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哪位有细胞冻存液的配方？

哪位有细胞冻存液的配方？# Biology - 生物学

l*e2013-11-06 08:11

1 楼

最近更新了一下CV，主要是把一个才拿到的grant列了上去，希望能让SC觉得有拿
funding的潜力。但是之前已经申请过的位置，有必要再重新发过去一遍么？
有些是通过在线系统比如acajobonline或者interfolio submit的，已经重新upload了
。但是有些是通过email submit的，有点犹豫再写一封email解释一下blablabla。。。
多谢建议

c*g2013-11-06 08:11

2 楼

准备交I-485、I-765和I-131。I-485需要同时提交两张照片，I-765也需要同时提交两
张照片，而I-131不需要交照片。我的上述理解对吗？请有经验的同胞帮我确认一下，
非常感谢！

a*92013-11-06 08:11

3 楼

是那种fibrex 的窗户。8000包括everything.
直接找anderson的人安，还是找别人安好呢？
谢谢

c*m2013-11-06 08:11

4 楼

【以下文字转载自 Sex 讨论区】
发信人: clarkson (ILikePeace), 信区: Sex
标题: 我发觉身边的一个现象。
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Feb 3 22:23:03 2010, 美东)
走了很多路，看了很多人，发觉
男人在选择配偶的时候，还是乳房优先。
1。我从来没有看见那个美胸，或者大胸的女性很久
没有男朋友或者结婚。
2。相貌差不多的女人抢男人，大胸胜。
3。各个征婚网站的，贴出来的女性照片大都小胸。
4。我的女同学，胸大的找工作容易，找的工作好。
5。男生寝室，夜谈，谈到最多的还是胸大的。有意识或者无意识的。
。。。。。
经历了好多，才发现人的动物性很强。
终于明白，美国白妹妹忙着买药长胸，银行，保险等窗口行业胸大的多，
哪怕是大的老胸。。。。。。：）

i*a2013-11-06 08:11

5 楼

新闻联播里面说:某地因大雪学校停课！老师和教务主任不顾寒冷为同学们踏雪送去了
寒假作业！新闻评论道:同学们终于能过一个好年！
好可怜的孩子们。。。

d*i2013-11-06 08:11

6 楼

我的配方是
7mL DMEM+10%FBS+抗生素 (就是常规培养基)
2mL FBS
1mL DMSO
细胞冻存后复苏的时候活细胞太少了。。。。
谢谢！

x*52013-11-06 08:11

7 楼

拿到grant是个很重要的update
为什么不更新？

【在 l**********e 的大作中提到】

: 最近更新了一下CV，主要是把一个才拿到的grant列了上去，希望能让SC觉得有拿
: funding的潜力。但是之前已经申请过的位置，有必要再重新发过去一遍么？
: 有些是通过在线系统比如acajobonline或者interfolio submit的，已经重新upload了
: 。但是有些是通过email submit的，有点犹豫再写一封email解释一下blablabla。。。
: 多谢建议

y*e2013-11-06 08:11

8 楼

都要，一共六张

准备交I-485、I-765和I-131。I-485需要同时提交两张照片，I-765也需要同时提交两
张照片，而I-131不需要交照片。我的上述理解对吗？请有经验的同胞帮我确认一下，
非常感谢！

【在 c******g 的大作中提到】

: 准备交I-485、I-765和I-131。I-485需要同时提交两张照片，I-765也需要同时提交两
: 张照片，而I-131不需要交照片。我的上述理解对吗？请有经验的同胞帮我确认一下，
: 非常感谢！

h*82013-11-06 08:11

9 楼

找门窗公司装过普通牌子的bay window，才3000刀。（不是圆的bow window）

e*r2013-11-06 08:11

10 楼

老天想照顾都不行。

【在 i*********a 的大作中提到】

: 新闻联播里面说:某地因大雪学校停课！老师和教务主任不顾寒冷为同学们踏雪送去了
: 寒假作业！新闻评论道:同学们终于能过一个好年！
: 好可怜的孩子们。。。

X*82013-11-06 08:11

11 楼

万能冻存液：15％DMSO (或甘油，可到20％）,20％FBS＋70％基本培养基。要不就买吧
。

l*e2013-11-06 08:11

12 楼

多谢多谢，这个grant有将近1M，觉得不更新一下太亏了。。
但是有些原始的广告已经找不到了，没有对应的链接或者联系人的email，这种要怎么
搞呢？
还有一个问题就是是写一封generic的email群发（收件人不能看到其他人的那种方式）
还是一封一封的重新发（这样每个系的名字就会写上去，但是太多了。。）

【在 x*******5 的大作中提到】

: 拿到grant是个很重要的update
: 为什么不更新？

g*e2013-11-06 08:11

13 楼

6.

【在 c******g 的大作中提到】

d*s2013-11-06 08:11

14 楼

Anderson overvalued.
有中国人把这种窗户分几个小窗户装，就几百。对resale value也没有什么影响。

k*e2013-11-06 08:11

15 楼

帘外雪潺潺，
意兴阑珊，
童心不耐作业烦。
稚子不知身是客，
十年贪欢。
双双凭木栏，
无限江山，
昨日还在其中玩。
流水落花何时有？
只待来年。

【在 i*********a 的大作中提到】

c*r2013-11-06 08:11

16 楼

也可以90%fbs+10%dmso

【在 X*******8 的大作中提到】

: 万能冻存液：15％DMSO (或甘油，可到20％）,20％FBS＋70％基本培养基。要不就买吧
: 。

s*y2013-11-06 08:11

17 楼

你这个情况必须更新，因为是非常重要的信息。
对于这种情况可以群发没有关系，不需要每个系单独写。
如果不记得联系人，直接和对方系主任或者系大密联系问他要联系人的方式。

【在 l**********e 的大作中提到】

: 多谢多谢，这个grant有将近1M，觉得不更新一下太亏了。。
: 但是有些原始的广告已经找不到了，没有对应的链接或者联系人的email，这种要怎么
: 搞呢？
: 还有一个问题就是是写一封generic的email群发（收件人不能看到其他人的那种方式）
: 还是一封一封的重新发（这样每个系的名字就会写上去，但是太多了。。）

x*S2013-11-06 08:11

18 楼

RE

【在 y***e 的大作中提到】

: 都要，一共六张
:
: 准备交I-485、I-765和I-131。I-485需要同时提交两张照片，I-765也需要同时提交两
: 张照片，而I-131不需要交照片。我的上述理解对吗？请有经验的同胞帮我确认一下，
: 非常感谢！

X*82013-11-06 08:11

19 楼

呵呵，如果FBS不要钱的话。

【在 c******r 的大作中提到】

: 也可以90%fbs+10%dmso

M*P2013-11-06 08:11

20 楼

你这是来BSO的吧

【在 l**********e 的大作中提到】

c*g2013-11-06 08:11

21 楼

非常感谢以上几位回复。现在清楚了。

c*r2013-11-06 08:11

22 楼

呵呵

【在 X*******8 的大作中提到】

: 呵呵，如果FBS不要钱的话。

f*y2013-11-06 08:11

23 楼

一定要更新。我在search committee. 这个太重要了。

d*i2013-11-06 08:11

24 楼

万能冻存液：15％DMSO (或甘油，可到20％）,20％FBS＋70％基本培养基。要不就买吧。
你这个跟我的差不多啊。基本培养基是什么都没有的吧？

【在 X*******8 的大作中提到】

: 万能冻存液：15％DMSO (或甘油，可到20％）,20％FBS＋70％基本培养基。要不就买吧
: 。

f*y2013-11-06 08:11

25 楼

发给sc chair. 或者系主任。

: 一定要更新。我在search committee. 这个太重要了。

【在 f********y 的大作中提到】

: 一定要更新。我在search committee. 这个太重要了。

M*r2013-11-06 08:11

26 楼

90% FCS+10% DMSO

G*G2013-11-06 08:11

27 楼

请问acajobonline的推荐信，你是申请的时候，就让推荐人发送吗？
还是等他们通知你发送的时候再发送？

【在 l**********e 的大作中提到】

X*82013-11-06 08:11

28 楼

嗯，基本培养基是什么都没有的。也可以完全用血清，象前面有人说的。差别不会太大
。不行就从Invitrogen买吧。

吧。

【在 d****i 的大作中提到】

:
: 万能冻存液：15％DMSO (或甘油，可到20％）,20％FBS＋70％基本培养基。要不就买吧。
: 你这个跟我的差不多啊。基本培养基是什么都没有的吧？

l*e2013-11-06 08:11

29 楼

一般都是申请的时候直接send request，推荐人会收到email然后上传

【在 G***G 的大作中提到】

: 请问acajobonline的推荐信，你是申请的时候，就让推荐人发送吗？
: 还是等他们通知你发送的时候再发送？

d*i2013-11-06 08:11

30 楼

好吧，我就用个贵的。
搜索了一下看有人用85%的 FBS + 15%的DMSO。

【在 M********r 的大作中提到】

: 90% FCS+10% DMSO

l*e2013-11-06 08:11

31 楼

马老师误会了，我的case比较弱，哪敢BSO..
我的情况其实以前也在板上问过，我现在不在美帝，在另一个英语国家，怕被人肉就不
说了。种种原因必须要move回去，虽然目前在所在的学校做的还行，加上去年刚来申请
的grant，和美帝的一个小grant，也大概有1.5M了，参考了一下系里其他人的case，在
这里应该能够有一个长期的career发展。不过无奈还是要折腾。
之所以发这个帖子就是犹豫这里的funding experience到底会不会被sc看重，可能只有
美帝的那个小grant能够带走。Anyway，刚才已经苦战半天把CV重新发了一遍，希望能
有好运。

【在 M*P 的大作中提到】

: 你这是来BSO的吧

s*s2013-11-06 08:11

32 楼

大多数就这个啦, 万能.

【在 c******r 的大作中提到】

: 也可以90%fbs+10%dmso

s*s2013-11-06 08:11

33 楼

话说50ml FBS也才十来块钱. 我认为每年消耗的试剂至少和工资持平
才行; 很受不了有些实验室省钱但是浪费时间的各种行为

【在 X*******8 的大作中提到】

: 呵呵，如果FBS不要钱的话。

M*r2013-11-06 08:11

34 楼

嗯哪, 50ml可以冻60管细胞了, 十几美元。
你冻的细胞都死，从新开始，耽误时间、浪费试剂。捡了芝麻掉了西瓜啊。

【在 s******s 的大作中提到】

: 话说50ml FBS也才十来块钱. 我认为每年消耗的试剂至少和工资持平
: 才行; 很受不了有些实验室省钱但是浪费时间的各种行为

c*r2013-11-06 08:11

35 楼

我觉得lz那个配方也不是不可以，一般的cell lines也能recover 90%以上。可能不是
冻存液的问题而是使用保存方法等的问题。

【在 M********r 的大作中提到】

: 嗯哪, 50ml可以冻60管细胞了, 十几美元。
: 你冻的细胞都死，从新开始，耽误时间、浪费试剂。捡了芝麻掉了西瓜啊。

M*r2013-11-06 08:11

36 楼

用冻存盒没有？
异丙醇要定期更换新鲜的
－70度冻4小时后要尽快移到液氮不要过好几天才转移到液氮
复苏要迅速，37度水浴，转移到15ml培养基后150g离心5min，用培养基重悬

【在 d****i 的大作中提到】

: 我的配方是
: 7mL DMEM+10%FBS+抗生素 (就是常规培养基)
: 2mL FBS
: 1mL DMSO
: 细胞冻存后复苏的时候活细胞太少了。。。。
: 谢谢！

l*12013-11-06 08:11

37 楼

Stem Cell ?

【在 d****i 的大作中提到】

: 我的配方是
: 7mL DMEM+10%FBS+抗生素 (就是常规培养基)
: 2mL FBS
: 1mL DMSO
: 细胞冻存后复苏的时候活细胞太少了。。。。
: 谢谢！

s*k2013-11-06 08:11

38 楼

冻前细胞生长状态？log phase?

【在 c******r 的大作中提到】

: 我觉得lz那个配方也不是不可以，一般的cell lines也能recover 90%以上。可能不是
: 冻存液的问题而是使用保存方法等的问题。

c*r2013-11-06 08:11

39 楼

很多地方可能出问题，包括保存，解冻。这东西说容易其实很容易，但是也不少步骤。
出点儿问题也很正常。慢慢摸索，问问周围的人就好了

【在 s***k 的大作中提到】

: 冻前细胞生长状态？log phase?

D*R2013-11-06 08:11

40 楼

Need to consider followings: total cell /live cell before Freeze,起始细胞不
能太少1e6-10e6 /vial，freeze protocol，直接放冰箱还是用machine protocol几分
钟降几度到-70c？ thawing protocol.

S*92013-11-06 08:11

41 楼

95% FBS + 5% DMSO
一年能花几个钱冻细胞啊？

T*u2013-11-06 08:11

42 楼

不至于那么穷吧不至于吧

【在 X*******8 的大作中提到】

: 呵呵，如果FBS不要钱的话。