negative 结果多了，求支招！# Biology - 生物学
h*h
1 楼
【 以下文字转载自 Hope 俱乐部 】
发信人: xiaobao1996 (1996!), 信区: Hope
标 题: 都来看漫画
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Jan 10 03:22:05 2011, 美东)
发信人: xiaobao1996 (1996!), 信区: Hope
标 题: 都来看漫画
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Jan 10 03:22:05 2011, 美东)
b*0
2 楼
简单说明一下：
1.发现一现象。
2.通过RNA-seq晒了一系列top相关的基因。
3.先期 定了3个基因的siRNA，knockdown 基因之后（qPCR确认knockdown），对现象无
影响。十分懊恼。
不知是否再 继续 花钱 购买其余相关基因siRNA？
看牛人有什么高招，求指教！
多谢！
1.发现一现象。
2.通过RNA-seq晒了一系列top相关的基因。
3.先期 定了3个基因的siRNA，knockdown 基因之后（qPCR确认knockdown），对现象无
影响。十分懊恼。
不知是否再 继续 花钱 购买其余相关基因siRNA？
看牛人有什么高招，求指教！
多谢！
l*e
3 楼
这个太好笑，太可爱了
I*a
4 楼
3个是不是很少？
l*y
5 楼
所谓top相关的标准是啥
如果出来十个先挑了三个做那就接着往下试
如果几百个里挑的那就要再想想
如果出来十个先挑了三个做那就接着往下试
如果几百个里挑的那就要再想想
z*q
6 楼
or overexpress/drug treatment to rescue
B*n
7 楼
3个实在是太少，30个都不多
条件允许的话，上300个，不允许上30个
条件允许的话，上300个，不允许上30个
D*s
8 楼
应该在RNA-seq之后再做qPCR来validate筛到的基因在你的实验条件下确实有变化
然后再做siRNA
【在 b*******0 的大作中提到】
: 简单说明一下：
: 1.发现一现象。
: 2.通过RNA-seq晒了一系列top相关的基因。
: 3.先期 定了3个基因的siRNA，knockdown 基因之后（qPCR确认knockdown），对现象无
: 影响。十分懊恼。
: 不知是否再 继续 花钱 购买其余相关基因siRNA？
: 看牛人有什么高招，求指教！
: 多谢！
然后再做siRNA
【在 b*******0 的大作中提到】
: 简单说明一下：
: 1.发现一现象。
: 2.通过RNA-seq晒了一系列top相关的基因。
: 3.先期 定了3个基因的siRNA，knockdown 基因之后（qPCR确认knockdown），对现象无
: 影响。十分懊恼。
: 不知是否再 继续 花钱 购买其余相关基因siRNA？
: 看牛人有什么高招，求指教！
: 多谢！
b*0
9 楼
多谢楼上的几位达人！
Top 相关的标准是:
1.与靶基因在不同条件下（不同条件>3）表达相关（细胞内，组织都验证过）。
2.基因变化qPCR 验证过。
筛选了 20，30个基因。
购买的siRNA 比较贵，dharmacon pool 一个400多刀。替老板心疼钱啊。 就先定了3个
看看结果，要是positive的话，估计老板下血本。可是不如愿，三个都是negative。心
烦啊！
通常要晒多少个，真的要30几个？ 因为是第一次做高通量筛选，不太明白。
Top 相关的标准是:
1.与靶基因在不同条件下（不同条件>3）表达相关（细胞内，组织都验证过）。
2.基因变化qPCR 验证过。
筛选了 20，30个基因。
购买的siRNA 比较贵，dharmacon pool 一个400多刀。替老板心疼钱啊。 就先定了3个
看看结果，要是positive的话，估计老板下血本。可是不如愿，三个都是negative。心
烦啊！
通常要晒多少个，真的要30几个？ 因为是第一次做高通量筛选，不太明白。
G*Y
10 楼
Invitrogen has cheaper one.didn't knowdown completely even it is showing 90%
.You should optimize conditions.Mine is only showing positive on invasive
assay.
【在 b*******0 的大作中提到】
: 多谢楼上的几位达人！
: Top 相关的标准是:
: 1.与靶基因在不同条件下（不同条件>3）表达相关（细胞内，组织都验证过）。
: 2.基因变化qPCR 验证过。
: 筛选了 20，30个基因。
: 购买的siRNA 比较贵，dharmacon pool 一个400多刀。替老板心疼钱啊。 就先定了3个
: 看看结果，要是positive的话，估计老板下血本。可是不如愿，三个都是negative。心
: 烦啊！
: 通常要晒多少个，真的要30几个？ 因为是第一次做高通量筛选，不太明白。
.You should optimize conditions.Mine is only showing positive on invasive
assay.
【在 b*******0 的大作中提到】
: 多谢楼上的几位达人！
: Top 相关的标准是:
: 1.与靶基因在不同条件下（不同条件>3）表达相关（细胞内，组织都验证过）。
: 2.基因变化qPCR 验证过。
: 筛选了 20，30个基因。
: 购买的siRNA 比较贵，dharmacon pool 一个400多刀。替老板心疼钱啊。 就先定了3个
: 看看结果，要是positive的话，估计老板下血本。可是不如愿，三个都是negative。心
: 烦啊！
: 通常要晒多少个，真的要30几个？ 因为是第一次做高通量筛选，不太明白。
g*5
11 楼
sigma one siRNA ask $75 if you provide sequence.
【在 b*******0 的大作中提到】
: 多谢楼上的几位达人！
: Top 相关的标准是:
: 1.与靶基因在不同条件下（不同条件>3）表达相关（细胞内，组织都验证过）。
: 2.基因变化qPCR 验证过。
: 筛选了 20，30个基因。
: 购买的siRNA 比较贵，dharmacon pool 一个400多刀。替老板心疼钱啊。 就先定了3个
: 看看结果，要是positive的话，估计老板下血本。可是不如愿，三个都是negative。心
: 烦啊！
: 通常要晒多少个，真的要30几个？ 因为是第一次做高通量筛选，不太明白。
【在 b*******0 的大作中提到】
: 多谢楼上的几位达人！
: Top 相关的标准是:
: 1.与靶基因在不同条件下（不同条件>3）表达相关（细胞内，组织都验证过）。
: 2.基因变化qPCR 验证过。
: 筛选了 20，30个基因。
: 购买的siRNA 比较贵，dharmacon pool 一个400多刀。替老板心疼钱啊。 就先定了3个
: 看看结果，要是positive的话，估计老板下血本。可是不如愿，三个都是negative。心
: 烦啊！
: 通常要晒多少个，真的要30几个？ 因为是第一次做高通量筛选，不太明白。
o*n
12 楼
亲，做了3个没做出来就叫negative多呀，叫我做lncRNA的情何以堪
a*n
13 楼
是啊，
10个hypothesis 中一个是对的就是不错的科学家了
5个中一个对的就是小牛了
3个中一个对的就是大大牛了
10个中没一个对的，但让别人相信是全对的就是千王之王了。
【在 o**********n 的大作中提到】
: 亲，做了3个没做出来就叫negative多呀，叫我做lncRNA的情何以堪
10个hypothesis 中一个是对的就是不错的科学家了
5个中一个对的就是小牛了
3个中一个对的就是大大牛了
10个中没一个对的，但让别人相信是全对的就是千王之王了。
【在 o**********n 的大作中提到】
: 亲，做了3个没做出来就叫negative多呀，叫我做lncRNA的情何以堪
b*0
14 楼
亲，可老板不这么认为啊。
3个negative 颇受打击。
诱惑老板继续投钱，鸭梨山大啊。
【在 a*********n 的大作中提到】
: 是啊，
: 10个hypothesis 中一个是对的就是不错的科学家了
: 5个中一个对的就是小牛了
: 3个中一个对的就是大大牛了
: 10个中没一个对的，但让别人相信是全对的就是千王之王了。
3个negative 颇受打击。
诱惑老板继续投钱，鸭梨山大啊。
【在 a*********n 的大作中提到】
: 是啊，
: 10个hypothesis 中一个是对的就是不错的科学家了
: 5个中一个对的就是小牛了
: 3个中一个对的就是大大牛了
: 10个中没一个对的，但让别人相信是全对的就是千王之王了。
f*n
15 楼
亲，叫我做前3个ko都是negative的情何以堪
【在 o**********n 的大作中提到】
: 亲，做了3个没做出来就叫negative多呀，叫我做lncRNA的情何以堪
【在 o**********n 的大作中提到】
: 亲，做了3个没做出来就叫negative多呀，叫我做lncRNA的情何以堪
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