需要过表达一个蛋白在小鼠T细胞# Biology - 生物学
j*g
1 楼
要是手动PS就太傻了，自动的就太牛了，路边（比如说三番downtown）行人那么多，人
脸有大有小，
有元有进，有黑有白，有和环境色彩融合的，还角度不同，都能被blur，我觉得是不是
自动之后QA天天
过一遍再手动模糊？
脸有大有小，
有元有进，有黑有白，有和环境色彩融合的，还角度不同，都能被blur，我觉得是不是
自动之后QA天天
过一遍再手动模糊？
m*u
2 楼
需要稳定整合。该选lenti还是retrovirus系统？选什么promoter在小鼠T细胞里面表达
高？望做过的大虾们不吝赐教。包子酬谢？
高？望做过的大虾们不吝赐教。包子酬谢？
q*d
3 楼
这不难吧。肯定是算法自动实现的。
s*n
4 楼
那个cell line？
k*e
5 楼
google picasa里面的人脸识别已经做得很牛了
不但能在各种条件下认出来是脸，
而且还能认出来哪几张脸是同一个人，
给你group起来，加入新照片的时候，
自动给出suggestion这是谁。
最牛逼的是，我万圣节画了个鬼妆，满脸的油彩，
去party没一个朋友认出我来，都是很熟的熟人啊。
照片放进picasa，被picasa认出来了！！！
【在 j*****g 的大作中提到】
: 要是手动PS就太傻了，自动的就太牛了，路边（比如说三番downtown）行人那么多，人
: 脸有大有小，
: 有元有进，有黑有白，有和环境色彩融合的，还角度不同，都能被blur，我觉得是不是
: 自动之后QA天天
: 过一遍再手动模糊？
不但能在各种条件下认出来是脸，
而且还能认出来哪几张脸是同一个人，
给你group起来，加入新照片的时候，
自动给出suggestion这是谁。
最牛逼的是，我万圣节画了个鬼妆，满脸的油彩，
去party没一个朋友认出我来，都是很熟的熟人啊。
照片放进picasa，被picasa认出来了！！！
【在 j*****g 的大作中提到】
: 要是手动PS就太傻了，自动的就太牛了，路边（比如说三番downtown）行人那么多，人
: 脸有大有小，
: 有元有进，有黑有白，有和环境色彩融合的，还角度不同，都能被blur，我觉得是不是
: 自动之后QA天天
: 过一遍再手动模糊？
m*u
6 楼
不是cell line，就是primary cell
【在 s********n 的大作中提到】
: 那个cell line？
【在 s********n 的大作中提到】
: 那个cell line？
q*d
7 楼
人类识别技术主要是靠对脸形的特征进行提取进行识别的，颜色应该干扰不大。
【在 k*****e 的大作中提到】
: google picasa里面的人脸识别已经做得很牛了
: 不但能在各种条件下认出来是脸，
: 而且还能认出来哪几张脸是同一个人，
: 给你group起来，加入新照片的时候，
: 自动给出suggestion这是谁。
: 最牛逼的是，我万圣节画了个鬼妆，满脸的油彩，
: 去party没一个朋友认出我来，都是很熟的熟人啊。
: 照片放进picasa，被picasa认出来了！！！
【在 k*****e 的大作中提到】
: google picasa里面的人脸识别已经做得很牛了
: 不但能在各种条件下认出来是脸，
: 而且还能认出来哪几张脸是同一个人，
: 给你group起来，加入新照片的时候，
: 自动给出suggestion这是谁。
: 最牛逼的是，我万圣节画了个鬼妆，满脸的油彩，
: 去party没一个朋友认出我来，都是很熟的熟人啊。
: 照片放进picasa，被picasa认出来了！！！
g*u
8 楼
我们在human原代CD4是用lenti，HIV derived系统，能到15-20%吧。
【在 m*****u 的大作中提到】
: 需要稳定整合。该选lenti还是retrovirus系统？选什么promoter在小鼠T细胞里面表达
: 高？望做过的大虾们不吝赐教。包子酬谢？
【在 m*****u 的大作中提到】
: 需要稳定整合。该选lenti还是retrovirus系统？选什么promoter在小鼠T细胞里面表达
: 高？望做过的大虾们不吝赐教。包子酬谢？
y*e
9 楼
我没有做过这方面的专业研究，不过大概知道一些玩意。
人脸识别主要是对脸的特征进行分析，比如双眼距，嘴到双眼的垂直距离，等等。
这些参数有点类似指纹，不同的人差别会很大。对于同一个人，不同时期可能有胖有瘦，
脸的轮廓可能会发生变化，头发长短可能变化，但是这些特征比如双眼距是一直不会变
的。
【在 q*******d 的大作中提到】
: 人类识别技术主要是靠对脸形的特征进行提取进行识别的，颜色应该干扰不大。
人脸识别主要是对脸的特征进行分析，比如双眼距，嘴到双眼的垂直距离，等等。
这些参数有点类似指纹，不同的人差别会很大。对于同一个人，不同时期可能有胖有瘦，
脸的轮廓可能会发生变化，头发长短可能变化，但是这些特征比如双眼距是一直不会变
的。
【在 q*******d 的大作中提到】
: 人类识别技术主要是靠对脸形的特征进行提取进行识别的，颜色应该干扰不大。
m*u
10 楼
这个不高吧？human和mouse细胞promoter activity是有差别的。比如CMV在mouse细胞
就表达低。不知道哪个能表达高点？
【在 g***u 的大作中提到】
: 我们在human原代CD4是用lenti，HIV derived系统，能到15-20%吧。
就表达低。不知道哪个能表达高点？
【在 g***u 的大作中提到】
: 我们在human原代CD4是用lenti，HIV derived系统，能到15-20%吧。
Z*i
11 楼
Face detection and face recognition are different
d*d
12 楼
试试EF1a promoter吧，绝对比CMV及retrovirus自身的promoter强很多，而且受细胞的
分化状态影响小。
我用的就是retrovirus vector，如果用reporter gene 如GFP,CD90来检测的话，感染
率都在90%以上。
【在 m*****u 的大作中提到】
: 这个不高吧？human和mouse细胞promoter activity是有差别的。比如CMV在mouse细胞
: 就表达低。不知道哪个能表达高点？
分化状态影响小。
我用的就是retrovirus vector，如果用reporter gene 如GFP,CD90来检测的话，感染
率都在90%以上。
【在 m*****u 的大作中提到】
: 这个不高吧？human和mouse细胞promoter activity是有差别的。比如CMV在mouse细胞
: 就表达低。不知道哪个能表达高点？
s*i
13 楼
Ubiquitin Promoter，EF1a promoter,
对于老鼠细胞系来说lenti和retro都能感染，不过感染了lenti之后就不能感染retro了
，反之则可以。
【在 m*****u 的大作中提到】
: 需要稳定整合。该选lenti还是retrovirus系统？选什么promoter在小鼠T细胞里面表达
: 高？望做过的大虾们不吝赐教。包子酬谢？
对于老鼠细胞系来说lenti和retro都能感染，不过感染了lenti之后就不能感染retro了
，反之则可以。
【在 m*****u 的大作中提到】
: 需要稳定整合。该选lenti还是retrovirus系统？选什么promoter在小鼠T细胞里面表达
: 高？望做过的大虾们不吝赐教。包子酬谢？
m*u
14 楼
谢谢大侠。能否提供进一步信息？用的哪个retroviral vector？用什么包装细胞系？
用不用PCL－Eco之类helper plasmid？
【在 d****d 的大作中提到】
: 试试EF1a promoter吧，绝对比CMV及retrovirus自身的promoter强很多，而且受细胞的
: 分化状态影响小。
: 我用的就是retrovirus vector，如果用reporter gene 如GFP,CD90来检测的话，感染
: 率都在90%以上。
用不用PCL－Eco之类helper plasmid？
【在 d****d 的大作中提到】
: 试试EF1a promoter吧，绝对比CMV及retrovirus自身的promoter强很多，而且受细胞的
: 分化状态影响小。
: 我用的就是retrovirus vector，如果用reporter gene 如GFP,CD90来检测的话，感染
: 率都在90%以上。
a*s
15 楼
MSCV vector, packaging plasmid PCL-ECO
【在 m*****u 的大作中提到】
: 需要稳定整合。该选lenti还是retrovirus系统？选什么promoter在小鼠T细胞里面表达
: 高？望做过的大虾们不吝赐教。包子酬谢？
【在 m*****u 的大作中提到】
: 需要稳定整合。该选lenti还是retrovirus系统？选什么promoter在小鼠T细胞里面表达
: 高？望做过的大虾们不吝赐教。包子酬谢？
m*u
16 楼
看过这个。介绍说是在stem cell里work，不知道T细胞怎么样？谢谢
【在 a******s 的大作中提到】
: MSCV vector, packaging plasmid PCL-ECO
【在 a******s 的大作中提到】
: MSCV vector, packaging plasmid PCL-ECO
d*d
17 楼
大侠不敢当。
我用的vectors主要是两种，一种是MSCV-IRES-Thy1.1 (pMIT)，一种是pQCXIN (from
Clontech, but with EF1a promoter inserted downstream of the packaging
sequence.The pMIT vector is already good enough for T cell expression based
on my own experience. But the expression with the vectors with EF1a promoter
is more consistent among cells in different differentiated status. I use
Phoenix cell line http://www.stanford.edu/group/nolan/retroviral_systems/phx.html for packaging, and found helper plasmid DNA can increase transduction efficiency for several folds.
You may also find this webpage useful: http://systembio.com/lentiviral-technology/expression-vectors/cdna/overview
【在 m*****u 的大作中提到】
: 谢谢大侠。能否提供进一步信息？用的哪个retroviral vector？用什么包装细胞系？
: 用不用PCL－Eco之类helper plasmid？
我用的vectors主要是两种，一种是MSCV-IRES-Thy1.1 (pMIT)，一种是pQCXIN (from
Clontech, but with EF1a promoter inserted downstream of the packaging
sequence.The pMIT vector is already good enough for T cell expression based
on my own experience. But the expression with the vectors with EF1a promoter
is more consistent among cells in different differentiated status. I use
Phoenix cell line http://www.stanford.edu/group/nolan/retroviral_systems/phx.html for packaging, and found helper plasmid DNA can increase transduction efficiency for several folds.
You may also find this webpage useful: http://systembio.com/lentiviral-technology/expression-vectors/cdna/overview
【在 m*****u 的大作中提到】
: 谢谢大侠。能否提供进一步信息？用的哪个retroviral vector？用什么包装细胞系？
: 用不用PCL－Eco之类helper plasmid？
a*s
18 楼
transduction efficiency 10-50% (pMIT or pMIG). T cells need to be activated
before transduction.
【在 m*****u 的大作中提到】
: 看过这个。介绍说是在stem cell里work，不知道T细胞怎么样？谢谢
before transduction.
【在 m*****u 的大作中提到】
: 看过这个。介绍说是在stem cell里work，不知道T细胞怎么样？谢谢
m*u
19 楼
谢谢详细解答。查了一下PQCXIN。也是CMV promoter。不知道你说的EF-1a promoter在
哪里？
based
promoter
【在 d****d 的大作中提到】
: 大侠不敢当。
: 我用的vectors主要是两种，一种是MSCV-IRES-Thy1.1 (pMIT)，一种是pQCXIN (from
: Clontech, but with EF1a promoter inserted downstream of the packaging
: sequence.The pMIT vector is already good enough for T cell expression based
: on my own experience. But the expression with the vectors with EF1a promoter
: is more consistent among cells in different differentiated status. I use
: Phoenix cell line http://www.stanford.edu/group/nolan/retroviral_systems/phx.html for packaging, and found helper plasmid DNA can increase transduction efficiency for several folds.
: You may also find this webpage useful: http://systembio.com/lentiviral-technology/expression-vectors/cdna/overview
哪里？
based
promoter
【在 d****d 的大作中提到】
: 大侠不敢当。
: 我用的vectors主要是两种，一种是MSCV-IRES-Thy1.1 (pMIT)，一种是pQCXIN (from
: Clontech, but with EF1a promoter inserted downstream of the packaging
: sequence.The pMIT vector is already good enough for T cell expression based
: on my own experience. But the expression with the vectors with EF1a promoter
: is more consistent among cells in different differentiated status. I use
: Phoenix cell line http://www.stanford.edu/group/nolan/retroviral_systems/phx.html for packaging, and found helper plasmid DNA can increase transduction efficiency for several folds.
: You may also find this webpage useful: http://systembio.com/lentiviral-technology/expression-vectors/cdna/overview
d*d
20 楼
Oh, I replaced the CMV promoter in pQCXIN with the EF1a promoter by myself.
If you check the systembio website, you may find they already have something
similar.
【在 m*****u 的大作中提到】
: 谢谢详细解答。查了一下PQCXIN。也是CMV promoter。不知道你说的EF-1a promoter在
: 哪里？
:
: based
: promoter
If you check the systembio website, you may find they already have something
similar.
【在 m*****u 的大作中提到】
: 谢谢详细解答。查了一下PQCXIN。也是CMV promoter。不知道你说的EF-1a promoter在
: 哪里？
:
: based
: promoter
m*u
21 楼
没找到retroviral vector.都是lentiviral vector.用lenti的话转染效率跟retro比哪
个高？对T细胞而言
.
something
【在 d****d 的大作中提到】
: Oh, I replaced the CMV promoter in pQCXIN with the EF1a promoter by myself.
: If you check the systembio website, you may find they already have something
: similar.
个高？对T细胞而言
.
something
【在 d****d 的大作中提到】
: Oh, I replaced the CMV promoter in pQCXIN with the EF1a promoter by myself.
: If you check the systembio website, you may find they already have something
: similar.
d*d
22 楼
I have not used lentiviral vector before, so I cannot comment on that. But
as I said, I can get over 90% transduction efficiency using the pMSCV vector
to express just one cDNA. When I use 2A strategy to express two or three
cDNAs, then I can get 50% transduction efficiency, which should be
acceptable for many applications.
【在 m*****u 的大作中提到】
: 没找到retroviral vector.都是lentiviral vector.用lenti的话转染效率跟retro比哪
: 个高？对T细胞而言
:
: .
: something
as I said, I can get over 90% transduction efficiency using the pMSCV vector
to express just one cDNA. When I use 2A strategy to express two or three
cDNAs, then I can get 50% transduction efficiency, which should be
acceptable for many applications.
【在 m*****u 的大作中提到】
: 没找到retroviral vector.都是lentiviral vector.用lenti的话转染效率跟retro比哪
: 个高？对T细胞而言
:
: .
: something
s*n
23 楼
RE!
【在 s*****i 的大作中提到】
: Ubiquitin Promoter，EF1a promoter,
: 对于老鼠细胞系来说lenti和retro都能感染，不过感染了lenti之后就不能感染retro了
: ，反之则可以。
【在 s*****i 的大作中提到】
: Ubiquitin Promoter，EF1a promoter,
: 对于老鼠细胞系来说lenti和retro都能感染，不过感染了lenti之后就不能感染retro了
: ，反之则可以。
m*u
24 楼
再请教一下，从哪里order MSCV-IRES-Thy1.1？我查了一下addgene有MSCV-IRES-Thy1.
1 DEST for gateway cloning，不过是attB site，觉得比较奇怪。attB site是不能和
pEntr vector recombination的
based
promoter
【在 d****d 的大作中提到】
: 大侠不敢当。
: 我用的vectors主要是两种，一种是MSCV-IRES-Thy1.1 (pMIT)，一种是pQCXIN (from
: Clontech, but with EF1a promoter inserted downstream of the packaging
: sequence.The pMIT vector is already good enough for T cell expression based
: on my own experience. But the expression with the vectors with EF1a promoter
: is more consistent among cells in different differentiated status. I use
: Phoenix cell line http://www.stanford.edu/group/nolan/retroviral_systems/phx.html for packaging, and found helper plasmid DNA can increase transduction efficiency for several folds.
: You may also find this webpage useful: http://systembio.com/lentiviral-technology/expression-vectors/cdna/overview
1 DEST for gateway cloning，不过是attB site，觉得比较奇怪。attB site是不能和
pEntr vector recombination的
based
promoter
【在 d****d 的大作中提到】
: 大侠不敢当。
: 我用的vectors主要是两种，一种是MSCV-IRES-Thy1.1 (pMIT)，一种是pQCXIN (from
: Clontech, but with EF1a promoter inserted downstream of the packaging
: sequence.The pMIT vector is already good enough for T cell expression based
: on my own experience. But the expression with the vectors with EF1a promoter
: is more consistent among cells in different differentiated status. I use
: Phoenix cell line http://www.stanford.edu/group/nolan/retroviral_systems/phx.html for packaging, and found helper plasmid DNA can increase transduction efficiency for several folds.
: You may also find this webpage useful: http://systembio.com/lentiviral-technology/expression-vectors/cdna/overview
d*d
25 楼
I got it from another lab in the same university. The one I got is probably
of the original version, with no attB site.
Thy1.
【在 m*****u 的大作中提到】
: 再请教一下，从哪里order MSCV-IRES-Thy1.1？我查了一下addgene有MSCV-IRES-Thy1.
: 1 DEST for gateway cloning，不过是attB site，觉得比较奇怪。attB site是不能和
: pEntr vector recombination的
:
: based
: promoter
of the original version, with no attB site.
Thy1.
【在 m*****u 的大作中提到】
: 再请教一下，从哪里order MSCV-IRES-Thy1.1？我查了一下addgene有MSCV-IRES-Thy1.
: 1 DEST for gateway cloning，不过是attB site，觉得比较奇怪。attB site是不能和
: pEntr vector recombination的
:
: based
: promoter
m*u
26 楼
需要稳定整合。该选lenti还是retrovirus系统？选什么promoter在小鼠T细胞里面表达
高？望做过的大虾们不吝赐教。包子酬谢？
高？望做过的大虾们不吝赐教。包子酬谢？
s*n
27 楼
那个cell line？
m*u
28 楼
不是cell line，就是primary cell
【在 s********n 的大作中提到】
: 那个cell line？
【在 s********n 的大作中提到】
: 那个cell line？
g*u
29 楼
我们在human原代CD4是用lenti，HIV derived系统，能到15-20%吧。
【在 m*****u 的大作中提到】
: 需要稳定整合。该选lenti还是retrovirus系统？选什么promoter在小鼠T细胞里面表达
: 高？望做过的大虾们不吝赐教。包子酬谢？
【在 m*****u 的大作中提到】
: 需要稳定整合。该选lenti还是retrovirus系统？选什么promoter在小鼠T细胞里面表达
: 高？望做过的大虾们不吝赐教。包子酬谢？
m*u
30 楼
这个不高吧？human和mouse细胞promoter activity是有差别的。比如CMV在mouse细胞
就表达低。不知道哪个能表达高点？
【在 g***u 的大作中提到】
: 我们在human原代CD4是用lenti，HIV derived系统，能到15-20%吧。
就表达低。不知道哪个能表达高点？
【在 g***u 的大作中提到】
: 我们在human原代CD4是用lenti，HIV derived系统，能到15-20%吧。
d*d
31 楼
试试EF1a promoter吧，绝对比CMV及retrovirus自身的promoter强很多，而且受细胞的
分化状态影响小。
我用的就是retrovirus vector，如果用reporter gene 如GFP,CD90来检测的话，感染
率都在90%以上。
【在 m*****u 的大作中提到】
: 这个不高吧？human和mouse细胞promoter activity是有差别的。比如CMV在mouse细胞
: 就表达低。不知道哪个能表达高点？
分化状态影响小。
我用的就是retrovirus vector，如果用reporter gene 如GFP,CD90来检测的话，感染
率都在90%以上。
【在 m*****u 的大作中提到】
: 这个不高吧？human和mouse细胞promoter activity是有差别的。比如CMV在mouse细胞
: 就表达低。不知道哪个能表达高点？
s*i
32 楼
Ubiquitin Promoter，EF1a promoter,
对于老鼠细胞系来说lenti和retro都能感染，不过感染了lenti之后就不能感染retro了
，反之则可以。
【在 m*****u 的大作中提到】
: 需要稳定整合。该选lenti还是retrovirus系统？选什么promoter在小鼠T细胞里面表达
: 高？望做过的大虾们不吝赐教。包子酬谢？
对于老鼠细胞系来说lenti和retro都能感染，不过感染了lenti之后就不能感染retro了
，反之则可以。
【在 m*****u 的大作中提到】
: 需要稳定整合。该选lenti还是retrovirus系统？选什么promoter在小鼠T细胞里面表达
: 高？望做过的大虾们不吝赐教。包子酬谢？
m*u
33 楼
谢谢大侠。能否提供进一步信息？用的哪个retroviral vector？用什么包装细胞系？
用不用PCL－Eco之类helper plasmid？
【在 d****d 的大作中提到】
: 试试EF1a promoter吧，绝对比CMV及retrovirus自身的promoter强很多，而且受细胞的
: 分化状态影响小。
: 我用的就是retrovirus vector，如果用reporter gene 如GFP,CD90来检测的话，感染
: 率都在90%以上。
用不用PCL－Eco之类helper plasmid？
【在 d****d 的大作中提到】
: 试试EF1a promoter吧，绝对比CMV及retrovirus自身的promoter强很多，而且受细胞的
: 分化状态影响小。
: 我用的就是retrovirus vector，如果用reporter gene 如GFP,CD90来检测的话，感染
: 率都在90%以上。
a*s
34 楼
MSCV vector, packaging plasmid PCL-ECO
【在 m*****u 的大作中提到】
: 需要稳定整合。该选lenti还是retrovirus系统？选什么promoter在小鼠T细胞里面表达
: 高？望做过的大虾们不吝赐教。包子酬谢？
【在 m*****u 的大作中提到】
: 需要稳定整合。该选lenti还是retrovirus系统？选什么promoter在小鼠T细胞里面表达
: 高？望做过的大虾们不吝赐教。包子酬谢？
m*u
35 楼
看过这个。介绍说是在stem cell里work，不知道T细胞怎么样？谢谢
【在 a******s 的大作中提到】
: MSCV vector, packaging plasmid PCL-ECO
【在 a******s 的大作中提到】
: MSCV vector, packaging plasmid PCL-ECO
d*d
36 楼
大侠不敢当。
我用的vectors主要是两种，一种是MSCV-IRES-Thy1.1 (pMIT)，一种是pQCXIN (from
Clontech, but with EF1a promoter inserted downstream of the packaging
sequence.The pMIT vector is already good enough for T cell expression based
on my own experience. But the expression with the vectors with EF1a promoter
is more consistent among cells in different differentiated status. I use
Phoenix cell line http://www.stanford.edu/group/nolan/retroviral_systems/phx.html for packaging, and found helper plasmid DNA can increase transduction efficiency for several folds.
You may also find this webpage useful: http://systembio.com/lentiviral-technology/expression-vectors/cdna/overview
【在 m*****u 的大作中提到】
: 谢谢大侠。能否提供进一步信息？用的哪个retroviral vector？用什么包装细胞系？
: 用不用PCL－Eco之类helper plasmid？
我用的vectors主要是两种，一种是MSCV-IRES-Thy1.1 (pMIT)，一种是pQCXIN (from
Clontech, but with EF1a promoter inserted downstream of the packaging
sequence.The pMIT vector is already good enough for T cell expression based
on my own experience. But the expression with the vectors with EF1a promoter
is more consistent among cells in different differentiated status. I use
Phoenix cell line http://www.stanford.edu/group/nolan/retroviral_systems/phx.html for packaging, and found helper plasmid DNA can increase transduction efficiency for several folds.
You may also find this webpage useful: http://systembio.com/lentiviral-technology/expression-vectors/cdna/overview
【在 m*****u 的大作中提到】
: 谢谢大侠。能否提供进一步信息？用的哪个retroviral vector？用什么包装细胞系？
: 用不用PCL－Eco之类helper plasmid？
a*s
37 楼
transduction efficiency 10-50% (pMIT or pMIG). T cells need to be activated
before transduction.
【在 m*****u 的大作中提到】
: 看过这个。介绍说是在stem cell里work，不知道T细胞怎么样？谢谢
before transduction.
【在 m*****u 的大作中提到】
: 看过这个。介绍说是在stem cell里work，不知道T细胞怎么样？谢谢
m*u
38 楼
谢谢详细解答。查了一下PQCXIN。也是CMV promoter。不知道你说的EF-1a promoter在
哪里？
based
promoter
【在 d****d 的大作中提到】
: 大侠不敢当。
: 我用的vectors主要是两种，一种是MSCV-IRES-Thy1.1 (pMIT)，一种是pQCXIN (from
: Clontech, but with EF1a promoter inserted downstream of the packaging
: sequence.The pMIT vector is already good enough for T cell expression based
: on my own experience. But the expression with the vectors with EF1a promoter
: is more consistent among cells in different differentiated status. I use
: Phoenix cell line http://www.stanford.edu/group/nolan/retroviral_systems/phx.html for packaging, and found helper plasmid DNA can increase transduction efficiency for several folds.
: You may also find this webpage useful: http://systembio.com/lentiviral-technology/expression-vectors/cdna/overview
哪里？
based
promoter
【在 d****d 的大作中提到】
: 大侠不敢当。
: 我用的vectors主要是两种，一种是MSCV-IRES-Thy1.1 (pMIT)，一种是pQCXIN (from
: Clontech, but with EF1a promoter inserted downstream of the packaging
: sequence.The pMIT vector is already good enough for T cell expression based
: on my own experience. But the expression with the vectors with EF1a promoter
: is more consistent among cells in different differentiated status. I use
: Phoenix cell line http://www.stanford.edu/group/nolan/retroviral_systems/phx.html for packaging, and found helper plasmid DNA can increase transduction efficiency for several folds.
: You may also find this webpage useful: http://systembio.com/lentiviral-technology/expression-vectors/cdna/overview
d*d
39 楼
Oh, I replaced the CMV promoter in pQCXIN with the EF1a promoter by myself.
If you check the systembio website, you may find they already have something
similar.
【在 m*****u 的大作中提到】
: 谢谢详细解答。查了一下PQCXIN。也是CMV promoter。不知道你说的EF-1a promoter在
: 哪里？
:
: based
: promoter
If you check the systembio website, you may find they already have something
similar.
【在 m*****u 的大作中提到】
: 谢谢详细解答。查了一下PQCXIN。也是CMV promoter。不知道你说的EF-1a promoter在
: 哪里？
:
: based
: promoter
m*u
40 楼
没找到retroviral vector.都是lentiviral vector.用lenti的话转染效率跟retro比哪
个高？对T细胞而言
.
something
【在 d****d 的大作中提到】
: Oh, I replaced the CMV promoter in pQCXIN with the EF1a promoter by myself.
: If you check the systembio website, you may find they already have something
: similar.
个高？对T细胞而言
.
something
【在 d****d 的大作中提到】
: Oh, I replaced the CMV promoter in pQCXIN with the EF1a promoter by myself.
: If you check the systembio website, you may find they already have something
: similar.
d*d
41 楼
I have not used lentiviral vector before, so I cannot comment on that. But
as I said, I can get over 90% transduction efficiency using the pMSCV vector
to express just one cDNA. When I use 2A strategy to express two or three
cDNAs, then I can get 50% transduction efficiency, which should be
acceptable for many applications.
【在 m*****u 的大作中提到】
: 没找到retroviral vector.都是lentiviral vector.用lenti的话转染效率跟retro比哪
: 个高？对T细胞而言
:
: .
: something
as I said, I can get over 90% transduction efficiency using the pMSCV vector
to express just one cDNA. When I use 2A strategy to express two or three
cDNAs, then I can get 50% transduction efficiency, which should be
acceptable for many applications.
【在 m*****u 的大作中提到】
: 没找到retroviral vector.都是lentiviral vector.用lenti的话转染效率跟retro比哪
: 个高？对T细胞而言
:
: .
: something
s*n
42 楼
RE!
【在 s*****i 的大作中提到】
: Ubiquitin Promoter，EF1a promoter,
: 对于老鼠细胞系来说lenti和retro都能感染，不过感染了lenti之后就不能感染retro了
: ，反之则可以。
【在 s*****i 的大作中提到】
: Ubiquitin Promoter，EF1a promoter,
: 对于老鼠细胞系来说lenti和retro都能感染，不过感染了lenti之后就不能感染retro了
: ，反之则可以。
m*u
43 楼
再请教一下，从哪里order MSCV-IRES-Thy1.1？我查了一下addgene有MSCV-IRES-Thy1.
1 DEST for gateway cloning，不过是attB site，觉得比较奇怪。attB site是不能和
pEntr vector recombination的
based
promoter
【在 d****d 的大作中提到】
: 大侠不敢当。
: 我用的vectors主要是两种，一种是MSCV-IRES-Thy1.1 (pMIT)，一种是pQCXIN (from
: Clontech, but with EF1a promoter inserted downstream of the packaging
: sequence.The pMIT vector is already good enough for T cell expression based
: on my own experience. But the expression with the vectors with EF1a promoter
: is more consistent among cells in different differentiated status. I use
: Phoenix cell line http://www.stanford.edu/group/nolan/retroviral_systems/phx.html for packaging, and found helper plasmid DNA can increase transduction efficiency for several folds.
: You may also find this webpage useful: http://systembio.com/lentiviral-technology/expression-vectors/cdna/overview
1 DEST for gateway cloning，不过是attB site，觉得比较奇怪。attB site是不能和
pEntr vector recombination的
based
promoter
【在 d****d 的大作中提到】
: 大侠不敢当。
: 我用的vectors主要是两种，一种是MSCV-IRES-Thy1.1 (pMIT)，一种是pQCXIN (from
: Clontech, but with EF1a promoter inserted downstream of the packaging
: sequence.The pMIT vector is already good enough for T cell expression based
: on my own experience. But the expression with the vectors with EF1a promoter
: is more consistent among cells in different differentiated status. I use
: Phoenix cell line http://www.stanford.edu/group/nolan/retroviral_systems/phx.html for packaging, and found helper plasmid DNA can increase transduction efficiency for several folds.
: You may also find this webpage useful: http://systembio.com/lentiviral-technology/expression-vectors/cdna/overview
d*d
44 楼
I got it from another lab in the same university. The one I got is probably
of the original version, with no attB site.
Thy1.
【在 m*****u 的大作中提到】
: 再请教一下，从哪里order MSCV-IRES-Thy1.1？我查了一下addgene有MSCV-IRES-Thy1.
: 1 DEST for gateway cloning，不过是attB site，觉得比较奇怪。attB site是不能和
: pEntr vector recombination的
:
: based
: promoter
of the original version, with no attB site.
Thy1.
【在 m*****u 的大作中提到】
: 再请教一下，从哪里order MSCV-IRES-Thy1.1？我查了一下addgene有MSCV-IRES-Thy1.
: 1 DEST for gateway cloning，不过是attB site，觉得比较奇怪。attB site是不能和
: pEntr vector recombination的
:
: based
: promoter
x*8
45 楼
LZ对中国人特别仇视， 大家不要回答他
【在 m*****u 的大作中提到】
: 再请教一下，从哪里order MSCV-IRES-Thy1.1？我查了一下addgene有MSCV-IRES-Thy1.
: 1 DEST for gateway cloning，不过是attB site，觉得比较奇怪。attB site是不能和
: pEntr vector recombination的
:
: based
: promoter
【在 m*****u 的大作中提到】
: 再请教一下，从哪里order MSCV-IRES-Thy1.1？我查了一下addgene有MSCV-IRES-Thy1.
: 1 DEST for gateway cloning，不过是attB site，觉得比较奇怪。attB site是不能和
: pEntr vector recombination的
:
: based
: promoter
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