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western出来的条带大小不对，如何确定不是非特异性信号

western出来的条带大小不对，如何确定不是非特异性信号# Biology - 生物学

z*t2012-12-14 08:12

1 楼

再做一个200kd蛋白的western blot，在高表达此蛋白的细胞系中试了一个抗体后发现
在膜上的带在250kd左右，还有若干小于130kd的带，这种情况可能是antibody的非特异
反应么或者是蛋白有isoform和post-translational modification？我怎么能确认
250kd的带是我的蛋白呢？
谢谢各路神仙啦

r*e2012-12-14 08:12

2 楼

RNAi knockdown and check the bands.

【在 z*t 的大作中提到】

: 再做一个200kd蛋白的western blot，在高表达此蛋白的细胞系中试了一个抗体后发现
: 在膜上的带在250kd左右，还有若干小于130kd的带，这种情况可能是antibody的非特异
: 反应么或者是蛋白有isoform和post-translational modification？我怎么能确认
: 250kd的带是我的蛋白呢？
: 谢谢各路神仙啦

q*g2012-12-14 08:12

3 楼

peptide block.

H*g2012-12-14 08:12

4 楼

Where did u get the antibody?

【在 z*t 的大作中提到】

w*r2012-12-14 08:12

5 楼

1. siRNA or KO cell
2. Overexpress tagged protein (HA or Flag), blot with tag-antibody and your
ab side by side.

z*t2012-12-14 08:12

6 楼

A new campany called my biosoure

【在 H*g 的大作中提到】

: Where did u get the antibody?

z*t2012-12-14 08:12

7 楼

Thanks so much all you comments:)
I just communicate with people in the field, I found actually the protein
can be posttranslational modified:) I will try the method your guys provide
and test the antibody again:)

your

【在 w********r 的大作中提到】

: 1. siRNA or KO cell
: 2. Overexpress tagged protein (HA or Flag), blot with tag-antibody and your
: ab side by side.