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分子生物学弱人来问个PCR的问题
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分子生物学弱人来问个PCR的问题# Biology - 生物学
m*d
1
【 以下文字转载自 WaterWorld 讨论区 】
发信人: ruomu (ruomu), 信区: WaterWorld
标 题: 生活小常识~男友一定对你刮目相看
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Dec 11 12:10:41 2010, 美东)
1 炒茄子前,用开水焯一下或用盐腌出苦水,这样就不吸油了   2 芒果在煤气炉上
转几秒,那皮就很好剥了,番茄剥皮,用开水烫下,皮就容易剥下来了   3 普通的
铁锅,需要煎东西时,先把锅放在火上加热,倒少量油,油热后倒出,再倒入冷油,就
变成不粘锅了,煎鱼、水煎包都不粘   4 炖排骨或汤的时候,放点醋,有利有钙的
吸收   5 喝不完的大瓶装可乐,可以到过来放比较不容易漏气   6 蒸米饭,在锅
里加几滴生油。搅一搅。蒸出来的饭一粒一粒的,很好吃。而且不粘锅。   7 做猪
扒或者牛扒的时候,先将肉块用口乐浸泡10分钟再煮或煎,肉质会容易酥软美味.也
不会残留可乐的味道   8 洗黑木耳的时候放一点点面粉,会洗下很多脏东西的
9 剥大蒜之前,用水把整个蒜头泡过,去皮就很容易了。   10 煮饺子时要添足水,
待水开后加入2%的食盐,溶解后再下饺子,能增加面筋的韧性,饺子不会粘皮粘底,汤
清饺香   11 把核桃放进锅里蒸十分钟,取出放在凉水里再砸开,就能取出完整的桃
核仁了   12 将鸡蛋打入碗中,加入少许温水搅拌均匀,倒入油锅里炒时往锅里滴少
许酒,这样炒出的鸡蛋蓬松、鲜嫩、可口。   13 过多食用生葱蒜,会刺激口腔肠胃
, 不利健康,最好加一点醋再食用   14 把虾仁放进碗里,加一点精盐和食用碱粉
,抓搓一会儿后,用清水浸泡然后冲洗,炒出的虾仁会透明如水晶,爽嫩可口   15
做啤酒鸭,红烧猪蹄之类的菜式,在加水焖的时候,从炒锅里倒进电饭煲里面焖,肉更
嫩、更香、更滑、水汽还少,特别好吃   16 洗桃子的时候 ,给水里放点碱面,桃
毛自然都漂在水面,而且洗完手还不痒 ,这样洗桃绝对干净 17 喝酸奶,能解酒后烦
躁,酸奶能保护胃黏膜、延缓酒精吸收,并且含钙丰富,对缓解酒后烦躁尤其有效
18 炒肉时,先把肉用小苏打水浸泡十几分钟,倒掉水后再入味,炒出来会很嫩滑
19 洗葡萄的时候放些淀粉,随便搓一搓,就完全能把葡萄洗得亮晶晶了   20 红
薯擦成丝状,炒出来味道也很独特,通肠的效果很好   21 用刀切粘乎乎的东西(年
糕、粑粑类)前先把刀淋过冷水,就一点都不粘了   22 夹生饭重煮法:可用筷子在
饭内扎些直通锅底的孔,洒入少许黄酒重焖,若只表面夹生,只要将表层翻到中间再焖
即可   23 如何鉴别鲜蛋:新鲜蛋用灯光照,空头很小,蛋内完全透亮,呈桔红色,蛋
内无黑点,无红影。若是要测量蛋的新鲜度,可以将蛋浸在冷水里。如果蛋是平躺在水
里,说明十分新鲜;如果倾斜在水中,则该蛋至少已存放了3~5天了;若是笔直立在
水中,可能存放10天之久。此外,若是蛋浮在水面上,那么该蛋十分有可能 已经变质
了。   24 吃过于肥腻的食物后喝茶,能刺激自律神经,促进脂肪代谢
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i*2
2
要做个mutagenesis,一段 GC-rich sequence
CTCATCTTTGACCTGGGCGGGGGCaccTTCGACGTGTCCATCCTGACGATC
要把中间小写的那个acc mutate成Alanine,
感觉不管怎么设计primer,GC content都很高,Tm也很高,请教一下,该怎么设计
primer比较好?annealing temperature, extension temp多少合适?还有些什么其他
方面要注意的?
万分感谢
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i*y
3
J 点?

【在 m**d 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 WaterWorld 讨论区 】
: 发信人: ruomu (ruomu), 信区: WaterWorld
: 标 题: 生活小常识~男友一定对你刮目相看
: 发信站: BBS 未名空间站 (Sat Dec 11 12:10:41 2010, 美东)
: 1 炒茄子前,用开水焯一下或用盐腌出苦水,这样就不吸油了   2 芒果在煤气炉上
: 转几秒,那皮就很好剥了,番茄剥皮,用开水烫下,皮就容易剥下来了   3 普通的
: 铁锅,需要煎东西时,先把锅放在火上加热,倒少量油,油热后倒出,再倒入冷油,就
: 变成不粘锅了,煎鱼、水煎包都不粘   4 炖排骨或汤的时候,放点醋,有利有钙的
: 吸收   5 喝不完的大瓶装可乐,可以到过来放比较不容易漏气   6 蒸米饭,在锅
: 里加几滴生油。搅一搅。蒸出来的饭一粒一粒的,很好吃。而且不粘锅。   7 做猪

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H*i
4
又不是qRTPCR 能P出来就行了,随便设计就行,最后看看二级结构和二聚体能接受就
可以了
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d*g
5
剩下的不用看了,第一条就是胡扯
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i*2
6
现在的问题就p不出来啊

【在 H*******i 的大作中提到】
: 又不是qRTPCR 能P出来就行了,随便设计就行,最后看看二级结构和二聚体能接受就
: 可以了

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a*g
7
我承认我很色
我以为是sex知识
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g*n
8
那段 GC-rich sequence看上去没什么问题. annealing temperature一般比TM低一两度
,但是不要超过65。
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s*u
9
第一条没胡扯。。。

【在 d********g 的大作中提到】
: 剩下的不用看了,第一条就是胡扯
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o*d
10
DMSO in your PCR system could be help.
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s*l
11
对的,这些基本是饭馆里大师傅的招数。
这么做的饭出来就是饭馆味。

【在 d********g 的大作中提到】
: 剩下的不用看了,第一条就是胡扯
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H*i
12
用premier看不出那段会有什么问题。如果实在弄不出来就换个酶,比测试优化条件容
易多了。 Annealing和酶有关,我自己设计的时候引物TM一般都是65+,实际60-
65Annealing,也用过72。没啥大问题,P不出来一般都和模板有关,比如开始部分有个
terminator,超长的reverse complementary序列之类的。
另外我所有PCR都加了5%DMSO,这个有些公司推荐PCR组分里就有。
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d*g
13
我每次都用盐水泡。
但用盐泡只是去涩,和吸不吸油没啥关系。随便泡泡就改变纤维结构了?泡完了照样吸
油。

【在 s****u 的大作中提到】
: 第一条没胡扯。。。
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a*a
15
Roche,GC-Rich PCR kit
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m*7
16
推荐toyobo的kod plus酶,超好用。用GC rich 的buffer。或者用两步法。
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g*5
17
ni lei bu lei a

【在 q***7 的大作中提到】
: 你可以试一下Green BioResearch公司的二合一试剂盒,可以得到非常纯的DNA片段。他
: 们公司的质粒提取试剂盒也非常好,非常便宜。
: http://www.greenbioresearch.com/gel-extraction-pcr-purification
: http://www.greenbioresearch.com/plasmid-dna-isolation-miniprep-
: 如果只是突变3个bases而且周围有合适的酶切位点,建议你用PCR扩增出含突变的片段
: ,然后替换原来的片段就可以了。

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w*7
18
推荐toyobo的kod plus酶,超好用
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