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tamoxifen inducible Cre gentyping Help

tamoxifen inducible Cre gentyping Help# Biology - 生物学

E*U2013-03-29 07:03

1 楼

我是Fresh MS,之前无全职工作经历。大上周拿了某500强公司的一个engineer职位的口头
OFFER，当时是HM打电话和发邮件说的。但是之后就没消息了。上周五实在忍不住，打
电话给HM,说是legal department在处理，之后会是纸质邮件方式的正式offer。一晃几
天过去，又没信了。没跟我要reference，也没问我drug test的事情。这个公司一向支
持H1B。我已经move on了。那会是什么环节出了问题呢？
谢谢！

x*42013-03-29 07:03

2 楼

说说synology有什么好处？

b*02013-03-29 07:03

3 楼

一年前从jax lab买的tamoxifen inducible Cre. 用他们设计的primer,做genotyping
一直都好好的，只有一条100 size band.一个月前同样的试剂，突然就不work 了，
出现了多条band,而且每个sample 都有band, 连negative control.好像恰好是
expected size. 我几乎试了所有的可能，都不行。难道有重新设计引物么，可是为什
么原来jax lab的引物就突然不work了呢？
这个cre strain一直好头疼？
求大牛们看看怎么办？

E*U2013-03-29 07:03

4 楼

自己顶一下没有人知道吗？

口头

【在 E******U 的大作中提到】

: 我是Fresh MS,之前无全职工作经历。大上周拿了某500强公司的一个engineer职位的口头
: OFFER，当时是HM打电话和发邮件说的。但是之后就没消息了。上周五实在忍不住，打
: 电话给HM,说是legal department在处理，之后会是纸质邮件方式的正式offer。一晃几
: 天过去，又没信了。没跟我要reference，也没问我drug test的事情。这个公司一向支
: 持H1B。我已经move on了。那会是什么环节出了问题呢？
: 谢谢！

p*o2013-03-29 07:03

5 楼

no z-turn

【在 x***4 的大作中提到】

: 说说synology有什么好处？

s*i2013-03-29 07:03

6 楼

试试这个
Universal Cre genotyping
Forward primer: ACCAGAGACGGAAATCCATCG
Reverse primer: CCACGACCAAGTGACAGCAATG
94oC 3min
94oC 30s
58oC 30s
72oC 40s
72oC 2min
4oC hold
Positive 400bp band.

genotyping

【在 b*******0 的大作中提到】

: 一年前从jax lab买的tamoxifen inducible Cre. 用他们设计的primer,做genotyping
: 一直都好好的，只有一条100 size band.一个月前同样的试剂，突然就不work 了，
: 出现了多条band,而且每个sample 都有band, 连negative control.好像恰好是
: expected size. 我几乎试了所有的可能，都不行。难道有重新设计引物么，可是为什
: 么原来jax lab的引物就突然不work了呢？
: 这个cre strain一直好头疼？
: 求大牛们看看怎么办？

b*y2013-03-29 07:03

7 楼

等呗,问题不大,大公司效率低

口头

【在 E******U 的大作中提到】

g*t2013-03-29 07:03

8 楼

没什么，nas的atm cpu全靠optware，这个是核心

b*02013-03-29 07:03

9 楼

多谢！step2-4 循环几次啊？

【在 s*****i 的大作中提到】

: 试试这个
: Universal Cre genotyping
: Forward primer: ACCAGAGACGGAAATCCATCG
: Reverse primer: CCACGACCAAGTGACAGCAATG
: 94oC 3min
: 94oC 30s
: 58oC 30s
: 72oC 40s
: 72oC 2min
: 4oC hold

R*92013-03-29 07:03

10 楼

大公司肯定honor 口头offer的。都给offer了还要什么reference啊，又不是必须的。

j*f2013-03-29 07:03

11 楼

月经贴。。考考古就都知道了，

s*i2013-03-29 07:03

12 楼

30~35

【在 b*******0 的大作中提到】

: 多谢！step2-4 循环几次啊？

E*U2013-03-29 07:03

13 楼

考古了下本版有到legal department之后offer被收回的
真是不明白这其中到底能有什么问题？

【在 R******9 的大作中提到】

: 大公司肯定honor 口头offer的。都给offer了还要什么reference啊，又不是必须的。

B*N2013-03-29 07:03

14 楼

如果不加DNA也能扩出斑的话，很可能是气溶胶污染了，PCR产物蒸发在空气里，或者在
piptte的内壁上了。我是后来换了房间用别人的枪做就好了

R*92013-03-29 07:03

15 楼

那可能是background check没过····

【在 E******U 的大作中提到】

: 考古了下本版有到legal department之后offer被收回的
: 真是不明白这其中到底能有什么问题？

i*02013-03-29 07:03

16 楼

最近我们这边的cre也是又问题，以前都是结合着actin （作为内参），cre和actin的
带都很sharp，现在不管怎么还条件都是smear。隐约能看到cre的带，但是actin基本上
看不到。

r*y2013-03-29 07:03

17 楼

一般是发了正式offer后才会background check 和drug test的吧，大公司可能效率比
较慢吧。

b*02013-03-29 07:03

18 楼

我曾经也遇到过，后来降低了annealing temp,就好了。不过现在变成所有sample都带
条带了，本来work的control也不work了，很头疼。

【在 i*********0 的大作中提到】

: 最近我们这边的cre也是又问题，以前都是结合着actin （作为内参），cre和actin的
: 带都很sharp，现在不管怎么还条件都是smear。隐约能看到cre的带，但是actin基本上
: 看不到。

t*02013-03-29 07:03

19 楼

they are finding an attorney for you - evaluating h1b case.

i*02013-03-29 07:03

20 楼

我降低一下温度试试。

E*U2013-03-29 07:03

21 楼

但是现在还没到4月1号呢啊……再说他们一年H1B好几十，难道还得现找？

【在 t****0 的大作中提到】

: they are finding an attorney for you - evaluating h1b case.

S*92013-03-29 07:03

22 楼

Jax lab的tamoxifen inducible Cre老鼠我们都是300和100bp 2个条带，有100的是阳
性的。
这个老鼠我们用了4年了，genotype一直很稳定。

t*02013-03-29 07:03

23 楼

I think they might be evaluating if you are qualified for h1b.

p*o2013-03-29 07:03

24 楼

我也想问一下，我的一直都是cre 100bp的条带很清晰。但有一个问题，postitive的
100bp条带very very very strong,但negative的也有很弱的条带。开始我还以为电泳
加样时不小心污染了，但试了很多次，从PCR从头来过，还是这样。我把那些很弱很弱
的条带都当negative了。希望没有弄错。

E*U2013-03-29 07:03

25 楼

恩。。有可能谢啦

【在 t****0 的大作中提到】

: I think they might be evaluating if you are qualified for h1b.

E*U2013-03-29 07:03

26 楼

今天刚拿到OFFER包裹两个星期
厚厚一沓各种文件难怪慢……
公司要求做的drug test是Quest Hair Sample，是剪头发？

口头

【在 E******U 的大作中提到】