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knockdown某基因后3天细胞开始死亡，求解

knockdown某基因后3天细胞开始死亡，求解# Biology - 生物学

C*y2013-01-03 08:01

1 楼

突然发现摄影比赛已经截止了啊，下次再参加吧。
版上好多猫猫狗狗生病，看得真是揪心，希望都很快好起来！
太喜欢这个玩具了，玩疯了
疯过以后估计热的够呛，摸摸他的耳朵都是烫烫的。找块瓷砖地凉快凉快，一边还呼哧
呼哧大喘气。
再之后就去被窝里躺躺～
最近在阳台上种了些花，牛牛还挺乖的，一点都没破坏，只是看看闻闻。估计味道不对
胃口。
天天睡十几个小时咋还这么困呢！
最后来张正脸。最近似乎长了些肉，脸都宽了。干粮要减一点了。

t*a2013-01-03 08:01

2 楼

knockdown某基因后3天细胞开始死亡，最后基本死光，剩下很少部分。
大家遇到过这个情况吗？求解？
这个基因研究较少，不知道该从哪些方面去考虑。

i*p2013-01-03 08:01

3 楼

大赞！！牛牛每次的照片都是极品

A*y2013-01-03 08:01

4 楼

That's pretty good. Not so many siRNA (I assume) knockdown actually kill
cells. Most of them just anti-preoperative.

a*e2013-01-03 08:01

5 楼

太可耐了！

F*Q2013-01-03 08:01

6 楼

这种基因应该很多吧？我最近做的那个东西，我认为其调控基因就应该属于那一类。可
惜没机会把那个基因给找出来。

【在 t**********a 的大作中提到】

: knockdown某基因后3天细胞开始死亡，最后基本死光，剩下很少部分。
: 大家遇到过这个情况吗？求解？
: 这个基因研究较少，不知道该从哪些方面去考虑。

s*t2013-01-03 08:01

7 楼

真可爱！

t*a2013-01-03 08:01

8 楼

我用的lentivirus 感染而不是siRNA。
lentivirus感染后第二天换液，不加puromycin筛选，前2天细胞长得好好的，3天后细
胞开始减少，而对照一直长得好。
如果加pyromycin筛选的话3-5天后细胞开始减少（未感染的blank细胞在加puromycin后
第二天几乎全死光），直到剩下寥寥无几（估计是感染效率不高的细胞），得1-2周后
才慢慢长满，此时细胞生长仍然慢于对照细胞。

【在 A******y 的大作中提到】

: That's pretty good. Not so many siRNA (I assume) knockdown actually kill
: cells. Most of them just anti-preoperative.

p*f2013-01-03 08:01

9 楼

美牛啊.有摄影技术高超的妈妈真幸福.可怜我家两个都没有好片片.

f*g2013-01-03 08:01

10 楼

针对这个基因，你应该试更多的shRNA，防止offtarget。
另外，多重复，因为整合位点也有可能是细胞死亡的原因之一。

f*n2013-01-03 08:01

11 楼

喜欢牛牛！祝版上的猫咪狗狗们尽快好！

f*g2013-01-03 08:01

12 楼

这个基因敲除小鼠能买到吗？
如果胚胎致死的话，可以自己做条件敲除小鼠，很好的课题，但是就是比较费时间

k*n2013-01-03 08:01

13 楼

so cute!!

c*42013-01-03 08:01

14 楼

对于cancer领域来说，这是一个非常不错的原始数据，值得跟进。如上所说，你必须验
证这个现象。我觉得最好的办法是能搞到inducible的shRNA，看看open biosystem的网
站，他们有pTRIPZ一类的inducible的shRNA。

z*e2013-01-03 08:01

15 楼

昨天投票的时候我找了半天都没有你的作品 :-(

t*a2013-01-03 08:01

16 楼

关键是下一步该怎么做？请大家给点建议。

t*82013-01-03 08:01

17 楼

照的真好啊，赞啊赞
牛牛麻麻阳台上种的什么东西？我家以前老猫在小的时候每天抱着我爸种的龟背竹打秋
千，种了好多年的好大一棵最后死在
她手里了，哈哈

d*m2013-01-03 08:01

18 楼

关键下一步怎么做？别人都给你这么多建议了，也该自己动动脑子了吧？别人帮你设计
实验然后你take credit?世界上有这么好的事情？

C*y2013-01-03 08:01

19 楼

丝瓜黄瓜西红柿九层塔向日葵牵牛花五角星花等等，第一次在阳台上种菜种花，不知道
能不能结果呢。两周以前开始种的，现在全都发出来了。

【在 t*****8 的大作中提到】

: 照的真好啊，赞啊赞
: 牛牛麻麻阳台上种的什么东西？我家以前老猫在小的时候每天抱着我爸种的龟背竹打秋
: 千，种了好多年的好大一棵最后死在
: 她手里了，哈哈

S*s2013-01-03 08:01

20 楼

There are lots of genes which are essential to cell survival.
I do not think you should go for it just because of cell death unless you
have other data.
According to genome-wide screen data I got, there are 100-300 genes are
required for cell survival(knockdown cause 70% death).
你要问自己一个问题，做这个课题的目的是什么。不然做着做着就lost了。

【在 t**********a 的大作中提到】

C*y2013-01-03 08:01

21 楼

谢谢惦记啊，我以为还有一周才结束呢。你也没参加么好像？

【在 z*****e 的大作中提到】

: 昨天投票的时候我找了半天都没有你的作品 :-(

t*a2013-01-03 08:01

22 楼

刚开始接触分子生物方面，很多地方不懂，也没有什么头绪，请大家多多指教

【在 d********m 的大作中提到】

: 关键下一步怎么做？别人都给你这么多建议了，也该自己动动脑子了吧？别人帮你设计
: 实验然后你take credit?世界上有这么好的事情？

C*y2013-01-03 08:01

23 楼

哈哈猫猫只要有吃有喝有玩就好了，他们才不需要照片呢，照片都是给我自己玩的

【在 p********f 的大作中提到】

: 美牛啊.有摄影技术高超的妈妈真幸福.可怜我家两个都没有好片片.

a*n2013-01-03 08:01

24 楼

恭喜，说不定你发现了一个新的药物靶点

s*r2013-01-03 08:01

25 楼

揉~

【在 C**********y 的大作中提到】

: 突然发现摄影比赛已经截止了啊，下次再参加吧。
: 版上好多猫猫狗狗生病，看得真是揪心，希望都很快好起来！
: 太喜欢这个玩具了，玩疯了
: 疯过以后估计热的够呛，摸摸他的耳朵都是烫烫的。找块瓷砖地凉快凉快，一边还呼哧
: 呼哧大喘气。
: 再之后就去被窝里躺躺～
: 最近在阳台上种了些花，牛牛还挺乖的，一点都没破坏，只是看看闻闻。估计味道不对
: 胃口。
: 天天睡十几个小时咋还这么困呢！
: 最后来张正脸。最近似乎长了些肉，脸都宽了。干粮要减一点了。

q*g2013-01-03 08:01

26 楼

我觉得这是正解。

【在 c*******4 的大作中提到】

: 对于cancer领域来说，这是一个非常不错的原始数据，值得跟进。如上所说，你必须验
: 证这个现象。我觉得最好的办法是能搞到inducible的shRNA，看看open biosystem的网
: 站，他们有pTRIPZ一类的inducible的shRNA。

t*82013-01-03 08:01

27 楼

wow～～～～
好能干啊！！
喜欢你家阳台，很宽敞，只要阳光充分，绝对没问题。我去年在阳台种的西红柿辣椒都
长得不错。可惜辣椒种子最终还是没
收好。
我阳台朝西，下午才开始有阳光，反正我也种着玩，结出的果实都非常原汁原味，比超
市卖的organic的还好吃很多倍。
尤其是西红柿，太多汁美味了！
我今年的目标是栀子花～

【在 C**********y 的大作中提到】

: 丝瓜黄瓜西红柿九层塔向日葵牵牛花五角星花等等，第一次在阳台上种菜种花，不知道
: 能不能结果呢。两周以前开始种的，现在全都发出来了。

q*g2013-01-03 08:01

28 楼

我觉得你应该先做western，看看你的目的基因表达是否降低。你说，只是生长慢于对
照细胞，很有可能是抑制细胞生长。你可以先用筛选后的细胞来做些试验，MTT，
AnnexinV，cell cycle, colony之类的，看看是否引起apoptosis还是作用于cell
cycle。然后可以做个xenograft看看。从机理上，你要看看这个蛋白调控什么信号通路
，或者和哪些蛋白作用。
如果引起细胞死亡，我还是觉得用inducible system比较好。

【在 t**********a 的大作中提到】

: 我用的lentivirus 感染而不是siRNA。
: lentivirus感染后第二天换液，不加puromycin筛选，前2天细胞长得好好的，3天后细
: 胞开始减少，而对照一直长得好。
: 如果加pyromycin筛选的话3-5天后细胞开始减少（未感染的blank细胞在加puromycin后
: 第二天几乎全死光），直到剩下寥寥无几（估计是感染效率不高的细胞），得1-2周后
: 才慢慢长满，此时细胞生长仍然慢于对照细胞。

t*u2013-01-03 08:01

29 楼

请教一下，买的什么土？是potting soil吗？
我们院子里买了些compost，结果很结块，也不知道对不对
德州的土都是黄粘土，一点营养都没有，而且不渗水，什么都难种呀

t*22013-01-03 08:01

30 楼

同上，必须做inducible的shRNA。

w*62013-01-03 08:01

31 楼

第一张的玩具哪里买的啊？俺也想给家里两只猫咪买

ODqnRyE6I/AAAAAAAAlwc/A9rL_8xqG2o/s576/IMG_8821.JPG
OGcSpSf7I/AAAAAAAAlw4/9eSjYFaDCBM/s576/IMG_8854.JPG
Y/s576/IMG_9639.JPG

【在 C**********y 的大作中提到】

j*o2013-01-03 08:01

32 楼

先rescue一把再说

o*52013-01-03 08:01

33 楼

nice

Y*Y2013-01-03 08:01

34 楼

美貌无比，真想偷猫

A*R2013-01-03 08:01

35 楼

同问。
牛牛妈的摄影不参赛好可惜！

【在 w********6 的大作中提到】

: 第一张的玩具哪里买的啊？俺也想给家里两只猫咪买
:
: ODqnRyE6I/AAAAAAAAlwc/A9rL_8xqG2o/s576/IMG_8821.JPG
: OGcSpSf7I/AAAAAAAAlw4/9eSjYFaDCBM/s576/IMG_8854.JPG
: Y/s576/IMG_9639.JPG

p*u2013-01-03 08:01

36 楼

牛牛真的很英俊，每次看都像艺术照似的。又乖，这么宽的阳台栏杆缝隙也不会玩跳楼
失踪。
还有阿，我正想说呢，昨天看牛牛另外一个帖子，怎么阳台上摆满了空花盆，原来都在
育苗。。。。。。

【在 C**********y 的大作中提到】

h*o2013-01-03 08:01

37 楼

牛牛的气场太强大了~~

C*y2013-01-03 08:01

38 楼

我家也是朝西的阳台，我觉得日照时间最多有四五个小时。你除了西红柿辣椒还种什么
了吗？收成如何?很受鼓舞啊！是用什么土种的？施肥吗？不知道你在哪个城市，我这
里天气很快就要九十多了，好像太热的话西红柿就不结果。
不好意思问了太多问题啊，周围在阳台上种菜的人很少，没什么人交流经验。以后多切
磋。

【在 t*****8 的大作中提到】

: wow～～～～
: 好能干啊！！
: 喜欢你家阳台，很宽敞，只要阳光充分，绝对没问题。我去年在阳台种的西红柿辣椒都
: 长得不错。可惜辣椒种子最终还是没
: 收好。
: 我阳台朝西，下午才开始有阳光，反正我也种着玩，结出的果实都非常原汁原味，比超
: 市卖的organic的还好吃很多倍。
: 尤其是西红柿，太多汁美味了！
: 我今年的目标是栀子花～

C*y2013-01-03 08:01

39 楼

大米妈，我是买了potting soil和peat moss,混起来种的，后者大概是1/3.
我也没经验，借了两本书读，说土是很关键的，如果当地的土不好，就完全用买来的土
，成分好，也没有虫子。也可以自己配，1/3 compose加1/3 moss加1/3砾石，去garden
center都有卖的。如果配的多的话会比potting soil便宜很多。
如果用混好的potting soil，你可以看看成分，我买的那里面没有moss，所以我自己去
walmart买了一袋来混。
推荐一本书： All new square foot gardening : grow more in less space! / Mel
Bartholomew.讲的是raised bed gardening，花一个小时翻一下，心里就有数多了。图
书馆这类书也很多，我还借了一本专门针对德州的，也挺好的。

【在 t*****u 的大作中提到】

: 请教一下，买的什么土？是potting soil吗？
: 我们院子里买了些compost，结果很结块，也不知道对不对
: 德州的土都是黄粘土，一点营养都没有，而且不渗水，什么都难种呀

C*y2013-01-03 08:01

40 楼

一般的宠物用品店应该都有，我在petsmart买的，5快钱。买一个吧，真是太好玩了。

【在 w********6 的大作中提到】

C*y2013-01-03 08:01

41 楼

一般他在阳台上玩，我都在一边看着，好像猫对高度还是有感觉的，不会轻易跳。
有些花盆是刚买来的，拍照的时候还没开始种。现在基本都种满了：）买这些花盆还
花了不少钱，希望最后能结几个果子安慰一下。

【在 p****u 的大作中提到】

: 牛牛真的很英俊，每次看都像艺术照似的。又乖，这么宽的阳台栏杆缝隙也不会玩跳楼
: 失踪。
: 还有阿，我正想说呢，昨天看牛牛另外一个帖子，怎么阳台上摆满了空花盆，原来都在
: 育苗。。。。。。