。
【在 t**l 的大作中提到】
: 做genetic screen找到一个transcription factor. 怎么证明这个TF是dimer
的function, mobility等有潜在的调控作用。但在我做的传统发育里，看到的大部分都
还是集中在TF的调控基因上。
【在 t**l 的大作中提到】
: 做genetic screen找到一个transcription factor. 怎么证明这个TF是dimer
H*i
33 楼
LacI的monomer dimer tetramer对synthetic biology的一些设计就很重要，会直接影
响能观测到的现象/表型
而且简单的hill function对很多相关动力学现象的解释就不好，需要加入时间参数，
这个和多聚体就很有关系了。
响能观测到的现象/表型
而且简单的hill function对很多相关动力学现象的解释就不好，需要加入时间参数，
这个和多聚体就很有关系了。
d*s
35 楼
我们以前做过eNOS的dimer和monomer，程序如下：
正常提取蛋白，按照常规Western Blot准备标本
将标本分为2份：一份boiled，一份unboiled
在4度下跑SDS-PAGE胶
然后Western blot程序
最好在胶片上判断：Boiled的标本只有1条monomer带，unboiled的标本在2倍monomer分
子量位
置有条带表示是dimer
正常提取蛋白，按照常规Western Blot准备标本
将标本分为2份：一份boiled，一份unboiled
在4度下跑SDS-PAGE胶
然后Western blot程序
最好在胶片上判断：Boiled的标本只有1条monomer带，unboiled的标本在2倍monomer分
子量位
置有条带表示是dimer
C*4
36 楼
不boil的是不是还不能加DTT啊
是否还需要一块非变性胶
【在 d*****s 的大作中提到】
: 我们以前做过eNOS的dimer和monomer，程序如下：
: 正常提取蛋白，按照常规Western Blot准备标本
: 将标本分为2份：一份boiled，一份unboiled
: 在4度下跑SDS-PAGE胶
: 然后Western blot程序
: 最好在胶片上判断：Boiled的标本只有1条monomer带，unboiled的标本在2倍monomer分
: 子量位
: 置有条带表示是dimer
是否还需要一块非变性胶
【在 d*****s 的大作中提到】
: 我们以前做过eNOS的dimer和monomer，程序如下：
: 正常提取蛋白，按照常规Western Blot准备标本
: 将标本分为2份：一份boiled，一份unboiled
: 在4度下跑SDS-PAGE胶
: 然后Western blot程序
: 最好在胶片上判断：Boiled的标本只有1条monomer带，unboiled的标本在2倍monomer分
: 子量位
: 置有条带表示是dimer
o*e
37 楼
嗯。得到pure的样品后，看方便用到什么设备了。
以前所在的化学实验室是利用Size Exclusion Chromatography(Gel Permeation
Chromatography) with online Multi-angle light scattering detection.
做Analytical Ultracentrifugation的话就得送外面专门的实验室了。不过这个
实验时间很长，样品的稳定性是一个需要考虑的问题。
【在 g*****p 的大作中提到】
: 你可以用接近10种方法来证明
: 但是无偏的方法学还是纯化蛋白后用静态光散射和超速离心来鉴定
以前所在的化学实验室是利用Size Exclusion Chromatography(Gel Permeation
Chromatography) with online Multi-angle light scattering detection.
做Analytical Ultracentrifugation的话就得送外面专门的实验室了。不过这个
实验时间很长，样品的稳定性是一个需要考虑的问题。
【在 g*****p 的大作中提到】
: 你可以用接近10种方法来证明
: 但是无偏的方法学还是纯化蛋白后用静态光散射和超速离心来鉴定
t*2
38 楼
这就是个jbc的文章。。。。
TF
【在 b******s 的大作中提到】
: 跟帖问一句。证明一个TF是dimer还是monomer有什么大的生物学意义吗？当然可能对TF
: 的function, mobility等有潜在的调控作用。但在我做的传统发育里，看到的大部分都
: 还是集中在TF的调控基因上。
TF
【在 b******s 的大作中提到】
: 跟帖问一句。证明一个TF是dimer还是monomer有什么大的生物学意义吗？当然可能对TF
: 的function, mobility等有潜在的调控作用。但在我做的传统发育里，看到的大部分都
: 还是集中在TF的调控基因上。
t*t
39 楼
超级稳定的十聚体呢？
H*g
40 楼
Sorry couldn't type in Chinese here.
Was the result from this analytic method published?
Did the reviewers buy it?
【在 d*****s 的大作中提到】
: 我们以前做过eNOS的dimer和monomer，程序如下：
: 正常提取蛋白，按照常规Western Blot准备标本
: 将标本分为2份：一份boiled，一份unboiled
: 在4度下跑SDS-PAGE胶
: 然后Western blot程序
: 最好在胶片上判断：Boiled的标本只有1条monomer带，unboiled的标本在2倍monomer分
: 子量位
: 置有条带表示是dimer
Was the result from this analytic method published?
Did the reviewers buy it?
【在 d*****s 的大作中提到】
: 我们以前做过eNOS的dimer和monomer，程序如下：
: 正常提取蛋白，按照常规Western Blot准备标本
: 将标本分为2份：一份boiled，一份unboiled
: 在4度下跑SDS-PAGE胶
: 然后Western blot程序
: 最好在胶片上判断：Boiled的标本只有1条monomer带，unboiled的标本在2倍monomer分
: 子量位
: 置有条带表示是dimer
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